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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验四 细菌的染色,目的：,1,、了解细菌革兰染色的原理 掌握革兰染色方法,2,、学习掌握芽孢染色方法内容：,1,、涂片,2,、革兰染色、芽孢染色,细菌染色的目的意义：,细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。,染色剂分类：,碱性染色剂：（电离后分子带正电荷）；碱性染色剂主要用于,染核和异染颗粒等细胞结构。,酸性染色剂：（电离后分子带负电荷）；酸性染色剂主要用于,染细胞质。,复合染色剂：（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色,剂）；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次,体。,涂片染色程序：涂片 自然干燥 固定 染色干燥 镜检,细菌涂片示例：,水,革兰染色,可将所有的细菌分为两大类，蓝色的,革兰阳性,菌和红色的,革兰阴性菌,。,是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。,革兰染色步骤为：紫、碘、酒、红四步。,1,、,草酸铵结晶紫染色,1-2 min,（碱性染料着染,),，水洗；,2,、革兰氏碘液染,1-3 min,（媒染剂媒染,),，水 洗；,3,、酒精脱色,30s,左右,（脱色剂,),，水洗；,4,、稀释的石炭酸复红,30s 1min,（复染），水洗。干燥,，,镜检。,革兰阳性菌：,细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的,肽聚糖网状结构致密,，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈现紫色。,革兰阴性菌：,细胞壁,肽聚糖层薄,，网状结构交联少，类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细菌细胞被脱色，再经石炭酸复红复染后细胞呈红色。,革兰染色步骤,涂片,草酸铵结晶紫,碘 液,95%,酒精,稀释的,石 炭酸复红,自然干燥,媒染,2-3min,脱色,2030s,固定,初染,1-2min,复染,1030s,干燥镜检,接种环,蒸馏水,滴水,革兰染色时注意事项：,1,、要用幼龄培养物作革兰染色；,2,、涂片不宜太厚，以免脱色不完全造成假阳性,特殊染色法,是对细菌特殊结构进行染色的方法。包括芽胞染色、荚膜染色、鞭毛染色等。,芽胞染色原理：,细菌的芽孢壁比营养体的细胞壁结构复杂而且致密，透性低，着色和脱色都比营养体细胞困难。,方法：采用碱性染料,微加热着染,或,延长,染色,时间,，使营养体（菌体）和芽胞都着色后，再脱去营养体细胞的颜色而保留芽胞的颜色，再用其他颜色的染液着染营养体方法，并可在显微镜下区别。,孔雀石绿,沙黄法染色步骤,涂片,沙黄复染,水洗脱色,孔雀石绿,自然干燥,脱色,2030s,固定,初染,7min,复染,1030s,干燥镜检,接种环,蒸馏水,孔雀石绿,蒸汽,芽胞染色结果是：营养体染成,红色,，,芽孢染成,绿色,。,思考题,1,、革兰染色的关键步骤是什么？,2,、当你对未知菌进行革兰染色时，怎样保 证操作正确，结果可靠？,3,、进行革兰染色时注意那些事项？,4,、怎样使芽孢着色？,5,、什么是染料，分几种？细菌染色常用哪几种？,作业：,原理、方法、结果、分析讨论及绘图、思考题。,绘图：,绘出用革兰氏染色法染出的细菌形态图,要求：,视野要圆；细菌的大小要合理；并写出菌名及放大倍数；用铅笔。标出染的细菌种类及颜色。,10,100,枯草杆菌,（蓝色）,大肠杆菌（红色）,革兰氏染色,END,
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