革兰阴性球菌培训课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,革兰阴性球菌,*,革兰阴性球菌,革兰阴性球菌,奈瑟菌属（,Neisseria,）,布兰汉菌属（,Branhamella,）,革兰阴性球菌,2,奈瑟菌属（Neisseria）布兰汉菌属（Branhame,概述,“伯杰鉴定细菌学手册”第9版,将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科,奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（,N.gonorrhoeae,）、,脑膜炎奈瑟菌（,N.meningitidis,）,以及莫拉菌属中的卡他莫拉菌（,M.catarrhalis,）,是主要的致病菌。,目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论,革兰阴性球菌,3,概述“伯杰鉴定细菌学手册”第9版革兰阴性球菌3,一、分类,淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病,寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌,解乳糖奈瑟菌,、,干燥奈瑟菌,、,微黄奈瑟菌,、,粘,液奈瑟菌,、,浅黄奈瑟菌,、,灰色奈瑟菌,、,延长奈,瑟菌,、,去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌,第一节 奈瑟菌属,革兰阴性球菌,4,一、分类淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病第一节 奈瑟菌属革,二、脑膜炎奈瑟菌临床意义,寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌,物或空气微滴核而传播。,流行性脑脊髓膜炎,冬末春初，多为学龄儿童、青少年,感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎,可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激,症阳性、甚至休克和,DIC,等；菌血症和细菌的损,伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑,革兰阴性球菌,5,二、脑膜炎奈瑟菌临床意义寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼,脑膜炎奈瑟菌临床意义,尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染，急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。,主要致病物质是脂多糖,依据荚膜多糖的抗原成分可分为：,A、B、C、,等13个血清群，我国,A,群占95.8%，其余为,B、C,等群。,革兰阴性球菌,6,脑膜炎奈瑟菌临床意义尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的,淋病奈瑟菌临床意义,淋病的病原菌,主要通过性接触直接感染,在分娩时通过产道感染新生儿,临床表现为：,单纯性淋病,盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病,淋菌性结膜炎,播散性淋病,致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多,糖和铁调节蛋白,革兰阴性球菌,7,淋病奈瑟菌临床意义淋病的病原菌革兰阴性球菌7,1形态,革兰阴性双球菌,直径0.61.5,m,形似双肾或咖啡豆样，凹面相对,无动力，无芽胞，,某些菌种形成荚膜,三、生物学特性,革兰阴性球菌,8,1形态革兰阴性双球菌三、生物学特性革兰阴性球菌8,2培养特性,需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏,感，在培养基中需加入可溶性淀粉。,需氧生长，初次分离需5%7%,CO,2,和高湿度,最适生长温度为3537，低于30不生长,血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、,透明或半透明、直径12,mm,的不溶血、圆形、灰兰色菌落,卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落,在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜,脑膜炎奈瑟菌于孵育24,h,后在培养基上发生自溶,革兰阴性球菌,9,2培养特性需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏革兰,3生化特性,氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）,对糖分解能力、硝酸盐还原能力和,DNA,合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据,奈瑟菌属,DNA,中,G+Cmol%,为4654,革兰阴性球菌,10,3生化特性氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）革兰阴性球,4抵抗力,对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感,对青霉素敏感,但近年来由质粒介导的,内酰胺酶所致的耐,药在淋病奈瑟菌中产生较多,革兰阴性球菌,11,4抵抗力对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感革兰阴,革兰阴性球菌培训课件,脑膜炎奈瑟菌,标本采集,无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本,采集后立即送往实验室,用血平板进行床边接种后置35孵育,血液标本接种在血液培养瓶中置35孵育,标本运送时需要35保温,革兰阴性球菌,13,脑膜炎奈瑟菌标本采集革兰阴性球菌13,标本直接检查,直接涂片检查,脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片,皮肤瘀点渗出液涂片,革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断,抗原检查,通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验,包括,A、C、Y、W125,血清型的多价抗体和血清型,B,抗体,检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断,革兰阴性球菌,14,标本直接检查直接涂片检查革兰阴性球菌14,分离培养鉴定,脑脊液标本,接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板,咽拭子或鼻咽拭子,接种在选择性培养基上如改良的,Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、New