免疫细胞的分离技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,精选PPT,*,免疫细胞的分离,1,精选PPT,2024/9/1,免疫细胞的分离1精选PPT2023/9/7,免疫细胞,1,、概念,直接参与免疫应答及与免疫应答相关的所有细胞。,2,、分类,单核吞噬细胞系统：,单核细胞,/,巨噬细胞,树突状细胞（,DCs),淋巴细胞系统：,T,淋巴细胞 （,Th / Tc),B,淋巴细胞,NK,细胞,粒细胞系统: 中性粒细胞,噬酸性粒细胞,噬碱性粒细胞,2,精选PPT,2024/9/1,免疫细胞1、概念2精选PPT2023/9/7,免疫细胞的分离,人外周血单个核细胞的分离,淋巴细胞的分离,免疫细胞亚群的分离,3,精选PPT,2024/9/1,免疫细胞的分离人外周血单个核细胞的分离3精选PPT2023/,细胞分离原理,细胞的大小和比重,细胞表面标志,细胞黏附于各种物质表面的特性,4,精选PPT,2024/9/1,细胞分离原理细胞的大小和比重4精选PPT2023/9/7,一、人外周血单个核细胞的分离,Ficoll,分层离心法,人外周血单个核细胞,(peripheral blood mononuclear cell, PBMC): Monocyte,、,Lymphocyte,。,原理：,血液中各细胞成分的比重不同，经离心沉淀，即可在分层液与血浆之间获得比较纯的单个核细胞，其中淋巴细胞占,90%,以上。,5,精选PPT,2024/9/1,一、人外周血单个核细胞的分离,不同细胞密度不同,红细胞和多形核白细胞,1.092,单个核细胞,1.070,分层液,1.077,6,精选PPT,2024/9/1,不同细胞密度不同 红细胞和多形核白细胞 1.092,一、人外周血单个核细胞的分离,Ficoll,分层离心法,Ficoll,分层液：蔗糖聚合物,+,泛影葡胺，密度,1.077,+,0.001g/L,。,7,精选PPT,2024/9/1,一、人外周血单个核细胞的分离,二、淋巴细胞的分离,尼龙棉柱法,E,花环分离法,补体细胞毒法免疫荧光法,8,精选PPT,2024/9/1,二、淋巴细胞的分离尼龙棉柱法8精选PPT2023/9/7,二、淋巴细胞的分离,尼龙棉柱法,原理,：,B,细胞和单核细胞具有,易黏附,的特性，将淋巴细胞悬液加至尼龙纤维柱上，,37 ,作用,12h,后，洗脱的为非黏附性的,T,细胞。,PBMC,尼龙纤维棉柱,B,细胞,单核细胞,T,细胞,9,精选PPT,2024/9/1,二、淋巴细胞的分离,二、淋巴细胞的分离, E,花环分离法（纯化,T,细胞）,原理,成熟,T,细胞表面有绵羊红细胞受体（,E,受体，,CD2,分子），可和,SRBC,形成,E,花环，,B,细胞则无。,E,花环比重大，沉淀，经分离液分离来。,E,花环周围的绵羊,RBC,可 用低渗法除去。,10,精选PPT,二、淋巴细胞的分离,三、免疫细胞亚群的分离,免疫磁珠分离法,流式细胞术,11,精选PPT,2024/9/1,三、免疫细胞亚群的分离免疫磁珠分离法11精选PPT2023/,三、免疫细胞亚群的分离,免疫磁珠分离法,原理：,将抗体交联于磁珠表面形成免疫磁珠,（,Immunomagnetic bead，IMB,），免疫磁珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连，,在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的。,2024/9/1,12,免疫细胞的分离,12,精选PPT,三、免疫细胞亚群的分离,三、免疫细胞亚群的分离,免疫磁珠分离法,1.,直接法：,抗细胞表面分子抗体,+,磁性微球,免疫磁珠,+,细胞悬液,与免疫磁珠结合的细胞,2.,间接法：,第二抗体,+,磁性微粒,第一抗体,+,细胞,特定细胞,13,精选PPT,三、免疫细胞亚群的分离,14,精选PPT,14精选PPT,15,精选PPT,15精选PPT,免疫磁珠法分选装置,16,精选PPT,免疫磁珠法分选装置16精选PPT,三、免疫细胞亚群的分离,流式细胞术,（,Flow Cytometry,，,FCM,）,FCM,将免疫荧光技术应用于流式细胞仪，对单个细胞的表面标志（抗原或受体）进行快速、精确的分析和自动检测，并将不同类型的细胞分选收集。,原理：,细胞经荧光染色后，通过高速流动系统，细胞排成单行，逐个流经检测区。当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声震动液流，使液流段裂成一连串的均匀小滴，每个小滴内最多含一个细胞，细胞经激光束照射产生荧光和散射光，由光电倍增管接收，转换成脉冲信号，数据经电脑处理，分辨细胞类型。,17,精选PPT,2024/9/1,三、免疫细胞亚群的分离 流式细胞术（,流式细胞仪工作原理,18,精选PPT,2024/9/1,流式细胞仪工作原理18精选PPT2023/9/7,流式细胞仪,19,精选PPT,2024/9/1,流式细胞仪19精选PPT2023/9/7,免疫细胞的分离,人外周血单个核细胞的分离,Ficoll,分层离 心法,淋巴细胞的分离,尼龙棉柱法、,E,花环分离法、补体细胞毒法免疫荧光法,免疫细胞亚群的分离,免疫磁珠分离法、流式细胞术,20,精选PPT,免疫细胞的分离人外周血单个核细胞的分离Ficoll分层离,谢谢！,21,精选PPT,2024/9/1,谢谢！21精选PPT2023/9/7,