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单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第23章 病毒感染的实验室,诊断技术,第一节 标本的采集、处理与运送,第二节 病毒形态学检查,第三节 病毒的分离与鉴定,第四节 病毒的血清学检测,第五节 病毒的分子生物学检测,第六节 病毒感染的快速诊断,主 要 内 容,THE,END,2,一、标本的采集、处理,第一节 标本的采集、处理与运送,（,一）,采集样本的时间,在发病初期（急性期）采取较易检出病毒，越迟阳性率越低。,（二）,标本种类的选择,1.呼吸道感染,2.肠道感染,3.中枢神经系统感染,4.其他感染,3,1,血液,2,粪便标本,3,尿道拭子及尿液标本,4,鼻拭子和咽拭子,5,喉拭子,6,含漱液标本,（三）常见标本的采集方法和用途,7,脑脊液标本,8,眼拭子标本,9,宫颈或阴道拭子,10,疱疹液标本,11,各种活检和尸检标本,4,1,血液标本,2,粪便标本,3,鼻、咽拭子标本,4,尿标本,5,疱疹液,6,脑脊液,7,组织标本,（四）标本的处理,5,病毒的抵抗力通常较弱，在室温下很快灭活，标本采集后应立即送到病毒实验室，如实验室距离较远或一时无法立即传送时，应将标本放入装有冰块的冰壶内尽快送检。,大多数病毒对甘油有抵抗力，送检的组织、粪便标本等可置于含抗生素的,50%,甘油缓冲盐水中，低温下保存送检。,最好在标本采取后,12,h,内送到实验室，立即进行检查或分离培养。暂时不能检查或分离培养时，应将标本放入冻存液并加入甘油或二甲基亚砜（,DMSO,）,以防止反复冻溶使病毒灭活，存放在,-70,低温冰箱内保存。,二、标本的运送和保存,6,一、形态学检查,（一）光学显微镜,（二）电子显微镜检查法,1、电镜直接检查法,2、免疫电镜检查法,（三）,X,线晶体衍射法,第二节,病毒形态学检查,7,（一）电子显微镜直接测量,（,二）超过滤法,（,三）超速离心法,二、病毒大小的测定,8,一、病毒分离和鉴定的一般程序,第三节 病毒的分离与鉴定,临床标本的收集,标本处理后接种,新生小鼠,组织,鸡胚,收获尿囊液、,羊膜腔液,红细胞凝集试验,CPE,红细胞吸附,空斑试验,包涵体,EM,观察发病,9,（一）病毒分离培养,1,动物接种,二、病毒的分离与鉴定,2,鸡胚培养,10,3,组织培养,（,1,）原代和次代细胞培养,（,2,）二倍体细胞培养,（,3,）传代细胞培养,（,4,）病毒在培养细胞中增殖的指标,1）细胞病变,2）红细胞吸附（,hemadsorption,）,3）,干扰现象,4）细胞代谢的改变,11,（二）病毒的数量与感染性测定,1,蚀斑,（,plaque,）,测定,蚀斑形成单位,（,plaque forming unit, PFU）,250%感染量或50%组织感染量（,ID50,或,TCID50）,测定,（三）新分离病毒的鉴定,1病毒核酸类型的测定,2理化性状的检测：,大小及结构、衣壳对称类型、有无包膜等,3血清学鉴定,12,一、中和试验,（一）原理,（二）用途,第四节,病毒的血清学检测,二、补体结合试验,（一）原理,（二）用途,13,三、血凝及血凝抑制试验,（一）原理,（二）用途,四、凝胶免疫扩散试验,（一）原理,（二）用途,14,一、分子杂交技术,（一）基本原理,（二）主要步骤,样品处理、探针的制备 、预杂交 、杂交 、漂洗、检测,（三）常用的杂交方法,1斑点杂交(,spot b1ot hybridization),2,固相杂交技术,3原位分子杂交（,in site hybridization）,4Southern,印迹和,Northern,印迹法,5分支,DNA（branched DNA,bDNA,）,技术,第五节,病毒的分子生物学检测,15,二、聚合酶链反应,（,polymerase,chain reaction, PCR）,（,一）基本原理,（二）主要步骤,1.模板的制备,2.反应体系的组成,：缓冲液、,dNTPs,、,引物、,TaqDNA,聚合酶、模板,3扩增,： 变性复性 延伸,4产物分析,（三）常用技术,巢式,（,nested）,和半巢式,（,hemi-nested）PCR、,原位,PCR（site PCR）、,逆转录,PCR（revere,transcriptive,PCR, RT-PCR） 、,多重,PCR（multiple PCR）、RNA,捕获,PCR(RNA captured PCR)、,免疫,PCR（immune PCR）、,定量,PCR（ration PCR）,16,三、凝胶电泳技术,（一）基本原理,（二）,常用方法,1,琼脂糖凝胶电泳,2,聚丙烯酰胺凝胶电泳,17,一、形态学检查,二、病毒抗原的检测,（一）免疫荧光技术,（二）固相放射免疫测定,（三）酶免疫技术,（四）其他技术,三、早期抗体检测,四、病毒核酸检测,第,6,节,病毒感染的快速诊断,18,THE END,19,
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