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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精,*,实验一 蛋白质的性质实验,蛋白质及氨基酸的呈色反应,蛋白质的沉淀反应,精,1,1.,学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。,2.,加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。,【,目的和要求,】,精,2,（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应,双缩脲在碱性条件下可与,Cu,2+,结合生成复杂的,紫红色,化合物。此反应称为双缩脲反应。,蛋白质或二肽以上,的多肽分子中，含有多个与双缩脲结构相似的肽键，因此也有双缩脲反应，可用此法鉴定蛋白质的定性和定量。,1.,双缩脲反应,【,实验原理,】,精,3,水合茚三酮,还原茚三酮,紫色物质,注意：脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。,此反应用于定性、定量鉴定氨基酸。,2.,茚三酮反应,精,4,(,二,),蛋白质的沉淀反应,蛋白质分子由于形成,水化层,和,双电层,而成为稳定的胶体颗粒。,在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素，即以固态形式从溶液中析出，这种作用称为,蛋白质的沉淀反应,。,蛋白质,H,2,O,H,2,O,H,2,O,H,2,O,+,+,+,+,(pH pI,),精,5,1.,可逆沉淀反应,在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但其分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质。沉淀因素除去后，蛋白质沉淀可再溶于原来的溶剂中。这种沉淀反应称为,可逆沉淀反应,。,盐析作用,脱去水化层,电荷被中和,低温下乙醇或丙酮对蛋白质的短时间作用,等电点沉淀,用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。,精,6,在发生沉淀反应时，蛋白质的分子内部结构，空间构象遭到破坏，失去其天然蛋白质的性质，这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中，这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。,2.,不可逆的沉淀反应,重金属盐,有机溶剂,生物碱试剂,过酸、过碱,加热、震荡、超生波,精,7,【,实验方法,】,双缩脲反应,:,取少量,尿素,结晶，加入干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后加入,10,滴,双缩脲试剂,，混匀,观察颜色变化。,另取,1,支试管，加入,卵清蛋白,溶液,1ml,再加入,5,滴双缩脲试剂，混匀，观察颜色变化。,精,8,2.,茚三酮反应,取,2,支试管，分别加入,卵清蛋白,溶液和,0.5%,甘氨酸,溶液,4,滴，再加入,2,滴,0.1%,茚三酮乙醇溶液,，混匀，在沸水浴中加热,1-2,分钟，放置冷却，观察颜色变化，并比较蛋白质和氨基酸呈色深浅。,精,9,3.,蛋白质的盐析作用,取,1,支试管，加入,3ml,蛋白质,-NaCl,溶液,和,3ml,饱和,硫酸铵,溶液，混匀，静置,10,分钟，球蛋白则沉淀析出。过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，至粉末不再溶解，析出的沉淀为清蛋白。静置，弃上部清液，取部分清蛋白沉淀加水稀释，观察它是否溶解。,精,10,4.,重金属沉淀蛋白质,取,1,支试管，加入约,1ml,卵清蛋白质,液，加入,2%,硝酸银,溶液,1,滴，观察沉淀的生成。,5.,有机酸沉淀蛋白质,取,1,支试管，加入,卵清蛋白质,液约,0.5ml,，然后滴加,10%,三氯乙酸,溶液数滴，观察沉淀的生成。,精,11,1.,酒精灯加热试管时，试管口勿对人。,2.,浓硝酸滴加时小心，勿伤人及桌面。,3.,试剂用完及时盖上盖，防止挥发。,4.,观察现象时，随加随摇，及时记录。,5.,药品放回原处，清点自己物品。,【,注意事项,】,精,12,1.,如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，此作何结论,?,2.,茚三酮反应的阳性结果是否经常是同一色调,?,若不是，为什么,?,3.,蛋白质分子中的哪些基团可以与,(1),重金属离子作用而使蛋白质沉淀,?,(2),有机酸、无机酸作用而使蛋白质沉淀,?,【,思考题,】,精,13,
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