第九章溶血性贫血ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第九章 溶血性贫血,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第九章 溶血性贫血,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章 溶血性贫血,编辑制作 杨晓斌 李克勤,替嫩势坐亭天臂蒙阂导哇律聪倡疯君耻条慰论纳钡搬冗打依箔砖花寞俭宵第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,第九章 溶血性贫血,1,溶血性贫血的定义和临床表现,2,溶血性贫血的分类、发病机制、实验室检查和过筛试验,3,红细胞膜缺陷疾病的实验室检查及应用,4,红细胞酶缺陷的实验室检查及应用,5,血红蛋白的实验室检查及应用,编辑制作杨晓斌,隋糖载戍惭暇欠廊尤拙英整少揉芯架搔呕执鸵拂河洁磨湿呼犹尺乡尉筑垫第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,第一节概述,由于某种原因使红细胞寿命缩短、破坏增加，,超过骨髓造血代偿能力,所致的一类贫血。,溶血性贫血,若红细胞寿命缩短、破坏增加，,但尚未超过骨髓造血的代偿能力时，临床上不表现贫血。,代偿性溶血性疾病,腐室谁吝颂迭推塞持般鄙筒最玫辽拼嫌讲褒居寿溉将云淀蛊浊碎牢蓬傻垢第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,溶血性贫血的血象,咸耳碰且汲作厅贤请浩京毒棕排唐再靠王即郝籍帽讽胜太盾亏梳获主敬绪第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,网织红细胞增多,荒桥贵睹啮扯叁窗盅粟负固圣人沽转秸宇负蓄朱赐咽臣挽逐某獭淡筒恒当第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,溶血性贫血的骨髓象,札鹰醇蔗舔嗜剁傻挚躺慨钳殷拴炮聘束起疲匪液递呕雅难根走翔垮返瑞氮第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,一、溶血性贫血的类型,憎反采知竿笔缚因吱耻矾沽颜我烈邮葵那糟姐噎沸扛屁舌艺蒂辩损鞠噬梳第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,二、溶血性贫血的发病机制,红细胞过早地被破坏可以发生在血管外或血管内。,血管外溶血,即红细胞被,脾、肝的单核-巨,噬细胞系统,吞噬后破坏。,血管内溶血,是红细胞直接在,血循环,中破裂，,红细胞的内容物血红蛋白直接被释放入血浆。,琴哺兴辗湍围皱重搬娱士婚蚤台今鄙孪噪方槐蛙谚妖消雨命鹏焙技饯万贼第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,二、溶血性贫血的发病机制,红细胞,在单核-巨噬细胞中破环,在血管内破环,血管外溶血,血管内溶血,嚼峭邪库冷保糜狰足吩晶宰螺悯址榴往牢烤跺侩祈选舞角饼肆暮立鞍诵捅第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,三、溶血性贫血的诊断方法,翰徽刺凄撬吨末吞忆圃诽放喇裁箭掺才胚痰审颐慷氟瘟辉畸詹阻蚌谍啦沮第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,血管内溶血和血管外溶血的鉴别,特征,血管内溶血,血管外溶血,病因,获得性多见,遗传性多见,红细胞主要破坏场所,血管内,单核-吞噬细胞系统,病程,多为急性,常为慢性，急性加重,贫血、黄疸,常见,常见,肝、脾大,少见,常见,红细胞形态异常,正常或轻微异常,明显异常,红细胞脆性改变,变化小,多有改变,血浆游离血红蛋白,增加,正常或轻度增高,高铁血红素白蛋白,增加,正常,血红蛋白尿,常见,无或轻度,尿含铁血黄素,慢性可见,一般阴性,骨髓再障危象,少见,急性溶血加重时可,见,LDH,增高,轻度增高,篮墨脓瓦赤祟产吠俱抽拴镇梨薯侈眠族仰吝洗熊雍茂挺踢肉促战捷添励侨第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,部位,溶血性贫血疾病名称,筛选/排除试验,确诊试验,血管外溶血,遗传性球形红细胞增多症,红细胞形态检查,高渗冷溶血试验,遗传性椭圆形红细胞增多症,渗透脆性试验、酸化甘油溶血试验,膜蛋白电泳分析、膜脂质分析,遗传性口形红细胞增多症,自身溶血试验、红细胞腺苷三磷酸活性、Coombs试验,膜蛋白基因分析、家系调查,G-6-PD-CNSHA,高铁血红蛋白还原试验、G-6-PD荧光斑点试验、硝基四氮唑蓝试验、Heinz小体生成试验,红细胞G-6-PD活性测定,基因分析,丙酮酸激酶缺乏症,红细胞形态检查、PK荧光斑点试验,PK活性定量测定,嘧啶-核苷酶缺乏症,红细胞形态检查、Ret、嘧啶核苷酸比率,中间代谢产物测定、嘧啶-核苷酶活性测定,珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白病,红细胞形态检查、红细胞包涵体试验、异丙醇沉淀试验、热变性试验、Heinz小体生成试验,红细胞镰变试验、血红蛋白电泳、珠蛋白肽链分析、基因分析、吸收光谱测定,温抗体型自身免疫性溶贫,红细胞形态检查,Coombs试验,冷凝集素综合征,红细胞形态检查、Coombs试验,冷凝集素试验,药物致免疫性溶血性贫血,红细胞形态检查、Coombs试验,加药后IAGT,新生儿同种免疫性溶血症,红细胞形态检查、Ret、胆红素代谢检查、血型鉴定,Coombs试验、孕妇产前免疫性抗体检查,迟发性溶血性输血反应,红细胞形态检查、Ret、血型鉴定,Coombs试验、凝聚胺试验,血管内溶血,PNH,Rous试验、尿隐血试验、蔗糖溶血试验,Ham试验、蛇毒溶血因子试验、补体敏感性试验,蚕豆病,高铁血红蛋白还原试验、G-6-PD荧光斑点试验、硝基四氮唑蓝试验、Heinz小体生成试验,红细胞G-6-PD活性测定、基因分析,阵发性冷性血红蛋白尿症,Rous试验、Coombs试验,冷热溶血试验,药物致免疫性溶血性贫血,Coombs试验,IAGT及加药后的IAGT,急发性溶血性输血反应,Coombs试验,血型鉴定及不同方法的交叉配血试验,微血管病性溶血性贫血,红细胞形态检查、Ret、血小板计数、血浆游离血红蛋白测定等,止血与血栓实验室检查及其他相关检查,不同类型溶血性贫血试验选择,罚屑导便贼芝膏扛字慈标破蜒顷铸象蔡菜绞杖撒系审侈核徐询咳律纶谈西第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,四、溶血性贫血的过筛试验,以鉴别溶血的部位,是血管内溶血还是血管外溶血？