液相增加柱效、提高灵敏度的小诀窍

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,液相增加柱效、提高灵敏度的小诀窍,资料收集：,生化 多肽- 5988-6316EN,升温对于反相 HPLC分离强疏水肽的影响 (B27),Polypeptide,流动相:,A: 含0.05%三氟乙酸的水,B: 含0.05%三氟乙酸的乙腈,2% B / min,进样量: 100L (50g的6M脲/5%乙酸),UV: 210 nm,流速: 1 mL/min,室温,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5m,室温,30,0,C,40,0,C,50,0,C,60,0,C,70,0,C,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）,环保,样品: 除草剂,流动相: 52/48 0.1 M乙酸钠/甲醇, pH 6,流速: 0.45 mL/min,温度: 40, 90,检测: UV,除草剂: 柱温的影响,Herbicides: Effect of Column Temperature,1. 西玛津,2. 敌草隆,3. 扑灭津,4. 扑灭净,5. 异丙甲草胺,1. Simazine,2. Diuron,3. Propazine,4. Prometryn,5. etolachlor,液相色谱柱: Zorbax StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5m,40,90,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱: Zorbax 300 StableBond-C3,色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5m,肽类/蛋白质: 升温对分离的影响,Peptides/Proteins:,Effect of Elevated Temperature,样品: 多肽,流动相: A = 5: 95, 乙腈 : 水, 0.10%三氟乙酸 (V/V%),B = 95: 5, 乙腈 : 水, 0.085%三氟乙酸 (V/V%),梯度: 在 20 min内 15-53%, 后运行时间 12 min,流速: l.0 mL/min,温度: 室温 -60,检测: UV 215 nm,1. 亮氨酸脑啡呔,2. 血管紧张素II,3. 核糖核酸酶A,4. 牛胰岛素,5. 细胞色素C,6. 溶菌酶,7. 肌红蛋白,8. 碳酸酐酶,1.Leucine Enkephalin,2. Angiotensin II,3. Rnase A,4. Insulin(BOV),5. Cytochrome C,6. Lysozyme,7. Myoglobin,8. Carbonic anhydrase,提高柱温，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱: Zorbax StableBond-C8,色谱柱尺寸: 150 mm, 5m,减小毛细管内径来提高,低浓度样品的检测灵敏度,Reducing Capillary ID to Improve Sensitivity,for Concentration-Limited Samples,流动相: 60%乙腈/40%水,流速: 内径 0.3 mm-4 uL/min,内径 0.5 mm-10 uL/min,内径 1.0 mm-50 uL/min,内径 4.6 mm-1.0 uL/min,温度: 室温,检测器: UV 254 nm,样品: 200 ng联二苯 (100 nl),减小柱径，可增加柱效（提高灵敏度）,色谱柱技术 5988-6454EN,使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (TE32),液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6 x 15 mm 3.5m,流动相:,乙腈: 1%甲酸=32: 68,UV: 254 nm,流速: 1.0 mL / min.,30C,进样量: 5 L,响应时间: 4.0秒,响应时间: 2.0秒,响应时间: 1.0秒,响应时间: 0.5秒,响应时间: 0.1秒,1.尿嘧啶,2.乙酰水杨酸,3.N-乙酰苯胺,1.Uracil,2.Acetylsalicylic acid,3.Acetanilide,缩短检测器响应时间，可增加柱效 （提高灵敏度）,色谱柱技术 ：不同硅胶类型比较 (TE1),流动相:,含0.05%甲醇的二氯甲烷,液相色谱柱,toluene,benzanilide,phenol,benzyl alcohol,Zorbax Sil,Spherisorb,Zorbax Rx-Sil,甲苯,N-,苯甲酰苯胺,苯酚,苯甲醇,使用高纯硅胶，,可增加柱效,（提高灵敏度）,有机化学 5988-6366EN,pH对苯胺取代物分析的影响 (ORCH1),流动相,25mM磷酸: 甲醇=58: 42,流速:,1 mL/min,22C,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,对位甲氧基苯胺,间位苯甲胺,3-氨基-苯甲腈,对位氯苯胺,间位氯苯胺,邻位氯苯胺,pH: 2.5,pH: 7.0,改变流动相pH，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生化 肽 5988-6293EN,三氟乙酸浓度对于反相肽的分离的影响 (B10),Peptide,流动相:,A: 水和三氟乙酸,B: 乙腈和三氟乙酸,0 - 30% B （30 min.