Ⅰ型糖尿病自身抗体检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,型糖尿病自身抗体检测,型糖尿病自身抗体检测,糖尿病的分型诊断的进展,1979,年,WHO,提出了原发性临床糖尿病分为胰岛素依赖型和非胰岛素依赖型，依赖型与非依赖型的区别主要依据胰岛素,细胞功能受损的程度，临床上是否依赖胰岛素而言，并不反映其发病本质,1997,年,WHO,建议取消依赖型与非依赖型，改为,1,、,2,型。,1,、,2,型的区别要看病因是否由胰岛,细胞自身免疫破坏造成，,1,型与,2,型是完全不同的两类疾病，但,2,型非依赖型可发展成,1,型胰岛素依赖型，成人缓慢进展型就经历了这个过程。,糖尿病的分型诊断的进展1979年WHO提出了原发性临床糖尿病,WHO,（,1997,年）建议的糖尿病分型方案,1,型糖尿病（,T1DM,）,胰岛,细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏,：,A.,免疫型；,B.,特发型,2,型糖尿病（,T2DM,）,胰岛素抵抗为主体的胰岛素相对缺乏，或胰岛素分泌受损为主体的胰岛素抵抗,其他特殊类型糖尿病,妊娠期糖尿病,WHO（1997年）建议的糖尿病分型方案 1型糖尿病（T,1,型糖尿病的流行病学,主要见于,15,岁以前的儿童和未成年人；,亚洲及我国发病率相对较低（我国儿童中的发病率为,0.59/10,万每年，全国,T1DM,的总数至少,200-400,万）,各国的,1,型糖尿病较以前有逐年增加趋势；,不少地区的,1,型糖尿病的发病率与季节有关,1型糖尿病的流行病学主要见于15岁以前的儿童和未成年人；,1,型糖尿病的发病机制,遗传易感性 环境因素,感染、饮食、地理、气候,细胞自身免疫损伤,细胞破坏、功能损害,胰岛素分泌缺乏,1型糖尿病的发病机制 遗传易感性,1,型糖尿病的病程,细胞量,1,型糖尿病的病程,遗传易感性,环境因素,胰岛素正常,自身抗体阳性,血糖正常,胰岛素,血糖正常,应激血糖,胰岛素,血糖,80%,细胞破坏,胰岛素缺乏,临床糖尿病,1型糖尿病的病程细胞量1型糖尿病的病程遗传易感性环境因素胰,1,型糖尿病和,2,型糖尿病的比较,T1DM T2DM,起病 急 进行性,内源性,Ins,低或缺乏 正常，升高或降低,酮症 常见 少见,发病年龄 各年龄段 绝大多数为成人,体重 通常非肥胖 肥胖或非肥胖,治疗,Ins,饮食，口服降糖,药，,Ins,家族史,10-15%30%,孪生子发病一致率,30-50%70-90%,HLA,相关,HLA-DR,HLA-DQ,无关,自身抗体 多见（,85%),少见,1型糖尿病和2型糖尿病的比较,1,型糖尿病和,2,型糖尿病的区分,一般,30,岁，起病急，中到重度症状,明显体重下降，消瘦，尿酮或,DKA,空腹或餐后,C,肽低下,免疫标记物,(GADA,ICA,IA-2),是 否,T1DM,T2DM,1型糖尿病和2型糖尿病的区分一般30,岁,起病方式,急，有者以酮症酸中毒（,DKA,）发病,酷似非肥胖,T2DM,，多在病后,3,年内发生,DKA,糖耐量减低,发病时严重,数年后显著或严重,伴其他自身免疫病,常无,可有（,Addison,，恶性贫血，重症肌无力等）,依赖,Ins,治疗,发病后即依赖,初期对饮食和,/,或口服降糖药有效随后依赖,胰岛,细胞功能,发病后即严重受损，血中,C,肽水平低或侧不出,发病时尚有残存功能，数年后同急性型,细胞自身抗体,起病时急剧升高，发病后下降，数年后可阴转,低水平持续阳性，有人超越,10,年,免疫介导型1型糖尿病亚型的特征急性发病型缓慢发病型（LADA,抗胰岛细胞抗体,(ICA),1974,年,Bottazzo,采用间接免疫荧光法在胰岛素依赖性糖尿病患者血清中首次检测到抗胰岛细胞抗体（,islet cell autoantibodies,ICA,）。,ICA,是针对胰岛细胞内多种抗原的一组抗体,其靶抗原至今尚未完全阐明。