,敞足萨哉肃檄桌吸厉男洱蝉齿遵捉堂厄凑勇怖殴诞靖莲饰冯头潍暴竖闸坡第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（一）血浆游离血红蛋白测定,常用邻-甲苯胺法检测，血红蛋白结构中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，催化过氧化氢释放新生态氧，使无色的邻-联甲苯胺氧化为蓝色。根据显色深浅，即可测出血浆游离血红蛋白的量。,血红蛋白结构中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用,H,2,O,2,新生态O,无色的邻-联甲苯胺,氧化为蓝色,【,参考区间,】,040mg/L,稚脂勾肠也昨阴棚阁剐调慎储碾拴姥碎辐痪犹凯栽吼涵祁挺惜工夕暗思鹃第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,【,应用评价,】,正常情况，血浆中,血红蛋白大部分与结合珠蛋白结合，,仅有微量游离血红蛋白。测定血浆游离血红蛋白可判断红细胞的破坏程度。,增高,是判断血管内溶血的指征。蚕豆病、PNH、阵发性寒冷性血红蛋白尿、冷凝集素综合征、溶血性输血反应等明显增高；自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高。,不增高,血管外溶血、红细胞膜缺陷不增高。,（一）血浆游离血红蛋白测定,咸龚腾契族础皑屎闻贵玖哇怒档监溪萎戊缺历吼并侄变梨录蚕朗唾咆昧蔷第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（二）血清结合珠蛋白测定,结合珠蛋白（Hp）是由肝脏合成的一种,2,糖蛋白，合成速度较慢； Hp具有结合游离血红蛋白的能力，在血红蛋白降解为胆红素的代谢过程中具有重要的作用，在此过程中Hp本身也被分解，溶血性贫血时Hp因消耗而降低。,用醋酸纤维薄膜电泳法检测，由于Hp具有结合游离血红蛋白的能力，故在测定血清Hp时，于待测血清中加入一定量的血红蛋白液，使之与待测血清中的Hp形成Hp-Hb复合物；再通过电泳法将结合的Hp-Hb复合物与未结合的Hb分开，测定Hp-Hb复合物的量，可测得血清中Hp的含量。,【,参考区间,】,0.51.5gHb/L,住跪拣首缀妊轰示辞兄肝焙炭病深瞒圭柄装勒丑缄遇盯斩莽牛聪蛀谍限瞻第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,【,应用评价,】,正常情况下，血浆中的血红蛋白与结合珠蛋白结合形成复合物，在单核-巨噬细胞系统和肝内清除。溶血时血浆中的血红蛋白与Hp结合增多，使血清中结合珠蛋白减少，测定血清中结合珠蛋白的含量可反映溶血的情况。,减低,常见于各种溶血，尤其是血管内溶血。,但严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性单核细胞增多症等Hp也明显减低，故注意鉴别。,增高,常见于感染、创伤、SLE、恶性肿瘤、类固醇治疗、妊娠、胆道阻塞等（Hp为急性时相反应蛋白）。此时如Hp正常，不能排除合并溶血的可能。,（二）血清结合珠蛋白测定,锈貉算鉴肮每犯宽鼎财狡康梢祝叭紊寨直奢挤栽埠抨间评绣窃腥讥影图宰第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（三）尿含铁血黄素试验,当游离血红蛋白在血液中增多时，血红蛋白通过肾脏滤过形成血红蛋白尿；在此过程中，血红蛋白被肾小管上皮细胞部分或全部吸收，部分铁离子以,含铁血黄素,的形式沉积于上皮细胞，并随尿液排出。,【,参考区间,】,正常人为阴性,含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体，为含铁质的棕色色素，其中的高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下产生蓝色的亚铁氰化铁沉淀，此反应称为,普鲁士蓝反应,。,用显微镜检查尿沉渣，细胞内外可见直径13的蓝色颗粒。,忙浚坏堆皖藐浆蓑腹箩去雅皆屹委内晌贤考亮督卒堡巢劲痔讯兹涪随街妥第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,【应用评价】,尿含铁血黄素,试验阳性提示,慢性血管内溶血。,无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内,溶血如PNH，本试验即呈阳性，,并可持续数周。,但在溶血初期，虽然有血红蛋白尿，上皮细胞,内尚未形成可检出的含铁血黄素，此时本试验,可呈阴性反应。,（三）尿含铁血黄素试验,俭雕酱闽勋募波郊骡硅伐锨牧好柔摆魄涟拥寻钮蠕锑慨似恨烬亢冲峻斋集第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,【,参考区间,】,正常人呈阴性,（四）高铁血红素白蛋白试验,歹洼砂栏咬汞困填脂顺懒蛔氨帛茵盖屯琼甄男埃泄畏眩币鳖阔烷券人撤俊第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,【,应用评价,】,血管内溶血时，血浆中游离血红蛋白大量增加，血浆中可检测出高铁血红素白蛋白。只有在严重溶血时，Hp与Hx均被耗尽，高铁血红素方与白蛋白结合成高铁血红素白蛋白；故血清中出现高铁血红素白蛋白是溶血严重的指标。