抗生素类药物分析汇编课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗生素药物的分析,一 概述,抗生素定义,某些微生物的代谢产物或合成的类似物,-,在小剂量的情况下能抑制微生物的生长和存活,-,对宿主不会产生严重的毒性,应用,抑制病原菌的生长,-,用于治疗细菌感染性疾病,具有抗肿瘤活性,-,用于肿瘤的化学治疗,免疫抑制和刺激植物生长作用,抗生素不仅用于医疗，而且还应用于农业、畜牧和食品工业方面,抗生素药物的分析一 概述,细菌感染疾病治疗中常用的抗生素,:,-,内酰胺抗生素（青霉素、头孢霉素）,四环素类（四环素、土霉素、金霉素）及氯霉素类抗生素（氯霉素、甲砜霉素）,大环内酯类抗生素等（红霉素、阿奇霉素）,氨基糖甙类抗生素（链霉素、庆大霉素）,细菌感染疾病治疗中常用的抗生素:,-,内酰胺抗生素,-Lactam Antibiotics,结构,-,内酰胺环：四原子内酰胺环的抗生素,-内酰胺抗生素,-,内酰胺抗生素的分类,青霉素（西林）类（,Penicillins,）,头孢菌素类（,Cephalosporins,）,-内酰胺抗生素的分类,结构特征,位酰氨基并合杂环,内酰胺环,2,位羧基,back,结构特征位酰氨基并合杂环 back,青霉素,Benzylpenicillin,（苄青霉素，青霉素,G,（,Penicillin G,），盘尼西林）,结构和化学名,（,2S,R,6R,）,-3,3-,二甲基,-6-,（,2-,苯 乙酰氨基）,-7-,氧代,-4-,硫杂,-1-,氮杂双环,3.2.0,庚烷,-2-,甲酸,（2S,R,6R）-3,3-二甲基-6-（2-苯 乙酰氨基）,青霉素,G,注射用青霉素是青霉素,G,（,benzylpenicillin,）的钠盐，不能口服，因为胃中强酸会导致酰胺侧链水解和,-,内酰胺环开环而失去活性。,青霉素,G,钠外观：白色结晶性粉末；无臭或微有特异性臭；有吸湿性；遇酸碱或氧化剂等即迅速失效。,溶解性：在水中极易溶解，在乙醇中溶解，在脂肪油或液体石蜡中不溶。,青霉素G,药物的性质,酸性：有机酸（,pKa2.65,2.70,）,旋光性：青霉素家族分子都有三个,手性碳原子,，头孢家族有两个,紫外吸收特性：头孢家族有共轭的母环，青霉素家族一般有苯环取代基,-,内酰胺环不稳定：四元内酰胺环，张力比较大,药物的性质,鉴别试验,呈色反应：,与羟胺作用生成羟肟酸，与铁离子呈色。,类似于肽键反应，双缩脲反应和茚三酮反应,钾钠离子的焰色反应,普鲁卡因青霉素有芳伯氨基，可以发生重氮化,-,偶合反应，生成红色染料沉淀。,光谱法：包括红外吸收光谱（,IR),和紫外吸收光谱,(UV),色谱法,:,与对照品的高效液相色谱（,HPLC),和薄层色谱,(TLC),的保留时间和比移值一致,鉴别试验呈色反应：,特殊杂质的检查,内源性过敏原：可能来自于生产、贮存和使用过程中,-,内酰胺环开环自身聚合，生成的,高分子聚合物,（青霉素过敏的原因）。,外源性过敏原：主要来自,-,内酰胺抗生素在生物合成时带入的残留量的蛋白质多肽类杂质。,有关物质和异构物：使用液相色谱，以样品加流动相稀释后作对照品检查。,特殊杂质的检查内源性过敏原：可能来自于生产、贮存和使用过程中,含量测定,碘量法：采用剩余碘量法测定，以标准对照法计算含量。,电位配位滴定法：青霉素碱水解产物可以与二价金属离子形成配合物，故采用碱水解后用硝酸汞进行滴定。,紫外可见分光光度法：青霉烯酸在,320nm360nm,有强吸收，外标法测吸光度。,高效液相色谱法：发展最快的分析方法，使用反相的,HPLC,法，以外标法作标准曲线计算含量。,含量测定碘量法：采用剩余碘量法测定，以标准对照法计算含量。,氯霉素,Chloramphenicol,【,外观,】,氯霉素为白色或者微带黄绿色的针状，长片状结晶或结晶性粉末，味苦，熔点,149 152,比旋度,+18.5+21.5,，性质稳定，能耐热，水溶液在中性、弱酸性条件下比较稳定，强碱强酸下水解。,D-,苏型,-,（,-,）,-N-,-,-,羟基,-,对硝基苯乙基,-2,2-,二氯乙酰胺,氯霉素Chloramphenicol【外观】氯霉素为白色或者,抗生素类药物分析汇编课件,氯霉素,Chloramphenicol,【,鉴别,】,显色反应,吸取供试品溶液、对照品溶液、空白溶液各,1ml,，加,1%,氯化钙溶液,3ml,与锌粉,50mg,，置水浴上加热,10min,，倾取上清液，加苯甲酰氯约,0.1ml,，立即强力振摇,1min,，加三氯化铁试液,0.5ml,与氯仿,2ml,振摇。