ELISA及相关免疫分析技术-课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,ppt课件,*,ELISA,及相关免疫分析技术,江苏省临床检验中心 许斌,1,ppt课件,ELISA及相关免疫分析技术江苏省临床检验中心 许斌1p,概述,ELISA,是一种敏感性高,、,特异性强,、,重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定,、,易保存,、,操作简便,、,结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做半定量分析等优点，已广泛应用于微生物学,、,寄生虫学,、,肿瘤学和细胞因子等领域。,ELISA,的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。,2,ppt课件,概述 ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实,ELISA,1971,年,Engvall,等人把免疫组化的,EIA,技术应用于临床检验发展为,ELISA,（,E,nzyme,L,inked,I,mmuno,S,orbent,A,ssay,）,技术，酶联免疫吸附剂试验。,特点,：,在聚苯乙烯固相载体表面组装免疫活性物质形成“免疫吸附剂”,酶标记免疫活性物质，化学显色剂进行信号放大； 有二步温育反应二次洗涤过程；,灵敏度、特异性相对较高。,3,ppt课件,ELISA1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术,ELISA,原理,双抗体（原）夹心法,检测抗原（体）的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原（,适用于二价以上抗原,不能测小分子半抗原,）。,4,ppt课件,ELISA原理双抗体（原）夹心法 检测抗原（体）的常见方法,间接法,检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体（一般为抗人,IgG,）检测已与固相抗原结合的抗体，因有干扰须稀释标本。,固相,包被抗原,待测抗体,酶标记第二抗体,底物,5,ppt课件,间接法 检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体（一般为抗人Ig,竞争法,检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。,固相,包被抗原,待测抗体,酶标记特异抗体,底物,6,ppt课件,竞争法 检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测,ELISA,原理,竞争中和法,以测抗体为例，包被抗体、待测抗体竞争结合加入的恒定量的中和抗原，酶标记抗抗体（抗人,IgG,），待测抗体量越多包被抗体结合越少，显色越浅。,捕获法,一般用于检测,IgM,抗体，包被抗人,链,，捕获血清中的所有,IgM,抗体，加入定量特异抗原与捕获的特异抗体结合，酶标记特异抗体（或抗抗体）显色。,7,ppt课件,ELISA原理竞争中和法 以测抗体为例，包被抗体、待测抗,ELISA,捕获法原理图,固相,包被抗,链抗体,捕获的,IgM,抗体,酶标记抗原,底物,8,ppt课件,ELISA捕获法原理图固相包被抗捕获的IgM抗体酶标记抗原底,试剂盒选择,卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。,灵敏度,：,有二层含义，,1,）为试剂检出被检物质的最低量的能力；,2,）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。,特异性：,指试剂正确检定不存在的被检物质的能力（无假阳性），取决于包被抗原（体）及标记抗原（体）的纯度及特异性。,精密度：,ELISA,试剂一般指其批内,CV,，其值应小于,15%,；定量试剂应同时考察线性范围,9,ppt课件,试剂盒选择卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂,CLSI I/LA23-AAssessing the quality of immunoassay systems:radiooimmunoassays and enzyme,fluorescence,and luminescence immunoassays;approved guideline,11.2:The lower immunochemical detection limit for an assay represents the lowest level of an ananlyte that can be reproducibly detected.,the laboratory or test sensitivity,is identical to the detection limit;use cut off value,Clinical(diagnostic) sensitivity:the proportion of patients with a well-defined clinical disorder whose test values are positive or exceed a defined decision limit(i.e.,a positive result and identification of the patients who have a disease);use positive predictive value,false-negative results,et.al.,10,ppt课件,CLSI I/LA23-AAssessing the q,11,ppt课件,11ppt课件,12,ppt课件,13,ppt课件,13ppt课件,14,ppt课件,14ppt课件,15,ppt课件,15ppt课件,HBV,基因型和血清学亚型,以,HBsAg,的抗原决定族分血清学亚型,共同决定族,a,，相互排斥的二对决定族,d/y,，,w/r,；,w,又分,1-4,；,r,又分,q+,和,q-,。