实验-肠道致病菌的分离鉴定课件

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验四肠道致病菌分离鉴定,病原生物学教研室,Content,示教：,主要肠道杆菌，大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌的形态、染色性,主要肠道杆菌的培养特性：,SS,平板,/EMB,平板,主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应,操作：,肥达反应,粪便肠道致病菌的分离和鉴定,血清学,(,*,续,),录像：,厌氧菌,肠道杆菌的分类,肠杆菌科,志贺菌属,埃希菌属,沙门菌属,克雷伯菌属,变形杆菌属,ETEC,EIEC,EPEC,EHEC,EAEC,痢疾、福氏、鲍氏、宋内,伤寒，副伤寒，猪霍乱，肠炎,肠道杆菌的基本特征,形态结构相似,培养要求不高,生化反应活跃,抗原结构复杂,抵抗力不强,易发生变异,粪便标本肠道致病菌鉴别流程,标本,鉴别培养基,（,SS,培养基）,生化反应,（双糖管）,血清学鉴定,SS,平板挑取可疑菌落,2,个,(,无色,透明,小,菌落,),接种双糖管,培养,观察,SS,平板,分离肠道病原菌的强选择培养基,成分：,基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（,pH6.8-8.0,，红橙黄）,作用：,乳糖，中性红,：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。,胆盐、枸橼酸钠、煌绿,：抑制肠道非致病菌如,E.coli,的生长，对肠道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。,病原菌,:,小,无色,透明,非致病菌,:,大,红色,EMB,平板,病原菌,:,透明,无色 非致病菌,:,紫黑色,双糖管,发酵乳糖,H,2,S,试验,发酵葡萄糖,(,产酸产气,),及动力,上层：乳糖,Fe,2+,固体,下层：葡萄糖,半固体,指示剂,:,酚红（,pH6.8-8.4,黄 红）,致病菌红色,非致病菌黄色,观察：,乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢,尿素酶,大肠埃希菌,+,痢疾志贺菌,+,伤寒沙门菌,+/,副伤寒杆菌,+,变形杆菌,+,红色,黄色,双糖管结果观察,黄色,黄色,可疑肠道致病菌,大肠埃希菌,双糖管接种方法,穿刺,斜面接种法,肥达试验,原理：,伤寒沙门菌菌体,O,抗原,伤寒沙门菌鞭毛抗原,甲型副伤寒沙门菌鞭毛,H,抗原,肖氏沙门菌鞭毛抗原,已知抗原,病人血清中的未知抗体,凝集,肥达试验,操作：,病人,血清,生理盐水,微量板,1,2,3,4,5,6,7,8,伤寒,O,0.2ml,0.2ml,伤寒,H,0.2ml,0.2ml,副甲,H,0.2ml,0.2ml,肖氏,H,0.2ml,0.2ml,1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640,1:1280,生理盐水,混匀,Ag,加样方向,抗原,肥达试验结果分析（,1,）,凝集程度：,（）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底,（）上层液基本透明，细菌大部分（,75,）凝集于孔底,（）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集,（）上层液混浊，孔底有少量凝集,（）不凝集，同于对照,书写报告,：,反应的最高稀释度为凝集效价,肥达试验结果分析（,2,）,凝集效价,：伤寒沙门菌,O,1,：,80,，,H,1,：,160,副伤寒沙门菌,H,1,：,80,动态观察：双份血清，效价,4,倍,O,与,H,抗体的诊断意义：,OIgM,HIgG,O,、,H,抗体均高：肠热症,O,、,H,抗体均低：未患病,O,抗体不高，,H,抗体高：回忆反应，预防接种,O,抗体高，,H,抗体不高：感染早期，交叉反应,上次实验结果观察：,脓汁标本中的两种菌落：,黄色，完全溶血,白色，不溶血,接种甘露醇发酵管,革兰染色,观察是否发酵甘露醇,The End,Thanks,17,以上有不当之处，请大家给与批评指正，谢谢大家！,