供试品溶液和对照品溶液水层均显紫红色，空白溶液水层未显紫红色。,氯霉素Chloramphenicol【鉴别】显色反应 吸取供,氯霉素的杂质检查,相关物质,（,氯霉素二醇物，对硝基苯乙酮）的检查,残留溶剂（甲醛、乙醇）的检查,氯霉素的杂质检查相关物质（氯霉素二醇物，对硝基苯乙酮）的检查,氯霉素,Chloramphenicol,【,检查,】,有关物质（,氯霉素二醇物，对硝基苯乙酮）用流动相定量稀释，作为供试品溶液；另取氯霉素二醇物对照品与对硝基苯乙酮对照品适量，用流动相溶解稀释成每,1ml,中含氯霉素二醇物,5g,与对硝基苯乙酮,5g,的混合溶液，作为杂质对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，含氯霉素二醇物不得过,1.0%,，含对硝基苯乙酮不得过,0.5%,。,氯霉素Chloramphenicol【检查】有关物质（氯,氯霉素,Chloramphenicol,【,检查,】,残留溶剂,（甲醛、乙醇）,高效液相色谱：加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；另精密取甲醛、乙醇，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照残留溶剂测定法测定，使用紫外检测器，按,外标法,计算，含甲醛、乙醇应符合规定。,毛细管色谱：柱温,40-100,，常以氮气为载气，采用火焰离子化检测器。,氯霉素Chloramphenicol【检查】残留溶剂,氯霉素,Chloramphenicol,【,含量测定,】,高效液相色谱法测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；,以水,-,甲醇（,68,：,32,）为流动相；,检测波长为,277nm,；,用流动相定量溶解稀释制成每,1ml,中约含,0.1mg,的溶液，精密量取,10l,注入液相色谱仪，纪录色谱图；另精密称取纯氯霉素对照品适量，同法测定。按,外标法,以峰面积计算供试品中,C,11,H,12,Cl,2,N,2,O,5,的含量。,还可以采用毛细管电泳和质谱联用,(CE-MS),：氯霉素有两个氯原子，在质谱上具有较强的负离子响应。,氯霉素Chloramphenicol【含量测定】高效液,四环类抗生素,【,定义,】,由放线菌产生的一类广谱抗生素包括金霉素、土霉素、四环素等,盐酸四环素,Tetracycline Hydrochlorid,【,性状,】,本品为黄色结晶性粉末；无臭，味苦；略有引湿性；遇光色渐变深，在酸性条件下不稳定，碱性溶液中易破坏失效，可以与金属离子形成不溶的螯合物。,四环类抗生素【定义】由放线菌产生的一类广谱抗生素包括金霉素、,盐酸四环素,Tetracycline Hydrochlorid,抗菌谱,:,四环素为广谱抗生素，用于,G+,和,G-,引起的感染,抗菌机理：作用于,30S,亚基，抑制蛋白质的合成,不良反应：消化道刺激，牙齿骨骼钙黄沉积,结构特点：含有并四苯的基本结构,盐酸四环素Tetracycline Hydrochlori,盐酸四环素,Tetracycline Hydrochlorid,【,鉴别,】,用薄层层析快速鉴别四环类抗生素,pH,为,8.3,的,5%,的,EDTA-2Na,溶液调制硅藻土,G,板为薄层固定相，以,0.02mol/L,的氢氧化钠的丙酮溶液为展开剂，将样品和对照品一起展开，通过计算比移值鉴别。,与钙镁离子形成沉淀；,与铁离子形成红色络合物；,与铝离子形成黄色络合物。,盐酸四环素Tetracycline Hydrochlori,盐酸四环素,Tetracycline Hydrochlorid,【,检查,】,有关物质（,土霉素,0.5%,、,4-,差向四环素,3.0%,、盐酸金霉素,1.0%,、脱水四环素,0.5%,和差向脱水四环素,0.5%,）,液相色谱法,用,0.01mol/L,盐酸溶液溶解并定量稀释制成每,1ml,中约含,0.5mg,的溶液（临用现配）,作为供试品溶液；精密量取,2ml,，置,100ml,量瓶中，用,0.01mol/L,盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液,10l,注入液相色谱仪，按峰面积计算。