,共有,9,种亚型：,ayw1,，,ayw2,，,ayw3,，,ayw4,，,ayr,，,adw2,，,adw4,，,adrq+,，,adrq-,只表明包膜蛋白氨基酸差异，,有流行病学意义,16,ppt课件,HBV基因型和血清学亚型以HBsAg的抗原决定族分血清学亚型,17,ppt课件,17ppt课件,18,ppt课件,18ppt课件,保存参考品的国际机构或组织,英国国立生物学标准及控制品研究院（,NIBSC,）：,免疫血清学,IU/ML,德国鲍尔,-,艾立希研究院（,PEI,）：,病毒学、免疫血清学等，传染病标志物最全。,PEI/ML,法国国家中心实验室（,LNS,）、法国输血协会（,SFTS,）：病毒性肝炎、艾滋等血清盘。,NG/ML,荷兰输血中心实验室（,CLB,）：,血型、病毒学、自身抗体等。,丹麦国家血清研究院（,SSI,）：,病毒学、寄生虫、免疫蛋白等。,美国,BBI,：,HBV,、,HCV,、,HIV-1,、,HIV-2,、,HTLV-1,等,Panel,。,19,ppt课件,保存参考品的国际机构或组织英国国立生物学标准及控制品研究院（,稳定性,：,试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于,37,保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为,37,每稳定一天相当于,4,10,保存一个半月。,简便性,：,指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性试验中结果判断简单明了，）定量试验结果计算也应简单。,安全性,：,指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。,经济性,：,试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。,20,ppt课件,稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将,试剂盒选择,试剂评价需要有权威的血清考核盘（,Panel,）进行检测，一般实验室不易从生检所或临检中心取得，每进一次试剂评价一次也很麻烦。可以通过间接的信息对试剂进行选择。,根据该试剂生检所批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；,通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；,参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果，这比较客观公正，因为统计数字均来自各参评医院，反映了试剂在某一地区的使用情况；,根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。,21,ppt课件,试剂盒选择试剂评价需要有权威的血清考核盘（Panel）进行检,标本的采集和保存,可用作,ELISA,的标本十分广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可作为标本以测定其中的抗原或抗体成分，一般使用血清。,标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，可造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。,抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。,标本在冰箱中保存时间过长易导致血清,IgG,聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置,4,冰箱,5,天内完成测试。如需保存一周以上则要,-20,冰冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。,ELISA,的灵敏度,1ng/ml,水平上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本,.,最起码应先做免疫后做生化,.,22,ppt课件,标本的采集和保存可用作ELISA的标本十分广泛，体液（如血清,标本,使用真空采血管,分离胶,不抗凝,23,ppt课件,标本使用真空采血管23ppt课件,内外干扰物质的影响分析,溶血 脂浊,RF,自身抗体,AFP,补体 肝素,EDTA,A 0.165 0.200 0.250 0.264 0.186 0.146 0.183 0.126,S 0.023 0.016 0.007 0.029 0. 010 0. 