链球菌肠球菌课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,链球菌肠球菌课件,*,实 验 五,链球菌及肠球菌的鉴定,链球菌肠球菌课件,1,实 验 五链球菌及肠球菌的鉴定链球菌肠球菌课件1,目的要求：,1.,掌握链球菌属及肠球菌属的分离培养与鉴定方法。,2.,掌握链球菌及链球菌的菌落特点、菌体形态及染色性。,链球菌肠球菌课件,2,目的要求：链球菌肠球菌课件2,步骤与方法,1,、观察菌落,将菌株接种于血琼脂平板上，,35,孵育,18-24h,后观察菌落，记录菌落大小、形态、表面、边缘、透明及颜色、有无溶血及特点。将肺炎链球菌继续孵育,2-3,天看菌落中心有无凹陷呈,“,脐状,”,。,链球菌肠球菌课件,3,步骤与方法1、观察菌落链球菌肠球菌课件3,链球菌的溶血性,链球菌肠球菌课件,4,链球菌的溶血性链球菌肠球菌课件4,溶血性链球菌,链球菌肠球菌课件,5,溶血性链球菌链球菌肠球菌课件5,2,、形态观察,涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态、排列及荚膜。,链球菌肠球菌课件,6,2、形态观察链球菌肠球菌课件6,肺炎链球菌,S.pneumoniae,形态与染色：,G,+,球菌,矛头状,成双排列，宽端相对,，尖端向外,有荚膜,链球菌肠球菌课件,7,肺炎链球菌 S.pneumoniae形态与染色：G+球菌,肺炎链球菌革兰染色有荚膜,链球菌肠球菌课件,8,肺炎链球菌革兰染色有荚膜链球菌肠球菌课件8,肺炎链球菌荚膜染色特点,链球菌肠球菌课件,9,肺炎链球菌荚膜染色特点链球菌肠球菌课件9,肺炎链球菌,S.pneumoniae,培养特性：,营养要求高，兼性厌氧。初次分离需提供,5%-10%,的,CO,2,。,18-24h,后血平板上形成灰白色、圆形、针尖样的菌落。菌落周围有草绿色溶血环。,链球菌肠球菌课件,10,肺炎链球菌 S.pneumoniae 培养特性：营养,肺炎链球菌,S.pneumoniae,培养特性：,培养,48h,后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像,“,肚脐,”,称脐状凹陷。,链球菌肠球菌课件,11,肺炎链球菌 S.pneumoniae培养特性：培养48h,肺炎链球菌,S.pneumoniae,主要生化反应,optochin,试验,:,含,5,g,optochin,纸片贴于 涂布有待测菌的平板上,35,孵育过夜，抑菌圈大于,14mm,即为敏感。,甲型溶血链球菌,(R),肺炎链球菌,(S),链球菌肠球菌课件,12,肺炎链球菌 S.pneumoniae主要生化反应甲型溶,胆汁溶菌试验,原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解而自溶。,方法：,A,、平板法：在血琼脂平板上选择出待检的草绿色溶血的菌落，观察记录菌落特点，然后于菌落上加一滴去氧胆酸钠溶液，,35,孵育,15-30min,观察结果。,链球菌肠球菌课件,13,胆汁溶菌试验链球菌肠球菌课件13,B,、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液,1ml,分别加入,2,支试管，再于各管中加入去氧胆酸钠溶液,0.1ml,，摇匀后置于,37,水浴,30min,后观察结果。,结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。,链球菌肠球菌课件,14,B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液1ml分别,痰标本肺炎链球菌革兰染色,链球菌肠球菌课件,15,痰标本肺炎链球菌革兰染色链球菌肠球菌课件15,A,群,(,化脓性,),链球菌,生物学性状,球形或椭圆形,，链状排列，革兰染色阳性,(,G,),，,无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。,1.,形态与染色,链球菌肠球菌课件,16,A群(化脓性)链球菌 生物学性状 球形或椭圆形，链状,化脓性链球菌,链球菌肠球菌课件,17,化脓性链球菌链球菌肠球菌课件17,A,群,(,化脓性,),链球菌,生物学性状,营养要求高,：血平板或含血清培养基；,液体培养为沉淀生长,；,血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同,菌株溶血不一,，,多数有透明溶血环,(,b,溶血现象,),。