2.1微生物的实验室培养

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,选修1 专题二,课题1 微生物的实验室培养,课题1 微生物的实验室培养,微生物的实验室培养条件：,（1）合适的营养和环境条件,（2）确保其他微生物无法混入,一.培养基,1.概念：,按照微生物对,营养物质,的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,2.种类：,（按物理形态分）,液体培养基、,半固体培养基,固体培养基,应用微生物分离、鉴定、计数和,菌种保存等方面,按照培养基用途分,选择性培养基,鉴别培养基,按照培养基的成分来分,合成培养基、天然培养基、半合成培养基,3.成分：,思考：,各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？,水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）,+满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求,二.无菌技术,思考：,1.什么是无菌技术？包括哪些方面？,2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）,3.消毒和灭菌有何不同？,4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？,无菌技术：,泛指培养微生物操作中，所有,防 止杂菌污染,的方法。,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染,。,3.常用的消毒方法：,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法,常用的灭菌方法：,灼烧灭菌,干热灭菌,高压蒸汽灭菌：100kPa 121 15-30min,牛奶,接种室、接种箱或超净工作台,接种工具，接种环、接种针或其他金属用具,玻璃器皿（吸管、培养皿）,判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。,（1）豆浆 （2）游泳池 （3）,超净工作台,（4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶（5）培养细菌用的培养皿（6）无菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培养基,（8）,接种环、接种针,（9）实验操作者的双手,三.实验操作-大肠杆菌的纯化培养,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,计算称量溶化灭菌,倒平板,（二）纯化大肠杆菌,最常用的接种方法有：,平板划线法,和,稀释涂布平板法,（冷却至50）,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证,“,无菌,”,。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,菌种的保存,1、临时保藏法：,对象：,温度：,缺点：,2、甘油管藏法：,对象：,温度：,结果分析与评价,课题延伸,（P20）,频繁使用的菌种,4（冰箱）,容易被污染或,产生变异,长期保存的菌种,-20（冷冻箱）,接种环,接种针,倒平板,讨论1，2,讨论3，4,平板划线法,讨论,1，,2，3,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,操作的,第一步灼烧,接种环：,每次,划线前,灼烧接种环：,划线,结束后,灼烧接种环：,避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,划线后，线条,末端,细菌的数目比,线条起始处,要,少,，,每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的,菌落,菌落,细菌的菌落特征因种而异,涂布器,稀释涂布平板法,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,提示：可以用,手触,摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到,刚刚不烫手,时，就可以进行倒平板了。,通过灼烧灭菌，,防止瓶口的微生物污染培养基,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，,将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,不,能,空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,选择培养基,不加氮源的无氮培养基:,分离固氮菌,不加含碳有机物的无碳培养基:,分离自养型微生物,加入四环素等抗生素的培养基:,分离导入了目的基因的受体细胞,不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:,分离杂交瘤细胞,加入高浓度食盐的培养基:,分离金黄色葡萄球菌,