York City(NCY),等培养基,血液标本,经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上,置5%7%,CO,2,35,孵育，每隔24,h,观察平板,革兰阴性球菌,15,分离培养鉴定 脑脊液标本革兰阴性球菌15,鉴定,初步确定为奈瑟菌属,直径12,mm，,灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落,涂片革兰染色见阴性双球菌,氧化酶试验阳性,进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖,类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌,用分型血清确定血清型别,平板上没有发现菌落需继续观察72,h,后无菌生长可报,告为阴性,革兰阴性球菌,16,鉴定初步确定为奈瑟菌属革兰阴性球菌16,（二）淋病奈瑟菌,1检验程序,革兰阴性球菌,17,（二）淋病奈瑟菌1检验程序革兰阴性球菌17,2标本采集,阴道和宫颈分泌物,用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1,cm,处,停留1015秒时间，蘸取,采集尿道分泌物,弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本,尿液,直肠肛拭标本,废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物,新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物,革兰阴性球菌,18,2标本采集 阴道和宫颈分泌物革兰阴性球菌18,3标本直接检查,标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查,男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多,革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断,女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革,兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄,居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告,新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎,革兰阴性球菌,19,3标本直接检查标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查革,4分离培养与鉴定,选择培养基如,MTM，Martin-Lewis（ML），,或,NYC,置于5%,CO,2,气体条件下3537孵育,每隔24,h,观察平板,革兰阴性球菌,20,4分离培养与鉴定选择培养基如MTM，Martin-Lewi,（1）形态和生化学鉴定,可疑菌落,直径0.51,mm，,灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落,确认,将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌,氧化酶和触酶试验阳性,葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性,培养需观察72,h,后无菌生长可报告为阴性。,革兰阴性球菌,21,（1）形态和生化学鉴定可疑菌落革兰阴性球菌21,（2）免疫学鉴定,直接荧光染色,凝集试验或免疫渗滤技术,革兰阴性球菌,22,（2）免疫学鉴定直接荧光染色革兰阴性球菌22,（3）分子生物学鉴定,检测靶片段的基因,隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌,胞嘧啶,DNA,甲基转移酶基因、透明蛋白(,opa),基,因、菌毛,DNA,探针、,rRNA,基因探针和,por,A,假,基因。,基因探针杂交、核酸扩增,革兰阴性球菌,23,（3）分子生物学鉴定检测靶片段的基因革兰阴性球菌23,第二节 卡他莫拉菌,卡他莫拉菌（,M.catarrhalis,）,又称为卡他布兰汉菌（,Branhamaceae,catarrhalis,）,可存在于健康人群的上呼吸道,近十年来报道,导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎,在免疫抑制和,ICU,的患者可导致菌血症,是社区呼吸道感染的主要病原体之一。,革兰阴性球菌,24,第二节 卡他莫拉菌卡他莫拉菌（M.catarrhalis）,临床分离,从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本,呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液,口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本,痰液标本直接涂片革兰染色,如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.51.5,m,革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染,革兰阴性球菌,25,临床分离从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本革兰阴性球菌25,卡他莫拉菌培养及鉴定,在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好,35 24,h,孵育后菌落直径13,mm，,灰白色、光滑，用接,种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动,氧化酶和触酶阳性,不发酵葡萄糖和其它糖类产酸,大多数菌株还原硝酸盐和产生,DNase。,三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别,可产生诱导型,内酰胺酶,革兰阴性球菌,26,卡他莫拉菌培养及鉴定在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好革兰,奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定,革兰阴性球菌,27,奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定革兰阴性球菌27,