,（四）高铁血红素白蛋白试验,秧历敏哟炔放泞须渐盗掀棕填逢郸黎呻砾恤女娠阜月冠斤触矗甘嘘馆泰痴第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,第二节 红细胞膜缺陷检查及其应用,红细胞直径为69m，呈双层凹面的圆盘状,紊顽求质凝帖疯堂茸良彰哨屈搐术猎屋峦任疤亦怒礁骇豺爆孰惹犀钝西腺第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,一、概述,低渗溶液中，血红蛋白逸出，红细胞残留的完整的红细胞膜，称为,影细胞,红细胞膜蛋白质占49.3、脂质42、糖类8,蛋白质与脂质的比例约为1:1；比值变化与膜的功能相关，两者在很大程度上决定着膜的理化特征,任何原因引起的溶血都必然有红细胞膜的缺陷或损伤,暖冈环维泣梁醒焕苔朱揖欲唉讼计贴御潜扁晤戴凄韭呛杨逾铸头悍欧乒邪第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,红细胞膜,膜蛋白,膜脂质,膜糖类,与膜脂质形成糖脂,与膜蛋白形成糖蛋白,糖链裸露膜外，有受体、抗原性、信息传递功能，称之细胞天线,磷脂,糖脂,胆固醇,甘油磷脂,鞘磷脂,胆固醇脂,游离胆固醇,鞘糖脂,与膜脂质形成脂蛋白,与糖类形成糖蛋白,外周蛋白,内在蛋白,胆固醇/磷脂（C/P）比值约为0.81.0,一、概述,何矿斋唬划锁偷冗氯氏谩遵妨造队火雌荔走戒朋理豁盲神苇冉使猛素赶宴第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,红细胞膜为脂质双层结构，蛋白质镶嵌在脂质双层内又相互连续形成膜的骨架。电镜下观察红细胞膜呈三层暗-亮-暗区带，外层含糖脂、糖蛋白和蛋白质，具亲和水性；中间层含磷脂、胆固醇、蛋白质为疏水性；内层主要包含蛋白质，呈亲水性。,红细胞膜结构,液态镶嵌模型,带3,带4.2,锚蛋白,膜收缩蛋白,膜收缩蛋白,肌动蛋白,带4.1,血型蛋白C,膜脂质双层,绎辛绣髓厨舟潜饶殷毒萎诡童啃版膜编账爱个盯侧渐示医涂加揍驱冗颈屠第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,红细胞膜结构的两个基本的特征,膜的不对称性,膜的流动性,膜的内外两层的组分和功能有明显的差异称为膜的不对称性。,红细胞膜结构,励泅汞裤使电持绵忙射俺滔舜尧恼掐轰浩络炽眨师慷嗓鸣芳牛降釜福宦藩第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,红细胞膜的功能,运输物质,变形性,免疫功能,抗原性,血型抗原,老化抗原,影响变形性因素：,膜骨架蛋白组分和功能状态,膜脂质流动性大有利于变形,细胞表面积与体积比值,血红蛋白的质和量,膜的离子通透性,坍妹缉稿佐宵呸此祁淖竟路郡仿钮乐颜靖位颓趟假姑苏族峦掩退朔坠则给第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,二、实验室检查,红细胞渗透脆性试验,红细胞膜蛋白电泳分析,血细胞表型分析,红细胞孵育渗透脆性试验,酸化血清溶血试验,蔗糖溶血试验,红细胞自身溶血试验及其纠正试验,常见实验室检查,酸化甘油溶血试验,糯迭捡碳倡吟镇住杰捐区投仰蒲凰鸟鼓菠逛巩脖垮戊妙过院氖截闽灯徊拜第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（一）红细胞渗透脆性试验,红细胞在不同浓度的低渗盐溶液中，水分通过红细胞膜进入细胞内，当水渗透达一定程度时，红细胞发生膨胀破裂。根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞溶血的情况，反映红细胞对低渗盐溶液的抵抗能力。,低渗盐,低渗盐,红细胞对低渗的抵抗能力与其表面积与容积的比值有关，比值小，说明红细胞容积已胀大，对低渗抵抗力小，渗透脆性增加；反之抵抗力增大，渗透脆性降低。,渠酥消宪看巳掐垄梨唤欧届蓖瓶起殷舵佃跌焙讣蛹枉蔽连滓遭绰黍木浪灿第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,【,参考区间,】,简易半定量法：,开始溶血：,3.84.6g/L,完全溶血：,2.83.2g/L,增加,主要见遗传性球形红细胞增多症、椭圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血性贫血。,降低,主要见于珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白C、D、E病，低色素性贫血、阻塞性黄胆、脾切除术后等。,（一）红细胞渗透脆性试验,卷喉毅油獭捶茎铂璃邮壹滞砷垂楞溢沽征识儒寡仰球字衅恿欺帅殃珐溶猖第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（二）红细胞孵育渗透脆性试验,血液置于37温箱孵育24h,葡萄糖的消耗，贮备的ATP减少,膜对阳离子的主动传递受阻，Na在红细胞内聚集,红细胞膨胀，孵育渗透脆性增加,正常人的红细胞经孵育处理后，其渗透脆性变化不明显，而有,细胞膜缺陷或某些酶缺陷的红细胞，,由于其内的葡萄糖和ATP很快被消耗，孵育后脆性明显增加。,德阿串鲁涟咐璃予闲垄岩汾黍臭惨促埋味引眠蔗悠懒汝忧缉乏钝镀椒沧调第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,【,参考区间,】,未孵育50%溶血：4.004.45g NaCL/L；,37孵育24h 50%溶血：4.655.90g NaCL/L,增加,见于轻型遗传性红细胞增多症，,遗传性非球形红细胞溶血性贫血。,降低,见于珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、,镰状细胞性贫血、脾切除手术后。,本试验用于轻型遗传性红细胞增多症，遗传性,非球形红细胞溶血性贫血的诊断和鉴别诊断。,（二）红细胞孵育渗透脆性试验,辟迂嫁与半伯呻房菇宗福疗水餐煞嚷劈卷拢梅难才祝茁发卒切挞废辕巧店第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（三）红细胞自身溶血试验及其纠正试验,血液置于37温箱孵育24h,葡萄糖的消耗，贮备的ATP减少,膜对阳离子的主动传递受阻，Na在红细胞内聚集,红细胞膨胀，孵育渗透脆性增加,在孵育时，加入葡萄糖和ATP作为纠正物，观,察溶血可否有一定的纠正，称为纠正试验。,【,参考区间,】,正常人红细胞孵育48小时，不加纠正物的,溶血率4.0%，加葡萄糖的溶血率1.0%，,加ATP纠正物的溶血率290s,【,应用评价,】,遗传性球形红细胞增多症AGLT,50,明显缩,短（1525s）。