细胞培养技术(实验篇)ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,细胞培养技术（实验篇）,安徽医科大学微生物学教研室,2007,年,12,月,3,日 合肥,实验一,实验准备工作,配液,10/5/2024,2,材料（,1,）,所需物品名称,预试验需要量,每实验室准备量,普通天平及匙勺（只）,2,2,大酒精瓶（个）,3,3,250ml,、,1000ml,量筒（个）,各,1,各,1,500ml,盐水瓶（个）,1,1,玻璃棒（个）,2,2,中号镊子（把）,7,7,火柴、标签纸、记号笔（套）,6,6,10/5/2024,3,无菌,100ml/250ml,盐水瓶（个）,70,70,无菌大翻（个）,70,70,10ml,吸管（支）,3,3,5ml,吸管（支）,5,5,1ml,吸管（支）,1,1,青霉素小瓶（个）,120,120,青霉素瓶塞（个）,120,120,重铬酸钾（,g,）,2400,2400,浓硫酸（,ml,）,4000,4000,双蒸水（,5000ml,）,5000,5000,青霉素,(80,万单位）,2,瓶,30,瓶,链霉素（,1g),1,瓶,15,瓶,试剂（,NaHCO3,、,KCL,、,NaCl,、,Na2HPO4.12H2O,、,KH2PO4),各,1,瓶,各,1,瓶,结晶紫、甲醛、无水酒精,染液,1,瓶,染液,1,瓶,材料（,2,）,10/5/2024,4,实验内容,（一）配清洁液,配制注意事项,：重铬酸钾溶于水中有时不能完全溶解，预先用,2000ml,热水助其溶解，再加入足量自来水，最后缓慢加浓硫酸。,切记：浓硫酸要缓慢加入，且边加边搅拌！,配方,：重铬酸钾,2400g,浓硫酸,4000ml,自来水,20000ml,10/5/2024,5,（二）其他培养用液的配制及分工（分为三大组）,RPMI 1640,培养液,试验器材,：,RPMI 1640,2,袋,NaHCO3 4g,双蒸水,2000ml,搅拌溶解,过滤除菌,分装,100ml/,瓶，共,20,瓶，塞好大翻，并注明名称配制日期和组别,（每实验室,20,瓶，每小组,1,瓶）,2000ml,大酒精瓶,1,个,无菌,100ml,盐水瓶,20,个,1000ml,量筒,1,只,天平,1,台,过 滤器,1,台,大翻、记号笔、标签纸,试验试剂,：,RPMI 1640,2,袋,NaHCO3,1,瓶,双蒸水,10/5/2024,6,无菌分装,5.6,NaHCO3,（调,PH,值使用,技术室提供,）,按照,3ml/,瓶分装，每室,16,瓶，每小组,1,瓶,。（,由学生完成分装,）,试验器材,：,无菌青霉素瓶,20,只,无菌,5ml,吸管,1,支,5.6,NaHCO3,配制（由教师完成）：,3ml/,瓶,16,瓶,14,班,672ml,过滤除菌,10/5/2024,7,无菌分装,1,胰蛋白酶（技术室提供,）,按照,1ml/,瓶分装，每室,16,瓶，每小组,1,瓶。,（,由学生完成分装,）,试验器材,：,无菌青霉素瓶,20,个,无菌,1ml,吸管,1,支,1,胰蛋白酶 配制（由教师完成）：,1ml/,瓶,16,瓶,14,班,224ml,过滤除菌,10/5/2024,8,Hanks,液（母液由技术室提供）：,每室,4,瓶。每小组,1,瓶。,无菌,10ml,吸管,2,支,无菌,500ml,盐水瓶,4,个,大酒精瓶,1,个,1000ml,量筒,1,只,配方,：,A,液,100ml,B,液,100ml,双蒸水,1800ml,混匀,过滤除菌,分装,500ml/,瓶，共,4,瓶，塞好,大翻，并注明名称配制,日期,试验器材,：,A,、,B,母液,配制（由教师完成）：,100ml/,瓶,1,瓶,14,班,1400ml,10/5/2024,9,配制双抗（无菌操作）：,按,5ml/,瓶分装，瓶口贴好胶布作好标记，胶布上注明配制日期和组别。,无菌,5ml,吸管,2,支,无菌青霉素瓶,20,个,配方,：,青霉素（,80,万,U,）,2,瓶,链霉素（,1g)1,瓶,Hank s,液,100ml,混匀,每室,20,瓶。每小组,1,瓶。,试验器材,：,10/5/2024,10,无菌,5ml,吸管,1,支,无菌青霉素瓶,30,只,无菌分装牛血清：,无菌血清,150ml,56,的水浴锅中,灭活,30min,按每瓶,5ml,分装，并在瓶口处贴好胶布作好标记，写好日期和组别。,每实验室,30,瓶。每小组,2,瓶。,试验器材,：,血清购买（由教师完成）：,150ml/,瓶,1,瓶,14,班,2100ml,过滤除菌,10/5/2024,11,标好,1000ml,刻度的酒精瓶,1,个,100ml,量筒,1,只,无菌,100ml,盐水瓶,15,个,1PBS,配制：,NaCl,8.0 g,KCl,0.2g,Na2HPO412H2O 2.9g,KH2PO4 0.2g,去离子水,1000ml,配方,：,按,70ml/,瓶分装，用硫酸纸包好瓶口，待高压灭菌后第二天派人再换大翻保存。,混匀,每实验室,15,瓶。每小组,1,瓶。,试验器材,：,10/5/2024,12,100,、,250ml,量筒,各,1,只,500ml,盐水瓶,1,个,天平,1,台,染色液：,结晶紫,2.5g,甲醛,50ml,无水酒精,250ml,NaCl,4g,去离子水加至,500ml,配方,：,滤纸过滤备用,混匀,试验器材,：,由教师完成配制,每实验室,1,瓶。,10/5/2024,13,无菌,5ml,吸管,1,支,无菌青霉素瓶,15,只,分装,VTP,（由技术室提供）：,无菌操作按,4ml/,瓶分装，并注明日期和组别。,60mlVTP,每实验室,15,瓶。,试验器材,：,VTP,配制（由教师完成）：,60ml/,瓶,1,瓶,14,班,840ml,过滤除菌,10/5/2024,14,特别说明,若未特别说明，上述试剂均放置,2,8,冰箱保存备用。,每次实验除菌过滤的顺序：,五个班,的,RPMI 1640,先滤，然后再滤,Hank,s,液。,每组完成后统一收好，下次再分配到各小组。,10/5/2024,15,谢 谢！,10/5/2024,16,