检验方法评价

,*,By Laura,检测系统的性能评价、,确认和验证,1.,测量误差：,测量结果,减去被测量的,真值,的差，简称误差。,2.,随机误差：,测量结果与在重复条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。,3.,系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差称为系统误差。亦称为,正确度,复习基础知识,4,、正确度：检测结果离真值的偏移程度,5,、精密度：,表示测量结果中随机误差大小的程度。,6,、准确度：,准确度是测量结果中,系统误差（正确度）,与,随机误差（精密度）,的综合,。,检验结果应该：,准确,精确,迅速,1.,实验方法,分级,实验方法学与量值溯源,2.,参考物的,分级,3.,值溯源,4.,方法学评价,第一节、方法学与量值溯源,是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。,决定性方法,参考方法,是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。,常规方法,是指性能指标符合临床或其他目的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。,一,临床生化检验方法分级,表,3-1,临床生化检验项目的决定性方法、参考方法、常规方法,项目,决定性方法,参考方法,常规方法,钙,ID-MS,原子吸收分光光度法,邻甲酚酞络合酮法、,MTB,法,氯,ID-MS,、中子活化法,电流滴定法,硫氰酸汞法、选择性电极法,镁,ID-MS,原子吸收分光光度法,MTB,法,钾,ID-MS,、中子活化法,火焰光度法,离子选择电极法、火焰光度法,钠,中子活化法,火焰光度法,离子选择电极法、火焰光度法,清蛋白,-,免疫化学法,溴甲酚绿法,总蛋白,-,凯氏定氮法,双缩脲法,肌肝,ID-MS,离子交换层析法,苦味酸法、酶法,尿素,ID-MS,尿素酶法,二乙酰一肟法、酶法,尿酸,ID-MS,尿酸酶法（紫外）,磷钨酸比色法,胆红素,-,重氮反应法,J-G,法、钒酸盐氧化法,葡萄糖,ID-MS,已糖激酶法,葡萄糖氧化酶法,胆固醇,ID-MS,Abell-Kendall,法,酶法,甘酒三脂,ID-MS,变色酸显色法,酶法,（,primary reference materials,）也称一级标准品，与决定性方法平行，用于验证决定性方法、评价与校准参考方法，以及为二级标准品定值。,原级参考物质,次级参考物质,（,secondary reference materials,）也称二级标准品 ，二级标准品的定值源于一级标准品和参考方法，主要用于评价常规方法，也可为质控物定值。,常规校准品,校准（,calibration,）指的是对由仪器、方法和试剂所组成的检测系统的校准过程。,电解质、酶类、其他生化指标应合理选择校准品,二,临床生化检验的参考物质和校准品,标准品,校准品,质控品,一,级标准品用高纯化学物质。一般由国家标准计量局出具证书。,二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定。由参考实验室或权威学术组织出具证书，如,SRM,、,BCR,、,IFCC,。,标准品,(standard,）可用做校准品（,calibrater,），考虑血清成分复杂、难以避免基质效应 。,质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值、冻干或液体，添加了防腐剂和保护剂等。,图,21-1,各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程,三,量值溯源,溯源性,(traceability,）,是指通过一条具有规定,不确定度（,uncertainty,）,的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是国家或国际测量标准）联系起来的特性，称为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。