自身免疫性溶血性贫血、,肾功能衰竭、妊娠等AGLT,50,也可缩短。,慷型妇泅跟席品锈晾疹表蛊好勾戮瘁唤豁国腺捧宝垄序实盼捆炎灼葛衬刘第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（五）酸化血清溶血试验,正常人的血清，在pH6.46.6条件下,酸化，补体被激活,PNH患者体内存在对补体敏感的红细胞，在此条件下发生溶血。而正常人的红细胞不被溶解。将血清加热5630min灭活补体后，血清失去溶血作用。,本实验是,PNH的确证实验,；其假阳性和假阴性较少见，,但如患者多次输血而使其补体敏感红细胞相对减少时，可,呈弱阳性或阴性。某些自身免疫性溶血性贫血患者溶血发,作严重时也偶呈阳性，此时，,如果血清加热破坏补体后，,试验结果由阳性转变为阴性，那么更支持PNH的诊断。,勋腋政廖帕化媳愿琶欧诬憾裸杨旺寞颅孤抵者桅乍梧徐命间殉党演隙钝拓第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,酸化血清溶血试验,钒小金琉渝拨菠绷民瘟频麻改接判凉藏穿苛微焊完纵芍姥蛆归包胎消孽寄第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（六）蔗糖溶血试验,PNH患者因红细胞膜有缺陷而对补体敏感,在离低子强度的蔗糖溶液中，补体与细胞膜的结合加强,使对补体敏感的红细胞膜造成缺损，红细胞溶解破损,【,参考区间,】,正常人为阴性,【,应用评价,】,本试验比酸溶血试验敏感，但特异性,较差，是PNH简易过筛试验。再生障碍,性贫血、巨幼红细胞性贫血和自身免疫,性溶血性贫血患者也可出现阳性，故必,要时需做酸化血清溶血试验加以鉴别。,旬溯终袋馏落舜码裕介呻脊埃南香寞悸冠庄银铱机颓密服籍积榨猩慎壁峰第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（七）血细胞表型分析,血细胞表型分析,PNH是一种获得性基因突变导致的克隆性疾病，其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂锚（GPI-anchor）连接蛋白如CD59,CD55等表达明显减低或缺乏，细胞膜对补体的敏感性增强而引起溶血性贫血。,用GPI连接蛋白如CD59的单克隆抗体作分子探针，流式细胞术分析红细胞和白细胞膜CD59等分子的表达量和计数其缺乏表达（阴性）细胞的数量。,【,参考范围,】,PNH诊断的临界值：CD59阴性的红细胞大于5%和CD59阴性的中性粒细胞大于10%，非PNH者均小于5%；,PNH患者CD59阴性的红细胞大于9%，多数患者大于20%；CD59阴性的中性粒细胞均大于16%。,【,应用评价,】 该实验的灵敏度和特异性可达100，而Ham实验的灵敏度为50左右，但实验需要的流式细胞仪其价格比较贵，实验价格也较高。,烤懒醉墟镀钥哪刨鹏茧棵铱啦显砒痈嫡魄隘士纷拄驰潘婴刊黄舰哩针补阜第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（八）红细胞膜蛋白电泳分析,将制备的红细胞膜样品进行SDS-PAGE电泳，根据样品中各种蛋白相对分子质量的不同，分离得到红细胞膜蛋白的电泳图谱，从而可见各膜蛋白组分百分率。,红细胞各种膜蛋白组分百分率变化较大，与正常红细胞膜蛋白电泳图谱作比较。或以带3蛋白为基准，各膜蛋白含量与带3蛋白的比例表示。,许多先天性和后天性溶血性贫血都伴有红细胞膜蛋白异常，各种膜缺陷疾病如遗传球形红细胞增多症有收缩蛋白等含量减低或结构异常。某些血红蛋白病骨架蛋白等可明显异常。,霓幅鞋悄哈褥魁弘闪尚沛皱刚著蛤瑚垮可临砷立战显商挟朵肉涕怂透哆德第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,三、红细胞膜缺陷检查的应用,歪擂阮兢梭惭修者招川逃监辟妄移汝抑偏迭隐犀辨刹证魔嫁僻沙跨取衬都第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,红细胞渗透脆性试验可作为遗传性溶血性贫血病因诊断的筛选试验,蚜孤肚肖慢董森稚桔姨弃孜纵吊伞泥莫声衡挪迈柑毙艳救绞访掉藉肯祸浪第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（一）遗传性球形红细胞增多症,遗传性球形红细胞增多症,是一种红细胞膜蛋白结构异常所致的遗传性溶血,病，,其特点是外周血中出现较多小球形红细胞。,多呈常染色体显性遗传，少数呈常染色体隐性遗,传的HS常合并新的基因突变而发病，研究显示,HS有第8号染色体短臂缺失。,贫血、黄疸和脾肿大，是最常见的临床表现,红细胞膜收缩蛋白自身聚合位点及其结构的区域异常,膜结构与功能的异常,钠泵功能亢进，钠、水进入细胞增多,红细胞呈球形,红细胞内的ATP相对缺乏,钙-ATP酶受抑制，钙沉积膜上，膜的柔韧性降低,该红细胞通过脾脏被截留，于巨噬细胞内破坏,破坏不能被机体代偿时出现溶血性贫血,夯煞愁披色回闹别赦蚂雏轨阅湍今匀宙寐佩肘怕笆夕隧剃酒月附拆笺朝入第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,实验室检查,遗传性球形红细胞增多症,1血象 血红蛋白和红细胞量多为正常或轻度降低，血片中出现,小球形红细胞为本病的血液形态学特征；网织红细胞增,加，一般为5%10%，急性溶血发作时可高60%70%。,嗜多色性红细胞增多，外周血中可出现少数幼稚红细胞。,2骨髓象 红细胞增生旺盛，粒红比值降低，红细胞系以中、晚,幼红细胞为主，可占有核细胞的25%60%；当发生再,障危象时，骨髓中红细胞系再生低下，有核红细胞减少。,3渗透脆性试验 HS红细胞渗透脆性增高,4红细胞膜电泳分析 SDS-PAGE电泳可得到红细胞膜蛋白各组,分的百分率，80%的患者可发现异常。,5红细胞膜蛋白定量测定 绝大多数HS有一种或多种膜蛋白缺乏,6分子生物学技术应用,球形红细胞较正常红细胞小、厚，且深染，大小比较均一，直径变小（6.27.0m），厚度增加（2.23.4m），染色后细胞中央淡染区消失，小球形红细胞所占的比例在不同的患者中差别较大，多数患者在10%以上（正常人多5%）。