,2,.培养特性,链球菌肠球菌课件,18,A群(化脓性)链球菌 生物学性状 营养要求高：血平板或含血清,杆菌肽敏感试验,原理：,A,群化脓性链球菌对杆菌肽几乎,100%,敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。,方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平板上，将杆菌肽纸片（,0.04U/,片）贴于平板上，,35,孵育,18-24h,观察。,结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为,A,群化脓性链球菌。,链球菌肠球菌课件,19,杆菌肽敏感试验链球菌肠球菌课件19,B,化脓性链球菌杆菌肽阳性,链球菌肠球菌课件,20,B化脓性链球菌杆菌肽阳性链球菌肠球菌课件20,B,群无乳链球菌,链球菌肠球菌课件,21,B群无乳链球菌链球菌肠球菌课件21,CAMP,试验,原理：,B,群溶血性链球菌能产生,CAMP,因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌,溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。,方法：在羊血琼脂平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条横线，在将被检菌距金葡菌接种线,3mm,处直角接种一短线，,35,培养,18-24h,观察结果。同时设阳性对照和阴性对照。,链球菌肠球菌课件,22,CAMP试验链球菌肠球菌课件22,结果报告：,在两种细菌划线的交接处出现箭头型透明溶血区为阳性，否则为阴性，此试验为,B,群链球菌与其他链球菌鉴别的重要试验，无乳链球菌为阳性，其他为阴性。,链球菌肠球菌课件,23,结果报告：链球菌肠球菌课件23,无乳链球菌,CAMP,试验阳性,链球菌肠球菌课件,24,无乳链球菌CAMP试验阳性链球菌肠球菌课件24,CAMP,阳性,链球菌肠球菌课件,25,CAMP阳性链球菌肠球菌课件25,马尿酸水解试验,原理：,B,群链球菌有马尿酸水解酶，可水解马尿酸为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可与,FeCl,3,，,结合形成苯甲酸铁沉淀。,方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠培养基，,35,培养,48h,，,3000r/min,离心,30min,吸取上清液,0.8ml,于另一试管，加入,FeCl,3,0.2ml,，立即混匀，,10-15min,观察结果。,结果：出现恒定沉淀物为阳性。,链球菌肠球菌课件,26,马尿酸水解试验链球菌肠球菌课件26,3,、生化反应,1,）触酶试验：,链球菌属为阴性。,链球菌肠球菌课件,27,3、生化反应链球菌肠球菌课件27,（,6,）血清学试验（链球菌快速分群乳胶凝集试验）,原理：,Lancefield,根据链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将链球菌分为,20,多个群，对人类治病的多数为,A,群，偶见,B,、,C,、,D,、,F,、,G,群。用这,6,群抗原的兔免疫血清分别致敏的乳胶颗粒，与具有相应群特异性抗原的链球菌发生间接乳胶凝集反应，可在,10min,内对链球菌作出主要的分群鉴定。,链球菌肠球菌课件,28,（6）血清学试验（链球菌快速分群乳胶凝集试验）链球菌肠球菌课,方法：,挑取菌落,2-3,个转种于含有提取酶的试管中，使其成为乳化均匀的菌悬液，置,37,水浴,15min,。在卡片的相应区域滴加一滴,A,、,B,、,C,、,D,、,F,、,G,致敏胶乳，再加入处理后的菌悬液一滴分别与胶乳混匀，同时在卡片相应区域加一滴控制液与任意一滴致敏乳胶混匀，作为阳性对照，轻摇卡片，观察结果。,链球菌肠球菌课件,29,方法：挑取菌落2-3个转种于含有提取酶的试管中，使其成为,结果判断：在,2-10min,内发生胶乳凝集，为阳性。