任务二水中大肠菌群数的测定精

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,项目九 综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,任务二水中大肠菌群数的测定精,水中总大肠菌群的测定,检验根据：,方法：多管发酵法,总大肠菌群,总大肠菌群,37、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢杆菌,粪大肠菌群耐热-,总大肠菌群,非粪大肠菌群,EC,肉汤,士,0.5,总大肠菌群,MPN most probable number,最可能数或最近似数,总大肠菌群MPN,100mL水样中所含的总大肠菌群的最近似数或最可能数,指示菌总大肠菌群,指示菌,应具有的条件,和肠道致病菌的来源一样,在外界环境中的生存时间长,检验方法比较简便,实验目的,掌握生活饮用水总大肠菌群的测定方法,掌握水源水总大肠菌群的测定方法,断定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量,实验内容,1,乳糖发酵试验,4,证实试验,5,结果分析与报告,1,培养基制备,2,乳糖发酵试验,3,别离培养,实验器材,水样,生活饮用水、水源水,培养基,乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基,试剂,革兰氏染色液、稀释剂等,实验器材,其他,无菌工作台、,酒精灯,、,稀释液,、,灭菌吸管,、,灭菌试管,、小倒管、,试管架,、,接种环,、恒温,培养箱,、,高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油、平皿、天平、电炉等,培养基制备,乳糖发酵管,双料管,单料管,伊红美兰平板,放置小倒管并排气,检验程序,生活饮用水接种,乳糖发酵试验,别离培养,证实试验,结果报告,水源水,稀释,与接种,一、乳糖发酵初发酵试验,自来水,直接接种,10mL,水样于双料培养基，每个水样共接种,5,管,水源水,加大稀释度，每个稀释度接种,5,管，每个水样共接种,15,管,各,10ml,1ml,各,1ml,水样,1:10,稀释水,各,1ml,乳糖发酵试验,一、乳糖发酵初发酵试验,培养,36,士,l,24h,士,2h,观察产酸产气情况,不产酸产气,产酸产气,第二天,二、别离培养,产酸产气的发酵管分别转种EMB平板分区划线,36士l,24h士2h,第三天,三、证实试验复发酵试验,观察,EMB,平板菌落形态,深紫黑色、具有金属光泽的菌落,紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落,淡紫红色、中心较深的菌落,一半进展涂片、染色、镜检,另一半进展接种,证实试验用,三、证实试验复发酵试验,只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌才接种乳糖蛋白胨管,36,士,l,24h,士,2h,第四天,四、结果报告,观察乳糖发酵管产气情况,产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在,查MPN 检索表,根据证实为总大肠菌群阳性的管数,报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数MPN,四、结果报告,5,管法结果见表,1,，,15,管法结果见表,2,四、结果报告,表1 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数MPN),5,个,10mL,管中阳性管数,最可能数（,MPN,）,0,16.0,四、结果报告,表2 总大肠菌群MPN检索表(局部,总接种量，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份水样,接种量,/mL,总大肠菌群,/(MPN/100mL),接种量,/mL,总大肠菌群,/(MPN/100mL),10ml,管,1ml,管,0.1ml,管,10ml,管,1ml,管,0.1ml,管,0,0,0,2,1,0,0,2,0,0,1,2,1,0,1,4,0,0,2,4,1,0,2,6,0,0,3,5,1,0,3,8,0,0,4,7,1,0,4,10,0,0,5,9,1,0,5,12,四、结果报告,稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数,表2采用3个稀释度10mL、1mL 和0.1mL),每个稀释度5管,表2内所列接种量如改用100mL、10mL和1mL时，表内数字应相应降低10倍；如改为1mL、和 时,那么表内数字应相应增加10倍。其余可类推。,四、结果报告,所有乳糖发酵管均阴性，可报告总大肠菌群未检出。,本卷须知,1.无菌操作。,2.每递增稀释一次，即换一支1mL灭菌吸管。,3.培养基使用前应先检查培养基内小倒管中有无气泡。,4.接种量在1ml及以下时用单料培养基，接种量超过1ml时用双料培养基。,5.检样从开场稀释到接种所用时间不宜超过15min。,习题作业,1.,判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染程度时，常用总大肠菌群作为指示菌来表示，该指示菌应具备的条件有哪些。,2.,总大肠菌群和粪大肠菌群有什么区别？如何区分粪大肠菌群和非粪大肠菌群。,习题作业,3.检样从开场稀释到接种所用时间不宜超过15min，为什么？,4.单料和双料培养基有什么区别？什么时候使用双料培养基？,5.生活饮用水的菌落总数、总大肠菌群标准是多少？畜禽饮用水总大肠菌群标准是多少？,