,溯源性,图,3-2,量值溯源和量值传递途径,第二节 检测系统的性能评价、确认和验证,教学：,检测系统的性能评价,检测系统的性能确认,检测系统的性能验证,系,统,误,差,误差分类,评价试验,评价指标,理想结果,比例系统误差,回收试验,回收率,95-105%,恒定系统误差,干扰试验,干扰值,接近,0,比例系统误差,恒定系统误差,方法对比试验,Y=a+bX,b,接近,1.0,a,接近,0,随机,误差,重复性试验,（批内、批间、日间）、总不精密度,CV,0.97，或b,1.03。,相关系数r,一般情况下，,0.975,或,2,0.95,。,二、检测限的评价,1.,可检测的最低分析物浓度为检测系统的分析灵敏度或称检测限。,分析灵敏度：,具有定性含义的： 检测低限（,LLD,） 空白,具有定量含义的： 生物检测限（,BLD,） 加物,功能灵敏度（,FS,）,CV,2.,检测限的不同概念,3.,检测限实验,4.,结果可接受性评价,与仪器或试剂厂家标示比较,三、回收试验,所谓回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的是测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。,方法,将被分析的纯品标准液加入病人样品中，成为分析样品，原病人样品加入相同量的无分析物的溶液作基础样品，然后用实验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。,回收率计算,以测定血清钙为例说明如下：,样品制备,1),基础样品：血清,2ml,蒸馏水,0.1ml,；,2),分析样品：血清,2ml,4mmol/L,钙标准液,0.1ml,；,3),分析样品：血清,2ml,25mmol/L,钙标准液,0.1ml,；,计算公式及计算结果,故本例的管的加入量分别为：,回收浓度分析样品测得浓度基础样品测得浓度,回收率（）回收浓度,/,加入浓度,100,血清钙回收试验结果,测得浓度（,mmol/L,）,加入浓度（,mmol/L,）,回收浓度（,mmol/L,）,回收率,1.70,1.88,0.19,0.18,94.7,2.85,1.19,1.15,96.6,平均,95.7,理想的结果期望回收率达到,100,，,要求,95%-105%,。,现在平均回收率为,95.7,.,注意事项,准确吸量。,样品中加入标准液后，总的浓度必须在测定方法的分析范围内，须作加入高、中、低不同浓度的回收试验，计算平均回收率。,加入标准液后，使实验样品中被测浓度达到医学上具有决定意义的浓度。,加入标准液的体积在整个样品中要少，一般在,10,以内。,四、临床生化干扰试验 ,EP7-A,干扰：在临床生化中，由于另一成分的影响或者样本的特性，待测的一定浓度的分析物出现有临床意义的偏倚。,分析物：实验室测试的物质或者成分,干扰物：样本中不同于分析物的能引起测量偏倚的组分 。,应用举例,尿酸对,GOD-POD,法测定血糖的干扰：,样本制备：, 基础样本： 血清,0.9ml+0.1ml,蒸馏水, 分析样本,1,： 血清,0.9ml+4mmol/L,尿酸,0.1ml,分析样本,2,： 血清,0.9ml+8mmol/L,尿酸,0.1ml,尿酸样本：蒸馏水,0.9ml+8mmol/L,尿酸,0.1ml,用,GOD-POD,法测定，结果填入下表。,干扰实验检测结果,葡萄糖测得值,（,mmol/L,）,加入尿酸值,(mmol/L),干扰值,(mmol/L),基础样本,6.50,分析样本,1,6.20,0.40,0.30,分析样本,2,5.95,0.80,0.55,尿酸样本,0,干扰实验检测结果,单位浓度尿酸使葡萄糖减少值,= mmol/L,表明正常血清尿酸,0.4mmol/L,，使血糖测定结果约减少,0.28mmol/L,。,五、,评价测定线性范围,（,EP6-A,法）,线性范围（,linear range,）是指系统最终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度或活性成比例的范围。,线性检测系统反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。,实验标本,线性实验应使用与病人标本相似的标本，最少使用,4,个浓度水平，推荐,5,个水平。,高值标本应高于线性上限,30,，低值标本应低于线性低限。