待检菌与哪群致敏胶乳凝集就表明该菌为相应血清群的链球菌。,链球菌肠球菌课件,30,结果判断：在2-10min内发生胶乳凝集，为阳性。待检菌与哪,Lancefield,血清凝集分型,链球菌肠球菌课件,31,Lancefield血清凝集分型链球菌肠球菌课件31,链球菌肠球菌课件,32,链球菌肠球菌课件32,（,7,）胶乳凝集试验：,原理：抗链球菌溶血素,“,O,”,（,ASO,）高滴度的病人血清被适量的溶血素,“,O,”,中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗,“,O,”,抗体与,ASO,胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。,链球菌肠球菌课件,33,（7）胶乳凝集试验：链球菌肠球菌课件33,方法：先将病人血清,5630min,灭活，然后用生理盐水做,1,：,15,稀释。在反应板个空内分别滴加稀释血清、阳性和阴性对照血清,1,滴（,50ul,），再于各孔内滴加,1,滴溶血素,“,O,”,溶液，轻摇,1min,混匀，最后在各孔内分别滴加,1,滴,ASO,胶乳试剂，轻摇,3min,后观察结果。,链球菌肠球菌课件,34,方法：先将病人血清5630min灭活，,结果判断：出现凝集为阳性、不凝集为阴性。,ASO,阳性可认为患者近期受溶血性链球菌感染过，可辅助诊断风湿热、肾小球肾炎等疾病。,链球菌肠球菌课件,35,结果判断：出现凝集为阳性、不凝集为阴性。ASO阳,链球菌肠球菌课件,36,链球菌肠球菌课件36,肠球菌属,步骤和方法,1,、菌落观察,:,将菌株接种于血琼脂平板上，,35,孵育,18-24h,后观察菌落，肠球菌在血琼脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周围可出现,溶血环，也可无溶血环。,链球菌肠球菌课件,37,肠球菌属步骤和方法链球菌肠球菌课件37,2,、形态观察,涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态及排列。,肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。,链球菌肠球菌课件,38,2、形态观察链球菌肠球菌课件38,3,、生化反应：,（,1,）触酶试验：肠球菌属为阴性反应。,（,2,）胆汁,-,七叶苷试验：,原理：培养基的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠球菌能在胆汁中生长，并水解七叶苷，使培养基变黑。,链球菌肠球菌课件,39,3、生化反应：链球菌肠球菌课件39,方法：将被检菌,13,个菌落接种于胆汁,-,七叶苷琼脂培养基，,35,孵育,1824h,。,结果：细菌生长，且培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。肠球菌为阳性。,链球菌肠球菌课件,40,方法：将被检菌13个菌落接种于胆汁-,（,3,）,65g/L NaCl,生长试验：,原理：肠球菌有很强的耐盐能力，能在,65g/L NaCl,血清肉汤培养基中生长，而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基中不能生长。,方法：将待检菌接种,65g/L NaCl,血清肉汤中，,35,孵育,18-24h,。,结果：细菌生长且使得培养基变黄为阳性，不生长为阴性，肠球菌为阳性。,链球菌肠球菌课件,41,（3）65g/L NaCl生长试验：链球菌肠球菌课件41,（,3,）,PYR,试验：,原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮,-,-,萘基酰胺（,PYR,），释放出,-,萘基酰胺，与,PYR,试剂作用形成红色复合物。,方法：挑取被检菌落在含有,PYR,的纸片上涂擦，,35,孵育,5min,，再于纸片上滴加,PYR,试剂，观察纸片颜色。,结果：约,1min,后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。肠球菌、,A,群链球菌和某些凝固酶阴性的葡萄球菌为阳性。,链球菌肠球菌课件,42,（3）PYR试验：链球菌肠球菌课件42,链球菌肠球菌课件,43,链球菌肠球菌课件43,