生防菌剂研究进展课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,生防菌剂研究进展,山东省科学院生物研究所应用微生物研究室，依托山东省应用微生物重点实验室和生物制造技术研发平台，长期从事生防菌剂的研究开发工作，先后研制了木霉菌母药、木霉菌制剂,5,个（登记证号,PD20096832,、,LS20061652,、,PD20096833,、,PD20101573,、,PD20131786,、），芽胞杆菌生物杀菌剂,1,个（登记证号为,PD20094534,），微生物肥料,6,个，取得了较好的经济、社会和环境效益,;,获得省级以上奖励,10,余项，其中省部级一等奖,3,项。,前期研究成果,近年来，在霜霉病、灰霉病、根结线虫的,生物防治工作中，又,有新的,收获,。,新,筛选到的芽孢杆菌,BCJB01,和,BMJBN02,对葡萄,霜霉病的,防,效分别为,84.05%,和,73.30%,，且,菌株已被开发成悬浮剂和粉剂两种剂型,，活,菌数量分别为,3010,8,和,10010,8,CFU,；新,筛选的木,霉,WS1-10,、,GD1-3,、,TW20256,和,TW20111,对灰霉病的,抑制率为,75,%,；新筛选的木霉,T11-W,对根结线,虫卵的寄生率为,73.46%,，,新筛选的芽孢杆菌,BCJB01,对根结线虫的防,效,为,76.64%,。,近两年研究成果,BCJB01,和,BMJBN02,对霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察,霜霉病,霜霉病,BCJB01,和,BMJBN02,对,霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察,显微观察结果,：,在,相同的处理条件下，水对照中孢子囊萌发明显；,波尔多液处理孢子囊均变形，导致孢子囊不能正常萌发；,生防,细菌,BMJBN02,可,使孢子囊变形，但对已萌发出来的游动孢子无作用；,而,BCJB01,并不,抑制孢子囊的萌发，菌体围绕在孢子囊周围，在萌发口处等待游动孢子，待游动孢子游出后将其分解。,霜霉病,生防,细菌胞,壁降解酶活性测定,几丁质酶活性,测定,霜霉病,纤维素酶活性,测定,霜霉病,-1,3-,葡聚糖酶活性测定,霜霉病,BCJB01,和,BMJBN02,的,鉴定,BCJB01,和,BMJBN02,的,形态特征及生理生化测定标准参照沈萍等和东秀珠等的方法进行；以,菌株,BCJB01,和,BMJBN02,基因组,DNA,为模板，提取方法参照蒋萍，用细菌通用引物扩增,16S rDNA,序列，并将,PCR,反应产物送山东农科院测序中心测序。将测得的序列在,NCBI,中进行,Blast,比对，,发现,BCJB01,和,BMJBN02,分别,为蜡状芽孢杆菌（,Bacillus cereus,）和,巨大芽孢杆菌（,Bacillus megaterium,）。,霜霉病,BCJB01,和,BMJBN02,对葡萄霜霉病的,室内防效,实验,供试菌剂：,BCJB01,和,BMJBN02 LB,液体,发酵,稀释,10,倍液,葡萄品种：泽山,1,号,叶,盘法检测菌株,BMJBN02,和,BCJB01,室内试验结果,霜霉病,BCJB01,和,BMJBN02,悬浮剂对葡萄霜霉病的田间实验,试验,按农业部药检所田间试验准则设计。实验统计结果见下,表,BCJB01,和,BMJBN02,悬浮剂,田间,防,效,霜霉病,霜霉病,葡萄溃疡病,处理,1 BAB-1,稀释,60,倍；处理,2 W10,稀释,5,倍；处理,3 11K1,稀释,5,倍；,CK,水,处理,4 BMJBN02,稀释,50,倍；,处理,5 BCJB01,稀释,50,倍,；处理,6 30,%,嘧菌,酯稀释,1500,倍,试验数据由中国农业大学张立群教授提供,葡萄品种：红地球,葡萄品种：毛葡萄,防治灰霉病的木霉资源筛选,已获得,木霉菌株,500,余株。