实验3浊度测定(分光光度计的使用)--课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件,*,浊度的测定,1,ppt课件,浊度的测定 1ppt课件,实验目的,掌握分光光度计法,掌握浊度计法的原理与操作技术,2,ppt课件,实验目的掌握分光光度计法2ppt课件,仪器,容量瓶,比色管,浊度计,分光光度计,3,ppt课件,仪器容量瓶3ppt课件,试剂,硫酸肼溶液：称取,1.000g,硫酸肼溶于水，定容至,100ml,六次甲基四胺溶液：称取,10.000g,六次甲基四胺溶于水，定容至,100ml,标准溶液：吸取,5.00ml,硫酸肼溶液和,5.00ml,六次甲基四胺溶液于,100ml,容量瓶总，混匀于,25,度反应,24h,，用水稀释至标线。,无浊度水,4,ppt课件,试剂硫酸肼溶液：称取1.000g硫酸肼溶于水，定容至100m,了解分光光度计的工作原理及操作技术,5,ppt课件,了解分光光度计的工作原理及操作技术5ppt课件,原理,光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在,400,750nm,：小于,400nm,的光线称为紫外光；大于,750nm,的光线称为红外光。,当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。,6,ppt课件,原理6ppt课件,依据,Lambert-Beer,（朗伯比尔）定律，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其,吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比,。,当入射光、吸收系数,K,和溶液的光径长度,L,不变时，,吸光度,A,与溶液的浓度,C,成正比。,具体测量时，,7,ppt课件,依据Lambert-Beer（朗伯比尔）定律，一束单色光通,补充知识,8,ppt课件,补充知识8ppt课件,测量后的计算方法,使用,9,ppt课件,测量后的计算方法使用9ppt课件,型可见分光光度计,10,ppt课件,型可见分光光度计10ppt课件,11,ppt课件,11ppt课件,双缩脲法,测定,蛋白质浓度,原 理,双缩脲法是蛋白质光度分析法的一种，是利用蛋白质的双缩脲反应而测定蛋白质含量的方法。因蛋白质含有两个以上的肽键，所以有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与,Cu,2+,形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。,在一定的实验条件下，未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于,540560nm,测定，即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。,12,ppt课件,12ppt课件,试剂,一 试剂,1,标准酪蛋白溶液（,5mg/ml,）,用,0.05mol/L NaOH,溶液配制：,5g,酪蛋白加,0.05mol/L NaOH,溶液至,1 000ml,。,2,双缩脲试剂,溶解,1.5g,硫酸铜（,CuSO4,5H2O,）和,6.0 g,酒石酸钾钠（,NaKC4H4O6,4H2O,）于,500ml,蒸馏水中。在搅拌下加入,10% NaOH,溶液,300ml,，用蒸馏水稀释到,1,升，贮存在内壁涂有石蜡的瓶中，可长期保存。,3,未知蛋白质溶液,球蛋白溶液。,13,ppt课件,试剂一 试剂13ppt课件,14,ppt课件,14ppt课件,实验结果,求出待测蛋白质溶液的光密度后，从标准曲线上查出其蛋白质浓度，按稀释倍数求出每毫升蛋白质溶液的蛋白质含量。,15,ppt课件,实验结果15ppt课件,蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。,吸收高峰在,280nm,处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在,238nm,的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定。,紫外吸收法测蛋白质含量,16,ppt课件,蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,紫外分光光度计,17,ppt课件,紫外分光光度计17ppt课件,浊度计法,1.,定标用蒸馏水定出仪器的零点,再用此零点测量空气,得到参数值,.,称为定标值,.,以后在测量时,只要用调整旋钮将数字精确调到定标值方可直接测量,.,2.,测量用待测液冲洗样槽注入待测液至液位线,.,擦干样槽外侧,将读书调到定标值,选好档位,.,将样槽放入样槽室,管束样槽门,.,此时显示屏上的读数就是待测液的实际浊度,.,18,ppt课件,浊度计法1.定标用蒸馏水定出仪器的零点,再用此零点测量空气,