007 0.019 0.013,A,对照,0.151 0.195 0.195 0.195 0 .116 0.116 0.116 0.116,S 0.038 0.008 0. 008 0.008 0.018 0.018 0.018 0.018,P 0.05 0.05 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01,24,ppt课件,内外干扰物质的影响分析 溶血 脂浊,操作中注意事项,ELISA,实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括,加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数,均应认真负责才能充分发挥,ELISA,的高灵敏，强特异的优点。,因此,应建立实验项目的标准操作程序,(SOP),。,25,ppt课件,操作中注意事项ELISA实验的结果受操作影响很大，每个步骤包,仪器质控,为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（,SOP,），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。,移液器：,ELISA,加样量小（,5-100,l,），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在,10%,以内；,水浴箱,经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有,1,的误差；,洗板机,每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过,2ul,，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；,酶标仪,经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正滤光片波长和线性范围，使其保持良好的工作性能。,26,ppt课件,仪器质控为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操,加样器合格标准,水合格标准,27,ppt课件,加样器合格标准水合格标准27ppt课件,酶标仪校正程序,滤光片波长精度检查,：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用,UV-2201,型紫外,-,可见分光光度计（波长精度,0.3nm,）于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。,通道差与孔间差检测,：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将其（内含,200ul,甲基橙溶液吸光度调至,0.500A,左右）置于,8,个通道的相应位置，蒸溜水调零，,1,于,490nm,处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标,2,板条（,8,条共,96,孔）分别加入,200ul,甲基橙溶液（吸光度调至,0.100A,左右）先后置于同一通道，蒸溜水调零,于,490nm,处检测，其误差大小用,1.96s,衡量。,零点飘移（稳定性观察）,：取,8,只小孔杯分别置于,8,个通道的相应位置，均加入,200ul,蒸溜水并调零，于,490nm,处每隔,30,分钟测一次，观察各个通道,4,小时内吸光度的变化。,28,ppt课件,酶标仪校正程序滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶,酶标仪校正程序,精密度评价,：每个通道,3,只小杯分别加入,200ul,高中低,3,种不同浓度的甲基橙溶解，蒸溜水调零，于,490nm,作双份平行测定，每日测二次（上下午各一次），连续测定,20,天。分别计算其批内精密度，日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的,CV,值。,线性测定,：用电子天平精确称取甲基橙配制,5,个系列的溶液，于,490nm,平行测,8,次，取其均值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差,s,，并用,1.96s,表示样品测量的误差范围,.,双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入,3,种不同浓度的溶血液（测定波长为,490nm,，校正波长为,585nm,），先后于,8,个通道检测，每个通道测,3,次，,51,比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。,一般酶标仪无,585nm,滤光片，可选用,550nm,或,630nm,滤光片。,450nm,滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为,630nm,）,29,ppt课件,酶标仪校正程序精密度评价：每个通道3只小杯分别加入200ul,全自动酶标仪,定期校准（年检，维修后）,主要参数：加样精度（针间误差），,携带污染率（加样和管道），,洗板效果，,光学系统。,30,ppt课件,全自动酶标仪定期校准（年检，维修后）30ppt课件,31,ppt课件,31ppt课件,32,ppt课件,32ppt课件,加样,加样应用微量移液器（加样枪,),按规定的量加入微孔板的,1/3,处避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。