实验九金免疫技术精共34张课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验九金免疫技术,实验目的,口了解胶体金和免疫金的制备方法,口了解蛋白质最适标记量的确定,口了解斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析,试验原理,口掌握金免疫测定技术,实验内容,口胶体金的制备,免疫金的制备,口斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验,口尿HcG测定-斑点金兔疫层析试验,口金免疫技术:以胶体金作为标记物的免疫标记技术。,口胶体金:指金微小粒子(1-100nm)分散在溶液,中所形成的金溶液。是由金盐被还原成原金后形成,的金颗粒悬液。,用金溶胶标记蛋白质(抗原、抗体或SPA、SPG,口胶体金具有髙电子密度的特性,故金标蛋白抗原抗,体结合处,显微镜下可见黑色颗粒;当这些标记物,在标记处大量聚集时,可在载体膜上呈现肉眼可见,红色或粉红色斑点,以此用于抗原抗体物质的定位,或定性,分类,金免疫组化染色技术,1.金(银)兔疫光镜染色技术,2.金免疫电镜染色技术,3.二、金免疫测定技术,4.斑点金免疫渗滤试验,5.斑点金免疫层析试验,第一节胶体金与免疫金的制备,口一、胶体金的特性及制备,口1、结构,口胶体金颗粒由一个基础金核(原子金,Au)及包围在外的双离子层构成,紧,连在金核表面的是内层负离子,胶粒的双电层结,(Aucl2),外层离子层(H+)则分构示意图,散在胶体间溶液中,以维持胶体金游离,于溶胶间的恳液状态。,形状:小的胶体金颗粒(1-30nm),呈球形,大的胶体金颗粒(30,100nm)呈椭圆形,口2、胶体金的一般性状,口稳定性:稳定地、均匀地、呈单一分散状态,悬浮在液体中,成为胶体金溶液。,口对电解质的敏感性:打破胶体金的稳定,使分散的金颗粒凝聚成大颗粒,而从液体中,沉淀下来。,影响胶体金溶液稳定性的因素,口1、胶粒间的相互吸引力。当胶粒相距很近时,这,种吸引力可能导致胶粒合并变大,2、水化层的带电情况。一种溶胶的各个胶粒都带,有相同的电荷。同性电荷相斥,双电层愈厚,胶粒,带电量愈大,排斥力愈大,愈能阻止胶粒合并聚结,溶胶愈稳定。,口3、胶体界面的溶剂膜,当二固体间夹有一厚层液,体时,这层液体膜有一个反抗二固体接近的排斥力。,两个胶粒要进一步接近,只有克服它们之间的溶剂,化膜的斥力才有可能,因此溶剂膜的斥力是使溶胶,稳定的原因之,颜色和光吸收性,四种粒径胶体金的制备及特性,胶体金粒径1%柠檬酸钠加入量,胶体金特性,(m),呈色,入max(n,nm,16,2.00,橙色,518,24.5,1.50,橙红色,522,41,1.00,红色,525,71.5,0.70,紫色,535,通过改变柠檬酸钠的用量可制得不同大小的胶体金颗粒,3、胶体金的制备方法,口原璞实滚度的金资德加=定星,离子,液,口见的还原剂:自磷、乙醇、枸橼酸钠、,