病毒鸡胚培养法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,病毒的鸡胚培养,（一）实验目的,（二）实验原理,（三）实验器材,（四）实验方法,（五）实验作业,（一）实验目的,1.了解鸡胚培养有哪几种常用的接种方法。,2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒的操作技术。,（二）实验原理,实验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培养两种方法，而鸡胚培养更为常见。一般而言，禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒，其他动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。,鸡胚接种技术是养禽业中一种相对新的疫苗接种方法。这种方法就是对孵化后期的鸡胚接种某些活的病毒疫苗。这些病毒疫苗不会对孵化率产生不利的影响，通过这种方式接种疫苗后孵出的雏鸡具有免疫保护力。,（三）实验器材,：,要选择SPF鸡胚或低母源抗体的鸡胚。从实践看，法氏囊炎病毒对抗体相当敏感，所以要用无母源抗体的鸡胚；而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵御母源抗体的作用而得以繁殖致死鸡胚。,孵化前的鸡胚应注意消毒，置37-38、相对湿度45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋第4天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采用9-11日龄的活胚接种。,（四）实验方法,1.接种前的准备：,a.鸡胚的准备：选择9-11日龄的鸡胚，在照蛋时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中，在血管之间的间隙划上记号，作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒，再用75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气室向上竖放于蛋托上。,鸡胚的模式结构,b.病毒材料的准备：要分离培养的病毒材料应是无菌的，因此在处理材料的过程中，应严格按照无菌操作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每1000羽份配成250ml,为达到无菌的目的，可在每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各100-5000IU，置室温中1h处理。,法氏囊病毒的分离,取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5（w/v）加入生理盐水，研磨，-20，反复冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为准；,将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤,鸡胚接种的方法有几种：,绒毛尿囊腔内接种 ,绒毛尿囊膜接种,羊膜腔接种,卵黄囊内接种,取10-12日龄的鸡胚，照蛋选择血管较少的部位做一记号，用磨蛋器磨一于纵轴平行的裂痕，小心挑开蛋壳，将白色的壳膜用针尖小心挑破，不要伤及血管丰富而透明的绒毛尿囊膜，在气室顶端钻一小孔，用滴管贴近小孔，轻轻一吸，绒毛尿囊膜便下陷成一小凹。,绒毛尿囊膜接种,绒毛尿囊膜接种,取10-12日龄的鸡胚，消毒气室顶上的蛋壳，并将气室顶端的蛋壳锉一三角形的裂痕，用灭菌镊子揭去裂痕部位的蛋壳和壳膜，用灭菌平头镊子刺破尿囊膜，并轻轻夹去羊膜，用小号针头刺进羊膜腔内，注入0.05-0.1ml的病毒接种液，以氧化锌胶布封口，滴上溶化的固体石蜡。放回孵化器，使蛋直立孵化。,羊膜腔接种,羊膜腔接种,选择6-8日龄的鸡胚，照蛋检查，划出气室和胎位，并以气室向上竖立在蛋托上，气室端的蛋壳经消毒后以打孔器钻一小孔，将注射针头刺过小孔，沿着卵的纵轴刺入约3cm，然后注入0.2ml的病毒接种液，用氧化锌胶布及石蜡封口后放回孵化器中培养。,卵黄囊内接种,卵黄囊接种,鸡胚的各种接种途径,绒毛尿囊腔内接种 ,绒毛尿囊膜接种,羊膜腔接种,卵黄囊内接种,3.收毒：,病毒的收毒根据接种的途径而定。,尿 囊 液,绒毛尿囊膜,羊 水,卵黄液和卵黄膜,操作完毕，将所有的用具煮沸消毒，擦净后再以消毒水浸洗，卵壳、壳膜和胚胎等残物煮沸消毒后弃去。,（五）实验作业,1.用鸡胚培养病毒，在选用鸡胚时应注意什么问题？,2.绒毛尿囊腔内接种在培养和收毒过程中应注意哪些问题？,