内）,流速: 1 mL/min,UV: 254 nm,进样量: 6uL,十肽菌素标样S1-S5（疏水性有略微差异）,40,C,液相色谱柱: ZORBAX 300 SB-C8,色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,1.0%三氟乙酸,0.05%三氟乙酸,0.25%三氟乙酸,改变流动相pH，,可增加柱效,（提高灵敏度）,食品分析 5988-6360EN,流动相强度对单糖和二糖分离的影响 (FD4),流动相:,乙腈/水如图,流速: 1 mL/min,示差折光检测器,液相色谱柱: ZORBAX NH2,色谱柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5m,果糖,葡糖,蔗糖,Palatinose,海藻糖,异麦芽糖,乙腈/水,70/30,乙腈/水,75/25,改变有机相%，,可增加柱效,（提高灵敏度）,色谱柱技术 5988-6468EN,有机改性剂和pH对于选择性的影响 (TE5),流动相:,25 mM磷酸缓冲液,流速:,1,.0 mL/min.,22C,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-CN,色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,anisidine,m-toluidine,4-cl-aniline,3-aminobenzonitrile,3-cl-aniline,2-cl-aniline,甲氧基苯胺,间位苯甲胺,4-氯-苯胺,3-氨基苯甲腈,3-氯-苯胺,2-氯-苯胺,42%甲醇 ：58%缓冲液 30%甲醇 ：70%缓冲液,pH 2.6,pH 3.0,改变有机相%，,可增加柱效,（提高灵敏度）,色谱柱技术 5988-6453EN,ZORBAX Eclipse系列色谱柱的选择性 (TE31),液相色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl,色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,流动相:,甲醇 : 水=70: 30,UV: 254 nm,流速: 1.0 mL / min.,室温,Zorbax Eclipse XDB-苯基,Zorbax Eclipse XDB-C8,Zorbax Eclipse XDB-C18,1.尿嘧啶,2.苯酚,3.4-氯-硝基苯,4.甲苯,5.萘,1.Uracil,2.Phenol,3.4-Cl-nitrobenzene,4.Toluene,5.Naphthalene,改变键合相，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱: Zorbax Extend-C18,色谱柱尺寸: 2.1 x 150 mm, 5um,三氟乙酸和氢氧化铵用于肽类,RP-HPLCESI-MS分离的选择性比较,Selectivity Comparison of TFA and,NH,4,OH for Peptide RP-HPLCESI-MS Analysis,流速: 0.25 mL/min.,温度: 25,梯度: 5-60% B in 20 min.,LC/MS: 正离子, ESI- Vf 70V, Vcap 4.5 kV,N2- 35 psi, 12 L/min., 300,样品: 4L (各50 ng),三氟乙酸条件:,A- 0.1%三氟乙酸水溶液,B-0.085%三氟乙酸 80%的乙腈溶液,NH4OH条件:,A- 20 mM NH4OH水溶液,B- 20 mM NH4OH 80%的乙腈溶液,改变有机添加剂，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生化 ,肽 ,十肽菌素 5988-6299EN,酸对于反相肽的分离的影响(B16),decapeptide,液相色谱柱: ZORBAX 300 SB-C8,色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,十肽菌素,S1,十肽菌素,S2,十肽菌素,S3,十肽菌素,S4,十肽菌素,S5,decapeptide,S1,decapeptide,S2,decapeptide,S3,decapeptide,S4,decapeptide,S5,0.1% 三氟乙酸,0.025 M H,3,PO,4,改变有机添加剂,可增加柱效,（提高灵敏度）,流动相:,A: 含相应的酸的水相,B: 含相应的酸的乙腈,0%-30% B（30 min.内）,进样量: 6L肽标样,UV: 254 nm,流速: 1 mL/min,40C,色谱柱技术 流动相对色谱的影响(TE40),液相色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8,色谱柱尺寸: 4.6 x 50 mm 3.5m,UV: 254 nm,流速: 1 mL/ min.,室温,Uracil,Butylparaben,Naphthalene,Dipropylphthalate,Acenaphthene,尿嘧啶,尼帕尔金丁酯,萘,二丙基邻苯二甲酸酯,苊,刻度混合: Dial-a-Mix,A: 水 B: 甲醇, 用泵抽取50% B,体积比混合: Vol/Vol,250 mL水 + 250 mL甲醇, 用泵抽取100%混合液,定容混合: Mix-to-Mark,250 mL甲醇, 用水定容至500 mL, 用泵抽取100%混合液,预混合（重量比混合）: Premixed (w/w),200 g甲醇 + 200 g水, 用泵抽取100%混合液,改变流动相配比方式，可增加柱效,（提高灵敏度）,谢谢观看！,资料收集：,