,蛤砷赤减丸烘针膀锁手眯馁疟尖栏饶偷滚丽停峦石程竟阉隘氓笺兢辊沮梦第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,遗传性球形红细胞增多症,浑姿赠窄崇尘绵嫌烷储孕凹钱苛旗穆彰貌睡释扑严蒜盲悍瑰辖玛吾蚤瀑萍第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,诊断和鉴别诊断,HS无特异的临床表现和实验室检查，诊断时,应结合病史、临床表现和实验室检查综合分析。,血涂片中小球形细胞大于10%，红细胞渗脆性增加，,有阳性的家族史，本病的诊断可成立。,注意与自身免疫性溶血性贫血所致继发性球形,红细胞增多症相鉴别，后者Coombs（+）。,对Coombs试验多次阴性者，应作红细胞膜蛋白分析,和组分定量，必要时采用基因序列分析的方法，寻找,诊断依据和进行家系调查以鉴别诊断。,掉揍篇陵篙场崖魔靴饮固俞砸婆暑蜀装俺论体岸逐战摇疟晨窝横准绚匹茨第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（二）遗传性椭圆形红细胞增多症,是一组由于红细胞膜蛋白异常引起的异质性家族遗传性溶血病，,其共同特点是外周血中存在大量的椭圆形成熟红细胞。,HE大多为常染色体显性遗传，极少数为常染色体隐性遗传。,定义,本病的,原发病变是膜骨架蛋白异常，,其膜收缩蛋白结构有缺陷，膜骨架稳定性降低。,HE的红细胞在骨髓释放入血液循环后由于膜骨架蛋白的缺陷，在通过微循环时由于切变力的作用变成椭圆形后不能恢复正常，同时，红细胞由于膜骨架稳定性的降低容易破坏，大多数椭圆形红细胞在脾脏被破坏。,锥斑揪浅江铡摩唾试蚁屠惩跃腐相尔醋毅淮傻求鬃聘幅贫俊汾奢涤亭词肋第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,诊断和鉴别诊断,遗传性椭圆形红细胞增多症,1血象 有轻重不等的贫血，隐匿型可表现正常。,血片中椭圆形,红细胞的比例大于25%,。,其形状呈椭圆形、卵圆形、棒状或,腊肠形，椭圆形红细胞横径与纵径之比小于0.78，,硬度增,加，中心淡染区消失。,2,骨髓象 骨髓红细胞系统增生活跃为增生性贫血骨髓象。,3,红细胞渗透脆性试验 红细胞渗透脆性试验和,自身溶血试验多增高。,4红细胞膜蛋白电泳分析及低离子强度非变性凝胶电泳膜,收缩蛋白分析 其异常结果有助于膜分子病变的确定。,5分子生物学方法 检测某些膜蛋白基因突变。,依据临床表现、家族调查和相关实验室检查多数病例可确诊，,无阳性家族史时若椭圆形红细胞大于50%也可明确诊断。,本病,应与缺铁性贫血、巨幼细胞贫血、骨髓纤维化、骨髓病性贫血、,骨髓增生异常综合征、珠蛋白生成障碍性贫血等鉴别。,贮峪筏际暂泽疚赃倒侵槐闲值畦沦喘戮寿靖陀争吃绥贿骚责绎侩改坐迷旨第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,遗传性椭圆形红细胞增多症,逛揩焚抑摧镣视润柿晨齐芹糟俐呼喳釉狐寄疫哭拳引捣尝吹姆淌佃竿否级第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（,三）遗传性口形红细胞增多症,是一种罕见的常染色体显性遗传性慢性溶血性贫血。,本病的特征是血片中出现较多的口形红细胞，有轻重不一的溶血阳性家族史。,HST不是单一的疾病，而是发病机制、红细胞形态和临床表现都不同的一组综合征。,定义,在口形细胞中，钠离子浓度增高，钾离子浓度减低，从而使离子泵的负荷增至610倍，但仍不足以代偿钠钾的失衡状态，导致细胞水肿、肿胀，体积增大，红细胞脆性增高。,根据口形红细胞内钠、钾离子和阳离子总量的多少,水肿细胞型又称水肿细胞增多症，其细胞内钠、钾离子和阳离子总量明显增多，致水分进入细胞内，使红细胞肿胀表现为口形；此型细胞渗透脆性增加，变形能力减弱，在脾扣留被巨噬细胞吞噬破坏。,干细胞型又称干细胞增多症或脱水型细胞增多症，由于细胞脱水致红细胞边缘皱褶或不规则，有时可呈靶形；此种细胞变形能力降低，红细胞渗透脆性降低，主要在单核-巨噬细胞系统内破坏。,其他细胞型,抨坤呀剪磨闪捕谐怎雌斯惠镇魁鸿材朱蚌竟牙危巾罚厅顷沧乐裙蔫雏钥如第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,诊断和鉴别诊断,遗传性口形红细胞增多症,血片中口形红细胞增多，可达10%50%。口形红细胞中心苍白区呈狭窄的裂缝，裂缝的中央较两端更为狭窄，缝的边缘清楚，类似微张的鱼口；而在湿血片中，红细胞双凹面消失而呈单面凹，形似碗状。正常人外周血中也可见到少量口形细胞，一般为小于4%。,贫血一般轻微，血红蛋白很少低于80g/L，多数患者网织红,细胞增多，约1020；红细胞渗透脆性试验增高，也可正常或降低；自身溶血可呈阳性，可被葡萄糖或ATP部分纠正。,依据临床表现、,外周血口形红细胞增多和家族史一般可作出诊断。但需要与继发性口形红细胞增多症相鉴别，继发性口形红细胞增多症除口形红细胞增多外，一般无溶血，缺乏家族史，,并具有相应疾病的特征。,赘亢铬艳搽舌胀瞒等老涛制歌镭厄浪雷养墒吾涨能狰剑急邢垣毙键菜酶貌第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,遗传性口形红细胞增多症,臀谦卉苹萌征妒硒前苑镶凛鸯颜赌掠脚滥愧质骂酮检衡赘寓炸拢兵煌孝传第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（四）阵发性睡眠性血红蛋白尿症,是一种获得性造血干细胞基因突变引起红细胞膜缺陷所致的溶血病。出现细胞膜对自身补体（C3）敏感性增高的异常红细胞，引起慢性血管内溶血。睡眠时加重，可伴发作性血红蛋白尿和全血细胞减少症。,定义,骨髓造血组织受到损伤，而引起多能造血干细胞的基因突变，产生膜异常的干细胞克隆，异常造血干细胞不断增生、分化，形成具有PNH缺陷的细胞群；这种缺陷不仅累及红细胞，也累及患者的粒细胞、淋巴细胞和血小板。,患者体内红细胞分三型,型对补体的敏感性正常；,型对补体中度敏感；,型对补体高度敏感。,与睡眠有关的间歇溶血发作，以血红蛋白尿为主要特征，多为慢性血管内溶血，伴有全血细胞减少和反复血栓形成。,临床表现,发病机制,静郝梢恒慑萍挚潞僚弧缠沤趴揉究粪岳鸿庶侩垣巡歧琵碾蔼治凳生丫淤娇第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,实验室检查,阵发性睡眠性血红蛋白尿症,1血象 贫血，呈正色素性或低色素性贫血，网织红细胞,常增高，可见有核红细胞及红细胞碎片。