动物细胞融合和单克隆抗体

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,请同学们在课本,P32,页上找出：,1.,细胞融合的概念,2.,诱导动物细胞融合的方法,3.,意义,并用笔画出来,2.2.2,动物细胞融合与单克隆抗体,2.,动物细胞融合过程：,诱导,细胞膜穿通,细胞膜融合,细胞核融合，形成单核杂种细胞,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞,A,植物细胞,B,原生质体,A,原生质体,B,植物体细胞杂交,去壁,原生质体融合,植物组织培养,物理法,化学法,生物法：,灭活的病毒,动物细胞,A,动物细胞,B,杂种细胞,常用方法,4,、原理,膜的流动性,5,、最有价值的应用,制备单克隆抗体,3,、过程,不同,DNA,的两个细胞,灭活的病毒,PEG,杂交细胞,细胞融合完成的标志,:,细胞核融合成一个核,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,膜的流动性,膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,、植物、动物细胞融合的比较,1.,能使动物细胞融合的特有的诱导方法是,A,离心,B,灭活的病毒,C,电刺激,D,振动,B,2.,动物细胞融合的目的中最重要的是,A,克服远源杂交不亲和,B,制备单克隆抗体,C,培育新物种,D,生产杂种细胞,B,原始的方法,获得抗体，特异性差，纯度低。,想获得单一抗体,，必须用单个,B,淋巴细胞进行无性繁殖，通过克隆形成细胞群。,问题：,体外培养的条件下，,一个,B,淋巴细胞是不可能无限增值的,，如何使单个淋巴细胞增殖呢？,单克隆抗体的制备,设计方案：,一个,B,淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,杂种细胞,1,、单克隆抗体制备过程,注射,抗原,效应,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,细胞融合、筛选,杂交瘤细胞,细胞培养,筛选，继续培养,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,体外培养,注射到小鼠腹腔,单克隆抗体,诱导其融合的方法有哪些？,（,1,）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与,B,淋巴细胞融合？,思考,：,因为,B,淋巴细胞具有,分泌特异性抗体,的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下,大量增殖,的本领，所以由某种,B,淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞,，,能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。,（,2,）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段,？,动物细胞融合技术,动物细胞培养技术,？,？,抗原,效应,B,细胞,筛选,筛选,AA,型、,BB,型,A,型,B,型,AB,型杂交瘤细胞,能产生所需抗体的细胞,杂交瘤细胞,（,3,）制备过程为何要经过两次筛选？,比较项目,第一次筛选,第二次筛选,原理,在选择性培养基中添加某种药物，特异性杀死骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合的细胞,抗原,抗体的特异性结合,目标,杂交瘤细胞,既能无限增殖，又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,【,堂堂清,】,1.,单克隆抗体的优点是,_,特异性强、灵敏度高、可大量制备,2.,单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是,_,每一种,B,淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体,3.,产生抗体的细胞是,_,产生单克隆抗体的细胞是,_,效应,B,细胞（浆细胞）,杂交瘤细胞,4.,杂交瘤细胞的特点,:,_,既能无限增殖，又能分泌特异性抗体,5.,首次筛选是为了获得,_,第二次筛选时为了获得,_,杂交瘤细胞,既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,第一步：从一只小鼠体内提取,T,淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。,第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。,第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。,实验评价,1,、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠,2,、,B,淋巴细胞,3,、选择培养基,4,、必须经过专一抗体阳性检验,下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。,单克隆抗体在诊断的应用上，具有,准确、高效、简易、快速,的优点,1,、作为诊断试剂,2、用于治疗疾病和运载药物,疗效高、毒副作用小的新型药物,“,生物导弹,”,应用：,生物导弹,4,、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（）,A.,经过免疫的,B,淋巴细胞,B.,没经过免疫的,T,淋巴细胞,C.,经过免疫的,T,淋巴细胞,D.,没经过免疫的淋巴细胞,A,5,、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和,B,淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是,B,淋巴细胞,小鼠骨髓瘤细胞,B,淋巴细胞自身融合细胞,小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞,杂交瘤细胞,A,、,B,、,C,、,D,、,A,6,下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：,（,1,）图中,A,过程是从小鼠的脾脏中取得,_,细胞，该细胞能够产生,_,。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射,_,类物质。,（,2,）,B,过程是一个,_,过程，该过程的进行需要灭活的,_,或,_,的诱导。,效应,B,抗体,抗原,细胞融合,病毒,聚乙二醇,7,右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（,1,）该方案能达到预期效果吗？,。原因是,。（,2,）图中为,过程，常用,作为诱导剂。该细胞继承了,，因此不仅能分泌,，还有,本领。（,3,）该方案的目的是,。,不能,没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的,B,淋巴细胞,.,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞的遗传物质,特异性抗体,在体外培养条件下大量增殖,制备单克隆抗体,7,、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。,（,1,）,_,技术是单克隆抗体技术的基础。,（,2,）根据培养基的用途分类，图中,HAT,培养基属于,_,培养基。,（,3,）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是,_,。,（,4,）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用,_,。,（,5,）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的,_,特点，又具备淋巴细胞的,_,特点。,（,6,）淋巴细胞是由动物体,_,中的,_,细胞分化、发育而来。,（,7,）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是,_,。,动物细胞培养,选择,特异性强,灵敏度高,灭活的病毒,在体外大量增殖,分泌特异性抗体,骨髓,造血干细胞,主动运输,