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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,高速逆流色谱仪的应用, ,体系的筛选及其影响因素,2,TOPICS:,HSCCC,概念,体系筛选的主要参数,K,值的测定方法,分离的影响因素,体系的选择方法,具体实例,小结,3,高速逆流色谱（,HSCCC）,是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两项不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，在固定相中分配比例大的后被洗脱。,与传统色谱相比，它是液液分配的，动态的，多维力场的分离方法。,HSCCC,4,主要参数,影响,HSCCC,体系的分离效果的主要参数,K,待分离样品的不同成分在上下相中的溶解度的分配比,K ,Cs,/,Cm,理想的分配比值,k = 0.671.5,Cs,Cm,两种溶质分离因子：, K1/K2,5,测定方法,如何测定,K,值？,利用分光光度计,利用,TLC,利用,HPLC,利用生物活性分配比率法,6, 固定相保留率, 转速及流速, 温度,pH,值, 进样量,当体系选定后，在适当合理的调节这些因素，样品可以达到有效的分离。,分离的影响因素,7, 固定相保留率,直接决定分离柱的有效长度，合适的范围为3080。在一定范围内，保留率越高，分离越好。, 转速及流速,不同的机型可选择不同的转速及流速。在一定范围内，转速提高，保留增加；流速降低，保留增加。,8, 温度,不同的样品及不同的体系，温度的影响可能都会不一样。可配置恒温装置，控制实验因素。,pH,值,可通过调节体系的,PH,值使样品的溶解度达到合适的范围。,进样量,进样量的大小及溶样体积多少的影响,9,选择方法,一、经典体系,二、参考文献,三、自选体系,四、体系的调节,五、常见体系组合,10,一、经典体系,正己烷乙酸乙酯甲醇水（1111）,正己烷甲醇水（1,11,）,氯仿甲醇水（432）,文献：,银杏黄酮类有效成分的分离,溶剂系统:氯仿-甲醇-水 (4:3:2),流速:2,ml/min,转速:900,rpm,分离温度:26,C,A,C,B,11,二、参考文献,参考与目标成分相类似的成分的分离，确定初分体系的组分及比例。,文献：,葛根素 (黄酮苷),乙酸乙酯正丁醇水（213）,小檗碱 (生物碱),氯仿甲醇0.1,mol/LHCl（211）,紫杉醇 (萜类),正己烷乙酸乙酯甲醇水（1111）,12,三、自选体系,在选择之前，清楚了解目标成分的性质。目标成分的性质对体系的选择很重要，如它的溶解度、极性、分子结构等。,蒽醌类 易溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇,苷类 易溶于正丁醇、乙醇、甲醇、水,13,在研究的任一阶段都可进行自选体系的摸索。,重点是：体系组成和各组分比例。,根据样品在各种溶剂中的溶解性来确定组分，然后通过测,K,值观察样品在上下相中的溶解度变化来确定比例。,14,例如：,挥发油类,性质：易溶于石油醚、正己烷，溶于甲醇、乙醇，不溶于水,组分可选择：,石油醚甲醇水,石油醚乙酸乙酯甲醇水,组分比例可通过测,K,值，确定比例是111或431，从而初步筛选出体系,15,四、体系的调节,1、两个方向,（一） 增加（或减少）目标成分在固定相中的溶解度,（二） 减少（或增加）目标成分在流动相中的溶解度,16,2、具体调整方法,（一）微调体系比例,如：氯仿甲醇水（432）,微调比例：3.532或431.5,（二）增加（或减少）某一组分,如：四氯化碳氯仿甲醇水（1432）,（三）替换某一组分,如：四氯化碳甲醇醇水（432）,17,五、常见体系组合,小极性 正己烷甲醇,石油醚甲醇水,正庚烷乙腈二氯甲烷,正己烷乙酸乙酯甲醇 水,中等极性 氯仿甲醇水 正己烷乙酸乙酯甲醇 水,大极性 乙酸乙酯丁醇水,氯仿甲醇丁醇水,18,具体实例,实例1,分离金银花中的绿原酸,结构式：,分析：有机酸，溶于乙酸乙酯、丁醇，易溶于甲醇、乙醇、水,组分可选择：氯仿甲醇水；,正丁醇乙酸乙酯水,初步判断：大极性,19,现选定它们的比例分别为564；415，测定以上体系的,K,值，分别为15，0.075。,分析,K,值较小，考虑到样品为有机酸，以正丁醇乙酸乙酯水为基准调节，将乙酸乙酯替换为乙酸，经测定,K,值为2.09。,上机，如图,20,实例2,分离大黄蒽醌类,结构式：,分析：易溶于乙醚、乙酸乙酯、氯仿，溶于甲醇、乙醇，不溶于水,组分可选择：氯仿甲醇水；,正己烷甲醇水；,正己烷乙酸乙酯甲醇水,21,初步判断：中等极性偏小,现选定正己烷甲醇水体系，比例根据测定,K,值（111，211，112）情况，选定211,上机实验，结果如图：,100,120,140,160,120,140,160,180,200,Absorbance (mV),Time (min),22,结果分析，流动相溶解度太大，固定相几乎无溶解，增加一相，让其在固定相中溶解增加，所以加入少量乙酸乙酯，比例调整为：10155,上机实验，结果如图：,0,100,150,200,260,120,140,160,180,200,III,II,I,Absorbance,(mV),Time (min),23,结果分析，体系有一定的分离度，峰分离度较差，此时微调体系，让峰在固定相的保留增加，体系调整为：9155,上机实验，结果如图：,（以上均为案例分析）,24,小结,逆流色谱具有许多其他色谱分离方法不可替代的优点，它发展至今，更广泛的应用还受到一些因素的制约。在溶剂体系的选择上还没有非常系统、成熟的理论来指导，在这我们讨论了一些溶剂体系选择原则和技巧，但是在具体选择一种可以达到理想分离效果的溶剂体系还需要有相当的经验因素。目前我们很多的研发人员在着手这方面的研究，相信在不久的将来,HSCCC,将发展成为一种更加成熟的高效分离纯化技术。,25,谢谢,Thanks!,26,
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