白细胞,和血小板多减少，半数患者呈全血细胞减少。,2骨髓象 半数以上的患者三系增生活跃，尤以红系造血,旺盛。随病情变化表现不一，不同穿刺部位增,生程度可明显差异。,3特殊溶血试验,（1）溶血存在的依据：,尿隐血试验或尿含铁血黄素试验阳性。,（2）补体敏感的红细胞存在的依据：蔗糖溶血试验、,热溶血试验、,酸化血清溶血试验。,4,流式细胞术检测发现GPI锚连接蛋白,（CD55或CD59）,低表达的异常细胞群，支持PNH诊断。本试验,是目前,诊断PNH特异性和敏感性最高且可定量的,检测方法。,朋聚便忍跋锄沉伍宪蹲吉淌割翠掸咏弦蔬亏侦氛惩坎窘甫殴羚叭而赖求鉴第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,诊断和鉴别诊断,阵发性睡眠性血红蛋白尿症,1,诊断标准,临床表现符合PNH或上述必须考虑为PNH的表现情况；,有肯定的血红蛋白尿发作或血管内溶血的直接、间接证据；,实验室检查证明有补体敏感的红细胞群存在和检测CD55及CD59,这两种常见的血细胞表面锚蛋白相关抗原的表达情况是确诊试验。,2鉴别诊断 排除其他溶血病，全血细胞减少还应与再障鉴别。,3再障-PNH综合症的诊断 凡再障转化为PNH，或PNH转化为再障，,或兼有两病特征者，均属再障PNH综合征。,再障-PNH综合症再分为四种情况：,（1）再障-PNH：指原有肯定的再障（而非未能诊断的PNH早,期表,现），,转为可确定的PNH，再障的表现已不明显。,（2）PNH-再障： 指原有肯定的PNH（而非下述的第4类），,转为明确的再障，PNH的表现已不明显。,（3）PNH伴有再障特征：指临床及实验室检查所见均说明病情仍以,PNH为主，但伴有一个或一个以上部位骨髓增生低下、,巨核细胞减少、网织红细胞不增高等再障表现者。,（4）再障伴有PNH特征：指临床及实验室检查所见均说明病情仍以,再,障为主，但伴有PNH的实验诊断结果阳性者。,入对栓框堂挎岸并马抹跑樱姆锰娩妇拱迂绊全蔬僻净砾移坞痉奎辕彼区君第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,PNH与再障的鉴别,临床症状与实验室检查,PNH,再生障碍性贫血,出血,较少，且程度较轻,常有，程度较重,感染,较少,较多,巩膜黄染,部分病例有,无,肝脾肿大,部分病例有,偶见,全血细胞减少,约半数病例有,所有病例有,血小板波动,约半数病例有，可达正常,少有波动,感染时白细胞升高反应,无,少有,网织红细胞,常增高,常减少,骨髓增生活跃或明显活跃,约90.5%,约40.7%,中性粒细胞碱性磷酸酶积分,明显降低,增高,血清胆红素,明显增高,可轻度增高,蔗糖溶血试验,阳性,阴性,尿含铁血黄素试验,均有,罕见,酸化血清溶血试验,阳性,阴性,锭灭就拜钙荔岔实姓仟智帧熙黍伟沛恢越现瞧揩曲幸元妙桑胶辩聪乘袭婴第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,最常见的为葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺陷症、丙酮酸激酶缺陷症。,第三节 红细胞酶缺陷检查,定义,红细胞酶缺陷是指参与红细胞代谢（主要是糖代谢）的酶由于基因突变导致的酶活性或性质改变所引起的溶血及（或）其他表现的疾病。,亦切粤粮殖甜小贩爸均判浚女芳铆雀乖钞掌矾磕伯撇摘硷露嚣拿辉骤诞勿第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,一、红细胞的糖代谢,乳酸脱氢酶,葡萄糖,6-磷酸葡萄糖,磷酸烯醇式丙酮酸,丙酮酸,乳酸,5-磷酸核酮糖,6-磷酸葡萄糖酸,ADP,ATP,NADH,NAD,-,丙酮酸激酶,NADPH+H,+,NADP,+,NADP,+,G-6-PD,6PGD,谷胱甘肽还原酶,NADPH+H,+,氧化型谷胱甘肽,谷胱甘肽,还原型谷胱甘肽,谷胱甘肽过氧化酶,H,2,O,H,2,O,2,参与核苷酸代谢或转变为3-磷酸甘油醛后参与糖酵解,糖酵解途径,戊糖磷酸旁路途径,撬群裕悔镜暖粮铝俯洲四录便遗辽案鹊偏妻芳硼艺懒眨驰纽丢兜拙沟饿幅第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,二、实验室检查,（一）,高铁血红蛋白还原试验,G6P,G-6-PD,NADP,还原型美蓝,高铁血红蛋白（Fe,3+,）,高铁血红蛋白还原酶,6-磷酸葡萄糖酸,NADPH,氧化型美蓝,血红蛋白（Fe,2+,）,1.,加入亚硝酸盐使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化成高铁,血,红蛋白，正常红细胞的G-6-PD催化戊糖旁路使NADP成,NADPH，其脱下的氢通过亚甲蓝试剂的递氢作用而使高铁血,红蛋白（Fe,3+,）还原成亚铁血红蛋白（Fe,2+,），比色测定。,2.,当G-6-PD缺乏症时，由于NADPH生成减少或缺乏，,高铁血红蛋白不被还原或还原速度减慢，高铁血红,蛋白还原率下降。,3.,正常人高铁血红蛋白还原率75%（脐带血77%）。,4. G-6-PD缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降。中间缺乏,（杂合子） 为31%74%，严重缺乏（半合子或纯合子）30%。,富哦寺险葬达啮逾橡豁御逞怖捶利帝述将秀兼妖迪捉帅劣辆让埠涪堵褂碟第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（二）,变性珠蛋白小体生成试验,G-6-PD缺乏的病人血样加入乙酰苯肼于37孵育24小时，使血红蛋白变性，用煌焦油蓝等碱性染料染色观察红细胞珠蛋白小体的生成情况，,计算含5个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率。,正常人含5个及以上珠蛋白小体的红细胞一般30%。,二、实验室检查,葡顿崎莹闹瞩胸沛丧畜彭敖舀噪披慕巡障订倪事膝刊纶蒙瘫凸梨抿臀药耪第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,应用评价,1G-6-PD缺乏症常高于45%，可作G-6-PD缺乏的筛检试验。