,样本来源,病人标本,低浓度的标本稀释高浓度标本,用推荐的稀释液稀释病人样本,病人样本中添加分析物,商业质控物,/,校准物,/,线性验证物质,可准备如下血清：,低浓度,X1,混合血清；,高浓度,X5,混合血清；,血清,X2,：,3,份,“,X1,”,+1,份,“,X5,”,；,血清,X3,：,2,份,“,X1,”,+2,份,“,X5,”,；,血清,X4,：,1,份,“,X1,”,+3,份,“,X5,”,。,浓度由低到高顺序：,X1, X2, X3, X4, X5,配制溶液浓度的计算,X,为标本浓度，,V,为标本体积,实验程序,全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开标本。每个浓度标本重复测定,4,次纪录测定结果。,方法线性实验记录表,标本浓度,测定次数,X,1,Y,1-1,Y,1-2,Y,1-3,Y,1-4,X,2,Y,2-1,Y,2-2,Y,2-3,Y,2-4,X,3,Y,3-1,Y,3-2,Y,3-3,Y,3-4,X,4,Y,4-1,Y,4-2,Y,4-3,Y,4-4,X,5,Y,5-1,Y,5-2,Y,5-3,Y,5-4,数据评估,初步数据检查,离群值检查,确定线性范围,初步数据检查,目视检查每一个分析的所有结果有无潜在的离群值。将测量数据作为,Y,值，计算浓度或相对浓度作为,X,值进行作图。,在图上，每一个,Y,值有一个对应的,X,值，将每个浓度水平重复测定的均值点在图上，将这些点连接起来，观察每个点与直线的大致偏差，这样容易发现异常点（明显的抄写错误或仪器故障等）。,判断离群点的方法,对于特定浓度,Yi,值的离群点进行检测时，需将其,4,个重复值从大到小排列（,Yi-1,到,Yi-4,）。,计算级差,D=Yi-1,Yi-4,。,若,Yi-1,可能是离群点，计算：,D1=,（,Yi-1,Yi-2,）,/D,。,若,Yi-4,可能是离群点，计算：,D4= Yi-3,Yi-4,）,/D,。,计算结果（,D1,或,D4,）如果大于,0.765,（,0.05,）或,0.889,（,0.01,），则该点判为离群点。,全部数据中的离群点如果有,2,点，则应保留全部数据或重新进行实验。,离群点,2,个或者以内，保留全部数据。,离群点,2,个以上，重新实验。,数据的处理,以分析物浓度为,X,轴，反应值或仪器输出值（均值）为,Y,轴，绘制,X-Y,线性图（,Y=aX+b,）。,目测线性和进行统计学分析，判断是否符合要求。,确定线性范围,多项式回归分析,非线性程度,随机误差的影响,多项式回归分析,可以借助多种商业统计软件完成。,SPSS,和,SAS,做数据库,例如用,SPSS,的话，选,“,分析,”,“,回归分析,”,“,曲线估计,”,“,因变量,”,、,“,自变量,”,、,“,模型（线性、平方、三次方）,”,得三个方程,多项式回归分析,阶别,回归方程,回归,自由度（,Rdf,）,一次,Y=a+b,1,X,2,二次,Y=a+b,1,X+b,2,X,2,3,三次,Y= a+b,1,X+b,2,X,2,+b,3,X,3,4,将测定数据分别拟合一次、二次和三次多项式,多项式回归分析,一次多项式模型为直线，是判断某种方法是否为线性的最适方程。,二次多项式模型代表一种抛物线反应曲线，有增加趋势（曲线上升）或减少趋势（曲线下降）两种。,三次多项式模型代表一种,“,S,”,形反应曲线，在测量范围的两端呈非线性。,在一次多项式模型中,线性试验评价：,1,、,a,接近于,0,2,、,b=0.971.03,可判定测定范围为该方法的线性范围,多项式回归分析,回归系数用,b,i,表示，在二次多项式模型中，,b,2,为非线性系数；在三次多项式模型中，,b,2,和,b,3,为非线性系数。,计算每个非线性系数斜率的标准差，然后进行,t,检验，判断非线性系数是否有统计学意义，即与,0,之间有无差异。,如果二次多项式模型的非线性系数,b,2,，或三次多项式模型的,b,2,或,b,3,中任一个与,0,比较，差异显著性,(P0.05),，则该组数据存在非线性。否则认为存在线性关系。,小 结,本章节主要介绍,实验方法与参考物的分级，量值溯源概念与意义，实验方法学评价的主要指标，检测系统评价的内容,和,步骤,思考题,1,、实验方法分级名称、用途和特点。,2,、标准试剂分级的名称、用途。,3,、常用方法评价指标有哪些？各解决哪些误差类型？,4,、评价精密度和正确度实验的方法。,5,、系统误差、随机误差、量值溯源、检测系统的概念。,