非特异性免疫实验1126

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,一、非特异性免疫,吞噬作用 示教,溶菌酶实验,1,个平板,/,组,补体传统途径激活实验,溶血实验,1,份,/,组,二、机体细胞免疫功能测定,1,、,E,玫瑰花环实验 示教,2,、淋巴母细胞转化实验示教,1,一、吞噬细胞及吞噬作用,吞噬作用,是指白细胞游出到炎症灶，吞噬病原体以及组织碎片的过程。,完成此功能的吞噬细胞主要有两种，其吞噬异物的过程基本相同，但其结构和化学成分则有所不同。,中性粒细胞,巨噬细胞,2,实验方法：中性粒细胞的吞噬作用,金黄色葡萄球菌1-2ml，注入小白鼠腹腔内,5小时后，解剖，腹腔液涂片，染色,观察小吞噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的现象,3,实验方法：巨噬细胞的吞噬作用,10%鸡红细胞悬液注入小白鼠腹腔内,分别于1,6,24小时抽取腹腔液涂片，染色,观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,4,二、溶菌酶试验,溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种低分子量的碱性蛋白质，主要来源于巨噬细胞，是天然免疫中一种重要的体液杀菌成分。,肽聚糖是细菌细胞壁中的重要成分，溶菌酶能够水解肽聚糖从而使细菌溶解。,细 革兰氏阳性：溶解,菌 革兰氏阴性：肽聚糖外面有一层脂多糖和脂蛋,白，一般情况下不受溶菌酶的影响。,5,1、实验室准备：,（1） 带菌平板的准备：处理好溶壁微,球菌加入琼脂内,到平板,冷凝备用。,（2）每平板打4个小孔，如图。,1,2,3,4,6,2、同学们操作步骤：,清水漱口,将唾液涂于空平板中,用吸管吸出，按下图滴入孔内,37过夜,明天上午,测量溶菌环的直径，记录分析,7,4,1,2,3,PBS,阴性对照,鸡蛋清,阳性对照,3，4加入唾液标本,8,三、补体溶血实验,原理：,补体经过经典途径激活后产生溶解细胞等作用。,RBC（Ag）,+,溶血素,（Ab）,+,补体,RBC,溶解,9,方法,10,结果与判断,红细胞溶解，液体变为红色透明,（,+,）,不溶解，液体均匀浑浊或有少量红细胞沉于管底,（-）,11,四、E,玫瑰花环形成实验,实验原理,T,细胞表面标志,CD2，,即绵羊红细胞受体,绵羊红细胞表面,CD58,可与,CD2,结合,可用于,T,细胞的计数与分离,12,左:（甲紫染色，800）：可见2个被绵羊红细胞包围而形成玫瑰环的T淋巴细胞；,右:（吖啶橙染色）：图中可见3个染成橙黄色荧光的T淋巴细胞被绵羊红细胞所包围。,T淋巴细胞玫瑰花环,13,实验结果,凡能结合三个以上绵羊红细胞者为玫瑰花形成,阳性细胞,。,正常人的花环形成率,50-70%,，,大致可以代表周围血中,T,细胞的百分数。,14,五、,T,淋巴细胞转化实验,T,细胞受到特异性抗原或非特异性丝裂原刺激时，可发生转化。,特异性抗原,非特异性丝裂原：,PHA、ConA,等。,正常人淋巴细胞受到,PHA,刺激后，其转化率为,60-80%,。,15,转化细胞形态特征,细胞体积：增大,细胞核,大小：增大,染色质：疏松,核仁：清晰,有丝分裂：+/-,细胞浆,着色,空泡或伪足,16,17,18,