1六S鉴定细菌的种属专题培训课件

,单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,1.,什么是,16S rDNA,？,16SrRNA,为原核生物,核糖体,RNA,的,一个亚基,，,16SrDNA,就是编码,该亚基的基因,。,原核生物的,rRNA,含有,3,种类型,：,23S,、,16S,、,5S rRNA,，它们分别含有,2900,、,1540,和,120,个核苷酸,。,2.,用,16S rDNA,进行细菌鉴定的原因,16S rDNA,在原核生物中,普遍存在,。,16 S rDNA,的相对分子量大小适中，约,1500 bp,，便于序列分析。,在,16S rRNA,分子中，既含有,高度保守的,序列区域，又有中度保守和,高度变化,的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究,。,bp=base,pair,图,16S rDNA,基因组成（灰色为保守区，绿色为可变区）,16S rDNA,基因全长,1542 bp,，由,9,个可变区和,10,个保守区组成。其中保守区反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则表明物种间的差异，且变异程度与细菌的系统发育密切相关。,DNA,的提取,挑取单菌落,然后置于装有,100,LPrepMan Ultra,的离心管中,涡旋震荡混匀,30s,左右，然后,100,水浴,10min,后，以离心机最大转速离心,3min,，取,10,L,上清液与,490,L ddH2O,（即稀释,50,倍），混匀作为下步,PCR,的模板,DNA,。提取的,DNA,于,-20,保存。,检测：核酸蛋白仪,/,琼脂糖凝胶电泳,1525R 5 AAG GAG GTG WTC CAR CC 3,PCR,反应条件,试剂使用量（,20L,体系）,模板,DNA,（,10ng100ng,）,2,L,Taq,酶,(5U/,L)0.2,L,10Taq Buffer(Mg,2+,),2,L,dNTPs(2.5mM)1,L,引物,F(10,M)0.5,L,引物,R(10,M)0.5,L,ddH,2,O 13.8,L,1min30s,判断16Sr DNA序列扩增是否成功:经琼脂糖凝胶电泳在1500 bp附近出现条带，说明16s rDNA已经扩增成功。,https:/www.ncbi.nlm.nih.gov/,