,每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染,;,干吸头预先在血清中抽吸三次。,样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡,30,秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。,如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。,33,ppt课件,加样 加样应用微量移液器（加样枪)按规定的量加入微孔板的1/,温育,抗原抗体反应需要在一定温度下（,37,C,），经过一定的时间才能达到反应的平衡点,ELISA,边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴法。一种放在水浴箱的隔板上，另一种是放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的,1/3,处，不可将板条叠加放置。,边缘效应（,2ng/mlHBsAg,一步法三种不同温育法的结果）,水浴法,孵箱法,微波法,A,中央（,S,）,0.307,（,0.023,）,0.282,（,0.028,）,0.151,（,0.059,）,A,周围（,S,）,0.290,（,0.038,）,0.357,（,0.047,）,0.097,（,0.038,）,P 0.05 0.01 2.1,换算而来，常用于夹心法。,B,）,C.O=0.5N,，从抑止率公式换算而来，,常用于竟争，中和法,C,）,C.O=N+C,（,C,为常数），用于间接法。,D) C.O=CP+N,（,C,为常数），用于间接法。此公式最客观，但对生产厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。,38,ppt课件,报告方式定性试验 国内外为便于统一计算，一律按S/C.O方式,报告方式,定量分析 用已知量的标准品作一系列稀释，,ELISA,测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。,ELISA,的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。,现有的,ELISA,定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。,因此严禁用定性试剂盒做定量分析。,39,ppt课件,报告方式定量分析 用已知量的标准品作一系列稀释，ELISA,灰区概念,把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将,CO,值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告,+,（阳性）。,灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。,灰区的设置有二种：,1,）,C.O,（,1CV,），,CV,为该试剂的批内,CV (,一般在,15-20%,间）；,2,）,C.O2s,，,s,为实验室做室内质控,ROC,的,s,。,40,ppt课件,灰区概念 把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念,41,ppt课件,41ppt课件,确认试验,抗原检测,中和试验,抗体检测,RIBA,（,Recombinant Immunoblot Assay,）：将病毒的各种抗原单独包被在纤维素膜、尼龙膜等载体上，检测不同抗原的反应性。,或,Western Blot,：用十二烷基硫酸钠,SDS,处理的待检血清经,SDS-,聚丙烯酰胺凝胶,PAGE,电泳，使抗原与抗体分离，将抗原转移到硝酸纤维膜上，加入抗体，再用与酶或同位素标记的二抗反应，显色或放射自显影判定结果。,42,ppt课件,确认试验抗原检测中和试验42ppt课件,质量审核,型式检查（编号唯一性、项目完整性、书写完整性）,仪器检查（状态、校准）,试剂检查（效期）,质控检查（室内、室间）,异常值检查（及时与临床联系）,43,ppt课件,质量审核型式检查（编号唯一性、项目完整性、书写完整性）43p,44,ppt课件,44ppt课件,45,ppt课件,45ppt课件,HBsAg HBeAg HBcAb-IgG HBcAg-IgM HBeAb HBsAb,临床意义,+ +,急性,HBV,感染早期,HBV,复制活跃,+,+,+ +,急慢性,HBV,感染，,HBV,复制活跃,+,+ +,急慢性,HBV,感染，,HBV,复制中跃,+,+ + +,急慢性,HBV,感染，,HBV,复制低跃,异型慢性乙型肝炎,+,+,+,HBV,复制停止或极低,+ +,平静的,HBV,携带状态，,HbsAg,极低测不出，,HBsAg/,抗,HBs,空白期,+,HBV,既往感染，未产生抗,-HBs,+ + +,抗,HBs,出现前期，,HBV,复制低,+,+ + HBV,感染恢复期,+,+ HBV,感染恢复期,+,+,+,+,+,不同亚型再感染,+,整合,病后或接种疫苗后获得免疫,46,ppt课件,HBsAg HBeAg HBcAb-IgG HBcA,HBsAg,A.,急、慢性肝炎的诊断。,B.,献血员和各种血制品的筛选。,C.,急性肝炎最早期的预后指标。,D.,流行病学调查。