,抗胰岛细胞抗体(ICA)1974年Bottazzo采用间接,与糖尿病相关的自身抗原不仅在,细胞表达，这些抗原的组织分布可分为：,(1),细胞特异的，如胰岛素；,(2),胰岛细胞特异的；,(3),神经内分泌特异的，如分子量为,65 kD,的谷氨酸脱羧酶（,GAD65kD,）、,ICA512,、神经节苷脂（,ganglioside,）、脑硫脂（,sulfatides,）等；,(4),较广泛的分布，如,HSP62,等。,目前所知的,ICA,主要抗原的是谷氨酸脱羧酶（,GAD,）和酪氨酸磷酸酶（,IA2,）,与糖尿病相关的自身抗原不仅在细胞表达，这些抗原的组织分布可,检测方法：,间接免疫荧光法,组织化学染色法,免疫沉淀化学法,ELISA,法,检测方法：,目前,ICA,的检测方法主要是以猴胰腺为基质的间接免疫荧光法，但易受组织的固定方法的影响。,抗胰岛细胞抗体与胰腺的内分泌部位反应，可见所有胰岛细胞胞浆呈现均质到颗粒型荧光。,目前ICA的检测方法主要是以猴胰腺为基质的间接免疫荧光法，但,检测方法的标化：,1983,年瑞典的,Ludvigsson,为一名,1,型糖尿病新发病者做了血浆置换,这份血浆在青少年糖尿病基金会,(FDA),组织的,ICAs,定标实验中,在参加这项工作的所有实验室检测时均为,ICAs,阳性,于是用这份血样定出了,ICAs,的,JDF,单位,并逐渐成为国际上较为通用的单位。,检测方法的标化：,敏感度,81%(44%,100%),，特异度,96%(64%,100%),特异度较,GADA,和,IA2A,差,ICA,可作为早期预测指标,能早于,T1DM,发病,8,年前被检测出,高滴度的,ICA,（大于,20-40JDF,单位）预示疾病进展的高危险性。,大部分,T1DM,病人的,ICAs,在发病,2,年后消失，,ICA,持续阳性超过,23,年者，仅占,T1DM,的,10%,。,ICA,滴度的持续高水平通常与,细胞的损伤有关，,ICA,的水平与,C,肽水平呈负相关。,ICA,和其他胰岛自身抗体（如,GAD,或,IAA,）同时阳性对疾病更有诊断价值，这类病人发生,T1DM,的危险性是仅,ICA,阳性的病人的,3-5,倍。,敏感度81%(44%100%)，特异度96%,ICA,在不同人群中的阳性率,ICA,的检测对,1,型糖尿病有很好的预测价值,人群 阳性率（,%,）,健康对照组,0.1-0.2,T1DM,患者直系亲属,2-5,新近诊断的,T1DM,患者,60-80,T2DM,患者,5-7,ICA在不同人群中的阳性率 人群,谷氨酸脱羧酶抗体,(GAD-Ab),谷氨酸脱羧酶,氨基丁酸,（,GABA,）的合成酶,表达于人脑及胰岛中均有，主要位于细胞浆中,具有抑制生长抑素和胰高糖素分泌的作用，并可调节胰岛素的分泌和胰岛素原的合成,谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)谷氨酸脱羧酶,1990,年，,Beakkeskov,首次证明,GAD,是,1,型糖尿病的自身抗原,GAD,分子存在,65kD,和,67kD,两种形式，两者在氨基酸水平上有,65%,的同源性和,80%,的相似性，免疫源性也基本相同，目前认为,T1DM,中抗,GAD65,抗体更常见,1990年，Beakkeskov首次证明GAD是1型糖尿病的,检测方法：,免疫沉淀酶活性法,放射免疫法,ELISA,法,间接免疫荧光法,化学发光法,检测方法：,最常用的,GAD-Ab,的检测方法是,ELISA,法和放免法。,放免法由于存在放射性污染目前已逐渐被,ELISA,法替代,ELISA,法采用亲和素和生物素扩大级联反应增强了检测的敏感性,最常用的GAD-Ab的检测方法是ELISA法和放免法。,GAD,检测方法的评价,GAD,自身抗体,:41,个实验室测定了血清,GADab,其中多数运用重组人,GAD,的,RIA,法,其调整敏感性是,0,91%(,平均,81%),。