,盐酸四环素Tetracycline Hydrochlori,四环素,无菌检查,经薄膜过滤法处理后，用,0.1%,无菌蛋白胨水溶液冲洗，并配制成每,1ml,中含供试品,30mg,的供试品溶液，以大肠埃希菌作为阳性对照菌，培养两周，菌落数目应符合规定。,四环素无菌检查 经薄膜过滤法处理后，用0.1%无菌蛋白胨水溶,盐酸四环素,Tetracycline Hydrochlorid,【,含量测定,】,高效液相色谱法,用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,用醋酸,-,乙腈（,83:17,）为流动相；,紫外光度检测器，检测波长为,280nm,。,取本品约,25mg,，精密称定，置,50ml,量瓶中，用,0.01mol/L,盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取,5ml,，置,25ml,量瓶中，加,0.01mol/L,盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取,10l,注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸四环素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中,C,22,H,24,N,2,O,8,HCl,的含量。,盐酸四环素Tetracycline Hydrochlori,大环内酯类抗生素,Macrolide Antibiotics,一 概述,简介,由链霉菌产生的弱碱性抗生素（红霉素、阿奇霉素）。,抗菌特点：对,G+,和某些,G-,、支原体作用强,结构特征,内酯结构的十四元或十六元大环,通过内酯环上的羟基和去氧氨基糖或,6-,去氧糖缩合成碱性甙,大环内酯类抗生素,抗生素类药物分析汇编课件,红霉素,Erythromycin,一、结构和性质,来源,红色链丝菌产生，包括,A,、,B,和,C,，三者的区别如下,红霉素Erythromycin,组分,通常 指,Erythromycin A,杂质 组分,B,和,C,-C,的活性较弱，只为,A,的,1/5,，而毒性则为,5,倍，,-B,活性低，毒性大,组分,性状,白色或类白色的结晶或粉末；无臭，味苦，微有引湿性 本品的水合物熔点为,128,，而无水物为,193,；易溶于甲醇、乙醇或丙酮，微溶于水；比旋度,-71,78,（,20mg/ml,无水乙,醇）,性状,结构特点,碱性甙,红霉内酯去氧氨基糖,红霉糖,红霉内酯环,14,原子大,环,无双键,偶数碳上有六个甲基,9,位羰基,结构特点,二、,【,鉴定,】,沉淀反应,取本品,10mg,，加硝酸,0.5ml,使溶解，加水,0.5ml,，火焰加热（灼烧）,2,分钟，放冷，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀。,二、【鉴定】沉淀反应,三、,【,杂质检查,】-,液相色谱,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；,以磷酸盐溶液,-,乙腈（,40,：,60,）为流动相；,波长为,215nm,。,按红霉素,C,、红霉素,A,、红霉素,B,的顺序出峰。,另取红霉素标准品适量，,130,加热破坏,4,小时，液相色谱,分析。,记录色谱图至红霉素,A,保留时间的,5,倍。按红霉素,C,、红霉素,A,、杂质,1,、红霉素,B,、红霉素烯醇醚峰的顺序出峰,。杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（,5.0%,）。,三、【杂质检查】-液相色谱,四、含量测定,液相色谱,分别加甲醇,溶解，用磷酸盐缓冲盐（,pH7.0,）,-,甲醇（,15,1,）定量稀释制成溶液，分别作为供试品溶液和标准品溶液；精密量取供试品溶液与标