,注意事项,：,一、,HBsAg,假阳性,血清分离不佳或肝素抗凝血；,二、,HBsAg,假阴性,感染早期易形成抗原抗体复合物，,这种情况需要检测抗,HBc-IgM,及,HBV DNA,；,多数商用试剂盒检测系统采用的为多克隆抗体检测,HBsAg,的,adr,、,ayw,型,，,S,区的点突变即可导致临界测定值或阴性结果；,由于慢性病毒携带者（低水平,HBsAg,携带者）或,HBV,感染潜伏期，,HBsAg,浓度低于检测水平的下限。,47,ppt课件,HBsAg47ppt课件,抗,-HBs,：,A.,预后,：抗,HBs,经常在肝炎症状出现后,4-6,个月出现，一般表示病毒清除，感染开始恢复。近年来的研究发现在抗,HBs,阳性患者体内有,5%HBV DNA,阳性，慢性肝炎中的一些抗,HBs,阳性者，肝细胞中可检出,HBsAg,、,HBeAg,、,HBV DNA,，因此尽管自然感染者抗,HBs,阳转后，大多数预后良好，但也不能过于乐观，应定期复查。,B.,流行病学调查。,C.,疫苗接种对象的筛选和效果观察,。接种疫苗后，抗,HBs,浓度超过,10 IU/L,，表明其具有保护性。加强免疫后,4-8,周，大于,100 IU/L,，即便以后有所降低，其免疫力能维持,10,年以上。,注意事项：,A,怀疑假阳性结果时要进行中和试验。,B,抗,HBs,经常在,HBsAg,消失几周至几月后方呈阳性（窗期），极少数在,HBsAg,消失后即为阳性，,同时可检出抗,HBs,及,HBsAg,见于以下几种情形,：,前后或同时感染两种亚型,HBV,，抗,HBs,及,HBsAg,同时检出通常要持续很久，且浓度均很高；,抗,HBs,假阳性；,编码,HBsAg,的基因变异使得,HBsAg,抗原性改变，原型抗,HBs,不能将其清除。,48,ppt课件,抗-HBs：48ppt课件,HBeAg,：,A.,评价血清传染性：慢性,HBsAg,携带者中，,HBeAg,及,HBV-DNA,检测可以用来评估其传染危险性，,90% HBeAg,阳性,HBsAg,携带者可以传染给她们的新生儿，而,HBeAg,阴性或抗,HBe,阳性的孕妇中只有,10%,会传染给婴儿。,B.,预后：急性期,HBeAg,的消失通常伴随,ALT,的降低，预示着疾病的好转；,HBeAg,持续阳性超过,12,周，提示,HBV,感染趋向慢性；,HBeAg,阳性的无症状者较少。,注意事项：,（,1,）假阴性：,前,C,区基因变异导致不能生成和分泌,HBeAg,，血清中,HBeAg,阴性，但这种突变并不影响乙肝病毒的复制，仍可形成完整的病毒颗粒，该种情况下尽管检测不到,HBeAg,，慢性,HBV,感染炎症反应也相当强。,HOOK,效应,（,2,）假阳性：,包被抗体不纯（含有抗,C,）,49,ppt课件,HBeAg：49ppt课件,电化学发光,HBeAg,检测的高线性,50,ppt课件,电化学发光HBeAg检测的高线性50ppt课件,抗,-HBe,：,A,、反映血清感染性：通常情况下,HBsAg,（,+,）、抗,HBe,（,+,）病例的传染性较低；,B,、监视急性和慢性,HBV,感染：血清,HBeAg,消失、抗,HBe,出现对监视急慢性,HBV,感染很有诊断价值，特别是抗,HBe,出现更有预见价值，在干扰素治疗中出现表明疾病状况的改善；,C,、预后：抗,HBe,阳转出现在,HBeAg,阴转后早期（,2,周内），可能预示急性肝炎恢复顺利；如出现在晚期（,HBeAg,阴转后,6,周以上）或不出现抗,HBe,，可能发展为慢性肝炎。,注意事项：,抗,HBe,不宜作流行病学调查，因为其阳性率远远低于抗,HBc,，且实际上抗,HBe,阳性者抗,HBc,往往也呈阳性。,HBeAg,和抗,HBe,测定一般适用于,HBsAg,阳性者，几乎所有急性感染者均出现,HBeAg,或抗,HBe,阳性，偶尔两者同时阳性，只有少数,HBsAg,携带者（通常其浓度较低），,HBeAg,和抗,HBe,均阴性。,51,ppt课件,抗-HBe：51ppt课件,乙肝抗原,/,抗体检测的血清转型,(S,eroconversion,),52,ppt课件,乙肝抗原/抗体检测的血清转型(Seroconversion),抗,-HBc,：,A,、诊断急慢性,HBV,感染：急性,HBV,感染时抗,HBc,的滴度平均为,1:500-1:1000,，健康携带者的滴度一般为,1:10,，慢性,HBV,感染者一般为,1:100,，,HBsAg(-),若抗,HBc,滴度很高提示为慢性,HBV,感染（隐匿性感染）。,B,、调查特定人群,HBV,感染的流行率或危险性；该指标在感染后可持续存在几年至几十年，因此很适合调查感染的流行率性。,C,、验证抗,HBs,及,HBsAg,阳性结果。,注意事项：,A,、 临界阳性一般是假阳性，是由于,IgM,型引起的交叉反应。,B,、,抗,HBc,阴性而,HBsAg,阳性一般发生在免疫缺陷病例，这时存在,HBV,复制的其他标志如,HBeAg,及高滴度的,HBV DNA,。,C,、,对抗,HBc,单独阳性，排除假阳性后，美国,CDC,有以下解释：,急性感染后的恢复早期（窗期）在,HBV,急性感染消退时，,HBsAg,减少甚至消失，抗,HBs,尚未出现，抗,HBc,是唯一能检出的特异性指标，此时抗,HBc IgM,也为阳性。,被动转移：,HBsAg,携带者母亲所生的婴儿可因母体抗体被动转移（抗,HBc,可通过胎盘）而呈现抗,HBc,单独阳性。,远期感染伴抗,HBs,消失，这种情况通常在感染后多年才会发生，且相当少见（,0.5%,）。,远期感染伴有低水平,HBsAg,。,HDV,重复感染继发,HBsAg,产生下降,53,ppt课件,抗-HBc：53ppt课件,