,但还原型谷胱甘肽缺乏症也增高；不稳定血红蛋白病含小体,的细胞百分率为75%84%，HbH病和化学物质中毒时也增高。,2变性珠蛋白小体，主要是、珠蛋白链的病变而引起的,溶解度和稳定性降低所致；是一种变性血红蛋白颗粒，一,般附着在细胞膜上，故又称血红蛋白包涵体，变性珠蛋白,小体可被碱性染料着色。该实验与异丙醇试验和热不稳定,实验一样可作为不稳定血红蛋白存在的一种证据。,3G-6-PD活性正常时，红细胞通过磷酸戊糖旁路形成NADPH,使MHb还原成亚铁血红蛋白，因而含变性珠蛋白小体的红细,胞减少，而G-6-PD活性减低时，NADPH减少，MHb增多，,导致含变性珠蛋白小体的红细胞增多，不稳定血红蛋白由于,血红蛋白分子结构发生改变，稳定性减低易被氧化，含变性,珠蛋白小体的红细胞可增多，伯氨喹啉型溶血性贫血，含变,性珠蛋白小体的红细胞也可增多。,（二）,变性珠蛋白小体生成试验,侧糙胜窃怒副包糟冉吉箍谱纬盎剑凶蟹揍仇炙野少备绦证艺鲜煎次阉苯秆第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,在G-6-PD和NADP,+,存在下，G-6-PD能使NADP,+,还原成NADPH，后者在紫外线照射下会发出荧光。NADPH的吸收峰在波长340nm处，可通过单位时间生成的NADPH的量来测定G-6-PD活性。,（三）,G-6-PD荧光斑点试验和活性测定,G-6-PD缺陷见于蚕豆病、伯氨喹啉型药物性溶血性贫血。利用此实验可对高发区域人群或疑诊的新生儿进行筛查。,正常人有很强荧光。正常人酶活性为：,（8.341.59）U/gHb（37）,（ICSH推荐的Glock与McLean法）,（12.12.09）U/gHb（37）（WHO推荐的Zinkham法）,G-6-PD缺陷者的荧光很弱或无荧光；杂合子或某些,G-6-PD变异者则可能有轻到中度荧光。,二、实验室检查,驾娟装汝今龚他叛眯季陡厦崭融淄涝脂黄御碾括给范碑湛紫尊涧妖益啤橡第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（四）,丙酮酸激酶荧光斑点试验和活性测定,在ADP存在的条件下催化PEP转化成丙酮酸，在NADH的作用下，丙酮酸被LDH转化为乳酸，荧光标记NADH上，此时有荧光的NADH变为无荧光的NAD，检测以上过程荧光消失的时间反应PK的活性。,荧光斑点不消失或时间延长说明丙酮酸激酶活性缺乏，中间缺乏（杂合子）时，荧光2560分钟消失，严重缺乏（纯合子）时，,荧光60分钟不消失。,正常人丙酮酸激酶活性斑点在25分钟内消失。,酶活性（15.01.99）U/gHb。,PEP,ADP,LDH,乳酸,丙酮酸,PK,ATP,荧光标记NADH,NAD+,二、实验室检查,菱醋十捎紫萤彬封竿蔬孽僻蔚砌酬骨悸孟刺蚂趟盘肮褒携农将接丹兴卿链第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,红细胞G-6-PD基因突变致活性降低和/或酶性质改变，是一种X性连锁隐性或不完全显性遗传性疾病。,G-6-PD缺乏时，红细胞膜脂质和膜蛋白巯基的氧化，引起红细胞僵硬，易被脾脏和肝脏中的巨噬细胞破坏导致溶血。,三、红细胞酶缺陷检查的应用,（一）红细胞葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺陷症,煌厢苦奇醉支京残分带涵膊柄鲸盛庚熬兑美痊顷澄倒钉旨孩妊织蕾噬枷滁第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,实验室检查,1溶血的检查,非遗传性,有诱因，急性溶血，血,管内溶血；而,遗传性,非球形细胞溶血性,贫血具有慢性血管外溶血的实验室特征,2G-6-PD缺乏的筛检试验,高铁血红蛋白还原试,验、荧光斑点试验、硝基四氮唑蓝纸片,法。,荧光斑点试验的特异性最高，高铁,血红蛋白还原试验的敏感性最强。,3G-6-PD确诊试验,G-6-PD活性定量,检测能准,确反映酶的活性。,牲拨栽瘪贮咎必遍峡疵纬鞠劲大吮些态驯藩慈浩曹断搭启伞俱杆茸迢怜峨第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,诊断依据是红细胞G-6-PD活性的实验室检查，,临床表现及阳性家族史。,如筛选试验中两项中度异常；或一项筛选试验中、,度异常加上Heinz小体生成试验阳性（有40%,红细胞含Heinz小体，每个红细胞有5个以上,Heinz小体）并排除其他溶血病因；或一项筛,选试验中度异常，伴有明确的家族史；或一项,筛检试验严重异常；或定量测定G-6-PD活性,较正常平均值降低40%以上，均可确诊。,诊断和鉴别诊断,豆西万漆糕绰垫今蛹检澎烃耘欺看转构迈统斥贱相锐简桂碍涯好砰奥机箕第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（二）丙酮酸激酶缺陷症,1.PK基因缺陷，常染色体隐性遗传，仅次于G-6-PD缺陷症,2.PK缺陷时，ATP产生减少，引起血管外溶血，表现为,慢性溶血性贫血。,检验,1筛检试验 红细胞自溶血试验、 PK荧光斑点试验,2酶活性定量试验 PK活性检测,3ATP测定,4中间代谢产物测定,2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）,磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）,2-磷酸甘油酸（2-PG）,诊断和鉴别诊断,1红细胞PK缺乏的实验室诊断标准,2遗传性红细胞丙酮酸激酶缺乏症主要通过,红细胞PK活性的测定进行诊断。,三、红细胞酶缺陷检查的应用,塔掉荷碘杠秘挨骏炽菊夫获砖菌蜂棵熟鬃糖琼叹猿余狙葵贺擎酗袒颖潮南第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,第四节 血红蛋白病检查,成熟红细胞内的主要蛋白质是血红蛋白（Hb），占细胞干重的96%，占细胞容积的35%。正常血红蛋白由两对珠蛋白肽链和4个亚铁血红素构成的4个亚基组成的四聚体，形状近似球形的结合蛋白。,血红蛋白的合成受铁的供应、原卟啉和珠蛋白合成的影响。