急性毒性试验设计优质PPT课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,急性毒性试验设计,一、急性毒性,急性毒性指人或动物,一次,或,24 h,之内,多次,接触外源化学物后，在短期内所发生的毒性效应，包括致死效应。,一次：指瞬间给实验动物染毒，如经口、经静脉注射染毒。,24 h,之内多次：指外源化学物毒性过低，需给予动物较大剂量。,急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外源化学物的,性质,和染毒剂量的大小有关。,如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯,丙烯腈经口急性毒性试验设计,实验目的,评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死量,LD,50，,并根据,LD,50,进行急性毒性分级,，,掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技术。,观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依据；为毒理学机制研究提供线索。,器材与试剂,1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠）,2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪刀、镊子,3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊红染液,实验方法,1、实验动物的选择,2、剂量设计及随机化分组,3、受试物的配制,4、染毒途径的选择,5、毒性反应的观察与LD50的计算,6、急性毒性的评价,1、物种和品系,对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理,方便实验 操作易于获得,繁殖生育力强,数量较大能够保障,品系纯化，价格低廉。,一,、实验动物选择,2、实验动物的年龄与体重,动 物 大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫,成年年龄（周）3 2 2 34 34 34,体重（克）150 15 250 1.5kg 715kg 1kg,寿命（年）23 23 68 49 1520 1012,动物数量,：,动物6组，1-5组为实验组，6组为蒸馏水对照组,性别,：,雌雄各半,年龄,：成年动物,生理与健康状况：,未产未孕者、健康动物,实验动物的预检,实验动物的给药前禁食处理,。,3、实验动物的一般要求,健康动物标志,发育正常、体态丰满、外观无畸形；,被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱；,胸阔宽阔、脊柱不弓不弯；,眼睛明亮；,表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）；,各天然孔干净、无分泌物；,行动灵活、反应敏捷,。,实验,动物的标记,染色法,编号方法：小鼠头部为1号，顺时针编号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位数,。,染色法,优点：,简单方便，不痛苦，无损伤。,缺点：,时间较长时，染色剂易褪色；,标记容易模糊不清。,剂量选择及分组,剂量选择,广泛查阅文献资料，估计毒性中值,预试，求出待测化学物,0%100%,或,10%90%,的大致致死剂量范围,设计正式试验的剂量和分组,预实验：,总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b）和全部不致死的最大剂量（a），即求出待测化学物0%100%的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计57个剂量组，组间剂量呈等比级数（r），其比值为1.21.5。进行正式实验。,通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。,按下式设计剂量组：,式中：r相邻两组剂量的比值，一般为1.21.5，,b最低全致死剂量量，,a最高不致死剂量，,n设计的组数。,分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；组数过少，不能较精确求出,LD,50,。,根据公比(r)计算各组剂量,各组剂量分别为,第一组：a,第二组：a r,第三组：a r2,第四组：a r3,第五组：a r4,第六组：a r5,随机化分组,将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得余数即为所属组别。,以,20,只动物的完全随机分配为例,动物编号,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,随即数字,54,83,80,53,90,75,53,78,93,47,72,09,54,66,95,44,68,67,67,86,除4后余数,2,3,0,1,2,3,1,2,1,3,0,1,2,2,3,0,0,3,3,2,所属组别,二,三,四,一,二,三,一,二,一,三,四,一,二,二,三,四,四,三,三,二,完全随机分配后各组所属动物号,组别,动物编号,一,4,7,9,12,二,1,5,8,13,20,14,三,2,6,10,15,18,19,四,3,11,16,17,20只动物完全随机分配的结果,组别,动物编号,一,4,7,9,12,19,二,1,5,8,13,14,三,2,6,10,15,18,四,3,11,16,17,20,受试物的配制方法,（1）受试化学物的量取,：,固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。,称量法,：,取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定容，计算浓度mg/ml，备用。,吸量法,：,依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容量瓶中，用溶剂加至刻度。,吸量法,，,计算公式为：X,式中：,X应吸取受试物的容积；,A设计要求的受试物浓度（mg/ml）；,V容量瓶容积（ml）；,d受试化学物比重；,A V,d1000,受试物的配制方法,（2）受试化学物的稀释,等浓度稀释法：,等容量稀释法：,等浓度稀释法,将受试物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的体积越大；剂量越低，所用的体积越小。比如某受试物的试验剂量分别为100、200、400和800mg/kg，受试物配制成10 mg/ml，每组动物每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8 ml。,等容量稀释法,将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓度越高。上例中，若实验动物按0.2ml/10g b.w容量灌胃,则应配制成4个不同浓度,即5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。,染毒途径的选择,经消化道染毒：经口灌胃法,采用专用小鼠灌胃针。,左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂直体位，腹部面向操作。,右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。,如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食，甚至误入气管，导致动物 立即死亡。,观察指标,中毒症状：确定靶器官,行动：不安定、多动、发声；,神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失调、姿态异常；,自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。,死亡和死亡时间,病理学检查及其他指标,LD,50,的计算（改良寇氏法）,当急性毒性试验的最大剂量死亡率为100%，最小剂量的死亡率为0%；各组动物数相等；各剂量组的组距等比或剂量对数等差时，用下述基本公式计算LD50,：,当不含,0%,和,100%,死亡率时，用下式计算,LD,50：,X,m,最大剂量对数,P各剂量组死亡率,P,m,最高死亡率,q各组剂量存活率，,q=1-p,以上各式中：i组距，即相邻两组剂量对数剂量之差,Pn最低死亡率,p各剂量组死亡率之和,n各组动物数,LD,50,的局限性,消耗动物量大,获得的信息有限,动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、血液学和其它化验检查所提供的毒性信息,有许多因素影响LD,50,值的测定，实际上测得的LD,50,是近似值,急性毒性试验不等于LD,50,测定,可用少量动物测定ALD，并进行临床观察、化验检查和病理学检查,当口服剂量大于,5g/kg,或注射剂量大于,2g/kg,时，不产生急性毒性或死亡，则不必准确的测定LD,50,注意,急性毒性评价,外源化学物相对毒性分级标准,急性毒性分级（WHO）,谢 谢 ！,