卵磷脂的生产(精品)

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,卵磷脂的生产,项目原理,卵磷脂可在植物的水化油或动物的脑和蛋黄中提取,尤以蛋黄中含量最高,.,.,卵磷脂不溶于极性溶剂,尤其是丙酮,故常以丙酮作为卵磷脂的沉淀剂,.,丙酮可除去卵磷脂中的油，脱去多余的水,同时因细胞结构成份的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开，促使某些结合酶释放到溶液中,在乙醇浓度大于,95%,前，提取剂的性质和卵磷脂的性质越来越相似,使卵磷脂在其中的溶解度增加,.,但当用无水乙醇时，提取剂的极性过强,造成卵磷脂溶解度降低,所以选用,95%,的乙醇提取最好。,项目器材与试剂,仪器：电热恒温水浴；强力电动搅拌器；旋转蒸发器；真空干燥箱；薄层色谱扫描仪；冻干机,试剂：无水乙醇、,95%,乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、甲醇、钼酸铵、硅胶,G,、羧甲基纤维素,Na,（以上试剂均为分析纯）,鸡蛋,项目步骤概述,以鸡蛋的卵黄为原料，采用含水乙醇与乙醚提取，通过丙酮脱水去油，得到粗品卵磷脂；,进一步以氯仿,/,甲醇为洗脱液，硅胶柱层析法分离纯化自制的粗品卵磷脂，得到高纯度的纯白色固体卵磷脂。,由薄层色 谱定性检测，仅含一个斑点；用薄层扫描仪定量检测纯度大于,97.4%,项目步骤,蛋黄卵磷脂的粗提,首先将蛋黄均质放入带塞瓶中备用，称取,10ml,均质蛋黄放入洁净的带塞三角瓶中，加入两倍体积的,95%,乙醇，混合搅拌，离心,5min,（,3000r/min),；取上清液，然后加入,1/3,乙醇用量的乙醚，搅拌,15min,后，静置,接着过滤；滤渣进行二次提取，加入乙醇与乙醚的混合液,(,体积比为,3:1),，无需搅拌静置浸渍；,第二次过滤，合并二次液，在旋转蒸发器中,60,蒸馏至近干。加入一定量丙酮除杂，卵磷脂即沉淀出来，过滤，滤饼用丙酮冲洗几次，至到冲洗液无色，即得到卵磷脂粗品，在真空干燥箱中干燥后，充入氮气低温保存。,柱层析分离纯化卵磷脂,将适量的柱硅胶,(60,100,目,),用氯仿打成浆状，湿法装柱，准确称量卵磷脂粗品,(EPC)2.63g,用尽可能少的氯仿溶解后，倒入柱子内。用不同浓度梯度的氯仿,/,甲醇混合液连续冲洗,(,氯仿,:,甲醇分别用,40:1,、,35:1,、,30:1,、,25:1,、,20:1,、,15:1,、,10:1,、,5:1,、,1:1,、,2:3,、,1:2,、,1:3),，每个浓度以,100ml,总量分批加入，当加入氯仿,/,甲醇浓度为,1:1,时，以后的溶液加入量根据需要变大，即洗脱液梯度变化要慢些。,根据柱中色带及薄层层析不停的检测收集液的结果，分开收集各种不同成份的洗脱液，把出现单一斑点，且在同一块薄层板上与标品卵磷脂有同一,R f,值的洗脱液收集在一起，然后旋转蒸发浓缩成膏状，再在冻干机上干燥，即得我们所期望的纯白色的卵磷脂精品，充入氮气低温保存。,卵磷脂的检测,利用薄层色谱为主要的定性检测手段，再利用薄层扫描仪，对所制得的卵磷脂样品进行定性和定量检测。将一定量的硅胶,G,与一定量的浓度为,0.4%,0.5%,的,CMC-Na,溶液调匀制薄层板，根据不同的要求在活化好的板上点样。展开溶剂为氯仿,:,甲醇,:,水,(65:25:4,V/V),。采用钼酸铵为显色剂，在,130,左右烘干显色。对卵磷脂标准品和样品的对应薄层斑点作光谱扫描图，确定以,50nm,为测定波长，灵敏度,x=1,，狭缝宽,1.21.2,，线性化,Sx,=3,，作反射法锯齿扫描。,谢谢观看,