,分子结构：,由血红素和珠蛋白构成，其分子由四个亚基构成，即两个亚基和两个亚基，可组装成,2,2,结构,血红蛋白,合成：,65%合成于有核红细胞期，35%合成,于网织红细胞期。血红蛋白是一种结,合蛋白，,分子量约为64458,每个亚基由：,一条珠蛋白肽链和一个血红素分子构成,血红素是铁原子和原卟啉的复合物。为含铁卟啉衍生物，铁原子位于原卟啉的卟啉环中心,珠蛋白肽链有6种：、。,出生后白主要有、四种珠蛋白肽链。,宫源碴洁凑洋诈挚宛频蚂削爱邮那陀先珠童纶勺拢喻榆贾练冉鄙浸铬郁躲第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（一）血红蛋白的结构,正常血红蛋白由两对珠蛋白肽链和4个亚铁血红素构成的4个亚基组成的四聚体，形状近似球形的结合蛋白。血红蛋白的合成受铁的供应、原卟啉和珠蛋白合成的影响。,血红蛋白由四条非共价结合的球蛋白链组成，每条链结合一血红素基团，亦即血红蛋白分子的氧结合位点。,薪骋床秦葵求借报汗碟淄晕坑羚照嚏篱肛衙默纂肄贪匙脂邵未叹抠地晤深第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,血红素是铁原子和原卟啉的复合物，是含铁卟啉衍生物，铁原子位于原卟啉的卟啉环中心。血红素是血红蛋白的组成成分，是Hb、Mb、多种酶和多种细胞色素的辅基，其合成于有核红细胞和肝细胞的线粒体内。血红素合成后，离开线粒体，在胞质内与珠蛋白肽链结合为血红蛋白；血红素由脾脏、骨髓、肝脏中的巨噬细胞吞噬降解。在血红素合成过程中酶的缺陷引起卟啉或其前体在体内蓄积可导致卟啉病。,珠蛋白按四级结构与血红素形成血红蛋白，血红蛋白的每个亚基由一条珠蛋白肽链和一个血红素分子构成，肽链在生理条件下成球形，把血红素分子包在里面，这条肽链盘绕成的球形结构又被称为珠蛋白。,胚胎期：,Hb Gower1（,2,2,）,Hb Gower2（,2,2,）,Hb Porthland（,2,2,）,3周出现，12周完全消失,出生后：,HbA(,2,2,)：占总量的96%98%；HbA,2,(,2,2,)：占总量的1.2%3.5%；HbF(,2,2,)：出生后迅速下降，2岁时接近成人，占总量的2%以下。,胎儿后2/3期和新生儿期：,HbF(,2,2,)：胎儿血红蛋白,（一）血红蛋白的结构,诡林攀辊巍之珊蔚榴项元状滨阜各堪筏吏桃币隅溢棺诗痒掉鳖原讯妮埂损第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（二）影响血红蛋白结构和功能的因素,伸众殷镊压瞻垢资供兰挝疵椿参酌惑并词搔蝴蓝碴渔幼害蜡饶伯俗弥孝允第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,二、实验室检查,爪炊涤驯阉釉览媚课郭汁会拯违漆灯价蓄蛇龄父集囊塘倡犊宵灭锨话想犬第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（一）,血红蛋白电泳,根据不同的血红蛋白带有不同的电荷，等电点不同，在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于Hb的等电点时其带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动；反之，Hb带正电荷向阴极泳动，不同的血红蛋白所带电荷和相对分子量不同，可分离出各自的区带。,1通过与正常人的血红蛋白电泳图谱进行比较，可发现,异常血红蛋白区带。如HbH、HbE、Hb Barts、HbS、,HbD和HbC等异常血红蛋白。,2,HbA,2,增多，见于珠蛋白生成障碍性贫血，为杂合子的重要,实验室诊断指标。HbE病时也在HbA,2,区带位置处增加，但含,量很大。HbA,2,轻度增加亦可见于肝病、肿瘤和某些血液病。,1pH8.6TEB缓冲液醋酸纤维膜电泳 ，适合于检出HbA、,HbA,2,、HbS、HbC，但HbF不易与HbA分开，HbH与,Hb Barts不能分开和显示。,2pH6.5TEB缓冲液醋酸纤维膜电泳 主要用于HbH和,Hb Barts的检出。,二、实验室检查,纪轨胚玩毙弯鞋非喝痔捻瓤碟倍炕杖砂遥祸猩旧换圭边跪月旬晌吟首裳捐第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（二）,抗碱血红蛋白检测,胎儿血红蛋白（HbF）,具有比HbA更强的抗碱作用，将待检的溶血液与一定量的NaOH溶液混合，作用1分钟,后加入半饱和硫酸铵中止碱变性反应。HbF抗碱变性作,用强，没有变性存在于上清中，而HbA变性沉淀，,取上,清液于540nm处测定吸光度，检测出HbF的浓度。,【,应用评价,】,1,HbF绝对增多,珠蛋白生成性贫血时HbF增加，重型者,达30%90%，中间型常为5%30%，轻型小于5%。遗传,性胎儿血红蛋白持续综合征患者，HbF可高达100% 。,2,HbF相对增多,某些血液疾病,3,HbF生理性增多,多见于孕妇及新生儿。,【,参考区间,】,成人2%，新生儿40%,二、实验室检查,凭侈函盗纫畅爬撑漳孜孔窍琶睹沟旭骋贴誓卡椭涂灿盅鸦矢酿魁拓傣卒撑第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（三）,血红蛋白F酸洗脱试验,HbF具有抗碱和抗酸作用，其抗酸能力比HbA强。,将血涂片于酸性缓冲液中孵育，,含HbF的红细胞,不被酸洗脱，可被伊红染成红色，而含HbA的红,细胞均被酸洗脱，不能被伊红着色。,【,应用评价,】,珠蛋白生成障碍性贫血着色细胞增加，重型患者大多数,红细胞染成红色，轻型患者可见少数染成红色的细胞。,遗传性胎儿血红蛋白持续综合征全部红细胞均染为红色。,【,参考区间,】,正常血片含HbF的着色红细胞,0.02（2%）；孕妇可有轻度增加。,二、实验室检查,谭剥僧淘昨雾迅窿擂劈普蕉朵俯何除侣软批逾偏嘿仓段但每宫携雨仰折恍第九章溶血性贫血第九章溶血性贫血,（四）,异丙醇沉淀试验,在异丙醇这种能降低血红蛋白分子内部氢键,的非极性溶剂中，,不稳定血红蛋白更快地裂,解沉淀。,通过观察血红蛋白液在异丙醇中的,沉淀现象对不稳定血红蛋白进行筛检。,【,应用评价,】,不稳定血红蛋白存在时，常于5分钟时出现沉淀，,20分钟开始出现绒毛状沉淀。血液中含有较多,HbF、HbH、HbE时也可出现阳性结果。,【,参考区间,】,正常人血红