,ELISA,法与,RIAs,法比较,有较好效果,其调整敏感性,77%,双管测定的阳性或阴性一致性为,100%,。,在,125,例血清,RIA,法的阳性率为,22.4%,，,ELISA,的阳性率为,26.4%,，两者的显著相关（,P=0.025),。均 与,ICA,显著相关,P,值分别为,0,和,0.01,。说明,ELISA,法可以替代,RIA,法做为,1,型糖尿病自身抗体筛选的有效手段。,（,RIA,试剂,欧蒙公司；,ELISA,试剂,美国,BLOMERICA,公司）,GAD检测方法的评价GAD 自身抗体:41 个实验室测定了血,GAD,在,T1DM,发病机理中的作用,分子模拟,(molecular mimicry),机制致病学说：,病毒蛋白如柯萨奇,B,病毒,p2C,蛋白肽段,胰岛,细胞抗原分子谷氨酸脱羧酶,(GAD),的部分肽段序列相似,前者,(,外源性蛋白多肽,),在诱导机体产生免疫的同时,亦可能诱发针对自身胰岛,细胞的攻击，导致,细胞的损伤,。,GAD在T1DM发病机理中的作用 分子模拟(molecula,GAD-Ab,具有与,细胞缓慢损伤相关性好、出现早、持续时间长、年龄跨度大、阳性率高、检测易标准化等特点，是目前公认的诊断,LADA,及预测胰岛功能的免疫学指标,GAD-Ab,可于发病前,10,年测出，且在此期间呈高低度持续存在，约,80%,新发患者血清中,GAD,阳性且水平较稳定，病程,10,年以上仍存在高滴度,GAD,抗体。,GAD,的临床应用,GAD-Ab具有与细胞缓慢损伤相关性好、出现早、持续时间长,GAD,抗体在大多数,T1DM,患者中阳性，且阳性率不随病程延长而下降。,实验显示新诊断的患儿中,GAD,抗体阳性率为,74%,，长病程者为,67%,，而他们的,ICA,阳性率分别为,64%,和,14%,。,如在初发,T1DM,患者中查到,GAD,抗体有助于排除,T2DM,，以助于,DM,诊断分型并指导治疗。,在,T1DM,一级亲属（高危人群），,33.3%,的,GADA,阳性者可能患,TIDM,。,TIDM,一级亲属中,GAD,抗体阳性率为,15%,左右，其中,1/3,在,618,个月后发展为,T1DM,。,GADA,在僵人综合征（,SMS,）中的阳性率为,100%,此外还见于与,T1DM,相关的多腺体自身免疫综合征。,GAD抗体在大多数T1DM患者中阳性，且阳性率不随病程延长而,GAD,在不同人群中的阳性率,人群 阳性率（,%,）,健康对照组,0.3-0.6,T1DM,患者直系亲属,3-4,其他的自身免疫性,内分泌疾病患者,1-2,新近诊断的,T1DM,患者,55-85,T2DM,患者,10-15,妊娠糖尿病,10,GAD在不同人群中的阳性率 人群,抗酪氨酸磷酸酶抗体,(ICA 512/IA 2ab),ICA 512/IA 2,是利用,1,型糖尿病患者或其前期病人的血清免疫筛选胰岛细胞的,cDNA,文库得到的一个新的,细胞自身抗原。,其氨基酸序列与,T,淋巴细胞蛋白酪氨酸磷酸酶,(PTP)CD45,相似，而碱基序列与人胰岛素瘤克隆的,cDNA(IA2),相近。,Northern,印迹示,ICA 512/IA 2,在胰岛、脑和垂体中均有表达。,Rabin,等发现,ICA512,实际上是,ICA,的一个片段。,抗酪氨酸磷酸酶抗体(ICA 512/IA 2ab)ICA,IA2A,存在于大约,65%,（,55%-75%,）的新发,T1DM,病人中，而正常对照人群中阳性率小于,1%,。,IA-2Ab,特异性强,在不伴,1,型,DM,的自身免疫病患者中较少发现。,T1DM,患者中,IA2A,阳性率可能受多种因素影响，,15,岁以上,T1DM,者,IA2A,阳性率最高，随增龄阳性率逐渐下降，但其发生率与,DGA,抗体无关。,携带,IA-2,抗体的个体在,5,岁时患,型糖尿病的风险是,34,岁时的,11,倍。,IA2A存在于大约65%（55%-75%）的新发T1DM病人,检测方法,酶联免疫吸附分析法,(ELISA),放射配体分析法,(RLA),35,S,