,发现,4,株,木霉菌对番茄灰霉病有良好的,防治效果,灰霉病,26,省,1203,个样品,灰霉病,LTR-2,WS1-10 GD1-3,灰霉病,拮抗霉,病情,指数,p,=0.05,p,=0.01,防效,%,拮抗菌,病情,指数,p,=0.05,p,=0.01,防效,%,T91-2,48.13,a,A,20.3,T16-2,26.11,de,DE,56.7,T6-3,45.26,a,A,25.0,gD3,24.97,de,DE,58.6,T9-4,43.55,ab,AB,27.9,gD1-3,2,1,.87,d,e,f,DE,63,.8,T10-1,36.78,b,c,B,C,39.1,LTR-2,19.67,d,ef,EF,67.4,T8-2,36.11,bc,BC,40.2,WS1-10,18.62,d,ef,EF,69.2,T11,32.55,cd,CD,46.1,CK,60.37,-,-,拮抗木霉防治黄瓜灰霉病的室内试验结果,利用,ATMT,方法构建了绿色木霉,LTR-2,的突变体库,筛选方法：突变体对番茄灰霉菌的重寄生能力进行,筛选,结果：,T2-60,、,T2-58,生防木霉菌,LTR-2,的遗传,改良,A,B,显微镜下观察,突变子对灰霉病菌丝,的,结合位点和,接触缠绕,情况,A,缠绕程度强,B,缠绕程度弱,将几丁质酶基因,chi42,和葡聚糖酶基因,glu14,串联在同一个表达载体上，并利用,ATMT,手段将双价抗病基因导入绿色木,霉,LTR-2,基因组,DNA,上，获得具有双价抗病基因的重组菌株,L-15,。,生防木霉菌,LTR-2,的遗传改良,遗传改良木霉防治番茄灰霉病的室内试验结果,木霉菌,LTR-2,的液,-,固发酵新工艺,:,液体发酵,(,种子,),：,1%,葡萄糖，,4%,玉米粉，,2%,豆饼粉，,0.05%,硫酸镁，,0.1%,磷酸二氢钾，,0.02%,消泡剂，,pH6.0,，培养条件：,30,，转速,150r/min,，通气量,1,：,0.5,1,；,固体发酵：麦粒或玉米粒，添加,10%,稻壳，接种量,3%,；发酵培养条件：水分控制在,55%5%,，培养条件：温度控制在,26-35,，料厚,5-10CM,，湿度,45%-55%,，培养时间,48-72h,；,产量：,5010,8,cfu,/,克固料,木霉发酵工艺及制剂的研究,木霉发酵工艺及制剂的研究,木霉菌液体发酵产厚垣孢子发酵工艺：,1、碳、氮源及无机盐的确定,木霉发酵工艺及制剂的研究,2、培养基质量分数正交实验,木霉发酵工艺及制剂的研究,最优组合：可溶性淀粉质量分数2%、豆粕质量分数5%、FeSO4 5H2O 0.02%，诱导剂量1，诱导剂加入时间24小时，pH6.0。厚垣孢子总数为1.510,8,cfu/ml。,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选,通过尝试法对8种润湿分散剂、3种成膜剂进行了筛选，结果如下：,观测结果表明，对照CK严重絮凝，而十二烷基苯磺酸钠悬浮率可达92.5%，此外木霉LTR-2在2%十二烷基苯磺酸钠浓度下活性基本没有影响，同时价格便宜，因此，选择作为种衣剂的润湿剂。,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选,综合其粘度、包衣脱落率和包衣均匀度来考查其成膜性能,，,选用,2%的聚乙烯醇水溶液作为悬浮种衣剂的成膜剂最为合适。,初选配方,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选,制备木霉悬浮种衣剂的理化性质稳定，悬浮效果好，,pH,适宜，成膜时间短，包衣效果好，脱落率低，并且长时间储存不分层结块，制剂的质量稳定，60天木霉活孢子存活率在65-70,%。,线虫,木霉,T11-W,寄生根结线虫卵,T11-W,对南方根结线虫卵具有寄生作用，校正寄生率为,73.,46%,，相对孵化抑制率为,94.,19%,。田间试验表明，,T11-W,对番茄根结线虫防效为,48.21%,。,木霉,T11-W,授权专利,利用秀丽隐杆线虫培养木霉厚垣孢子的方法及应用,越南伯克氏,菌,B418,B418,对番茄根结线虫病的防治效果达,63.42%,。田间连续,施 用,B418,菌株可湿性粉剂后，土壤根结线虫数量显著减少。,线虫,芽孢杆菌,BCJB01,、,BMJBN02,和,BtR05,线虫,