药理实验课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精品课件,*,药理学实验,1,精品课件,药理学实验 1精品课件,实验一 药理实验基础知识,实验二不同给药途径对药物效应的影响,实验三 药物的协同作用和拮抗作用,实验四,戊巴比妥钠,LD,50,的测定,实验五 利尿药对家兔尿量的影响,药理学实验,2,精品课件,实验一 药理实验基础知识药理学实验 2精品课件,实验一 药理实验基础知识,一、目的,1.掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；,2.更好地掌握药理学基本理论知识；,3.培养科学思维,3,精品课件,实验一 药理实验基础知识一、目的3精品课件,二、基本要求,1.实验前：,预习实验内容并复习相关理论知识；,2.实验时, 实验器材要妥善保管；, 实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；, 注意节约实验药品；, 维持良好的课堂纪律。,3.实验后, 各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；, 值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；, 书写实验报告。,4,精品课件,二、基本要求4精品课件,三、实验报告的书写,1.题目,2.目的,3.原理,4.材料,：实验动物，器材，药品,5.方法,：用自己的语言简单扼要描述出来；,6.结果,：要求真实、清楚；,7.讨论,：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；,8.结论,：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。,5,精品课件,三、实验报告的书写5精品课件,四、实验设计基本原则,1.随机原则,使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。,2.对照原则, 组间对照,：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照；, 自身前后对照,3.重复原则,6,精品课件,四、实验设计基本原则6精品课件,五、实验动物,1.动物的选择, 小白鼠：,适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。, 大白鼠：,比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。,7,精品课件,五、实验动物7精品课件, 豚鼠：,因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。, 家兔：,常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。, 狗：,狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。,8,精品课件, 豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、,2.实验动物的编号,狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。,9,精品课件,2.实验动物的编号9精品课件,3.麻醉药的选择,局部麻醉：,常采用2普鲁卡因做皮下浸润注射，可用于局部手术。,全身麻醉,：,吸入麻醉,：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发的性质，经肺泡吸收，作用较快，适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。,注射麻醉：,常用戌巴比妥钠和乌拉坦。,10,精品课件,3.麻醉药的选择10精品课件,4.动物捉拿及固定方法, 小白鼠,右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手的小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。, 大白鼠,用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。,11,精品课件,4.动物捉拿及固定方法11精品课件, 豚鼠,豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。, 家兔,可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。,12,精品课件, 豚鼠12精品课件,5. 动物的给药方法, 小白鼠, 灌胃法(i.g.),：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m110g。, 腹腔注射(i.p.),：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3mll0g。,13,精品课件,5. 动物的给药方法13精品课件, 皮下注射(s.c.)：,用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。, 静脉注射(i.v.),：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。,14,精品课件, 皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇, 家兔, 灌胃：,需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。,15,精品课件, 家兔15精品课件, 皮下、腹腔注射,：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg，腹腔为1.0-5.0ml/mg。, 静脉注射,：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。,16,精品课件, 皮下、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药,6.动物的处死：,大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。,17,精品课件,6.动物的处死：大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。17精品课件,一、实验目的,1.观察不同给药途径对同一药物的作用速度、强度的影响；,2.观察同一药物从不同途径进入机体可产生不同的作用。,二、实验材料,注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、硫酸镁溶液,实验二不同给药途径对药物作用的影响,18,精品课件,一、实验目的 二、实验材料 注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯,三、,实验内容,1.,观察不同途径给小白鼠使用戊巴比妥钠后，麻醉开始时间、维持时间和麻醉深度的不同。,观察指标,观察给药前后的活动及翻正反射等情况。,19,精品课件,三、实验内容观察指标 19精品课件,实验方法,取体重相近的小白鼠3只,随机,分为三组，称其,体重,分别放入钟罩内，,观察,它们的正常活动及翻正反射情况，然后按下表给药；观察小白鼠用药后的反应及活动情况，以翻正反射消失时作为麻醉开始指标。记录麻醉开始时间，麻醉维持时间，麻醉深度有何不同（用镊子夹其后肢看其反应）。,组别,处理方法,灌胃组,0.3%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g的量灌胃,肌注组,0.3%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g的量肌注,腹注组,0.3%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g的量腹腔注射,20,精品课件,实验方法取体重相近的小白鼠3只随机分为三组，称其体重分别,实验结果 实验结果填入下表中,不同途径对药物效应的影响,组别,给药方法,麻醉开始时间,麻醉维持时间,麻醉深度,灌胃组,肌注组,腹注组,21,精品课件,实验结果 实验结果填入下表中组别给药方法麻醉开始时间麻醉,2.观察同一种药物硫酸镁，给小白鼠肌内注射和灌胃给药引起的作用性质的不同。,观察指标,动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。,22,精品课件,观察指标 22精品课件,实验方法 取禁食12h的小鼠3只，称重，分别标为对照组、灌胃组和肌内注射组按以下给药：,A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g；,B：灌胃组：灌胃给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g；,C：肌内注射组：肌内注射给3.5硫酸镁溶液,0.2ml/10g。,23,精品课件,实验方法 取禁食12h的小鼠3只，称重，分别标为对照组、,给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比较3组动物的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。,24,精品课件,给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。15mi,实验结果 实验结果填入下表中,不同途径对药物效应的影响,鼠号 体重(g) 药物及剂量 给药途径 动物反应 炭末推进率（%）,A,B,C,炭末推进率计算公式：,炭末的移动距离（cm）,小肠推进率 = 100%,小肠全长（cm）,25,精品课件,实验结果 实验结果填入下表中鼠号 体重(g) 药物,六、思考讨论题,1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？,2、给药前动物禁食12小时的原因。,3、为何比较炭末推进率，而非小肠全长或炭末在小肠内的推进距离？,4、本次实验结果对临床用药有何提示？,26,精品课件,六、思考讨论题 26精品课件,实验三 药物的协同作用和拮抗作用,目的,观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用,材料,兔子只，0.05%硫酸,阿托品,注射液,0.1%盐酸,肾上腺素,注液,0.2%硝酸,毛果芸香碱,注射液,27,精品课件,实验三 药物的协同作用和拮抗作用 目的27精品课件,方法,、取兔放于兔固定箱内,固定,，避免阳光直射眼睛，用毛剪,剪,去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺,测量,瞳孔大小，连续三次，取平均值。,、在兔,左眼,滴入.2%,毛果芸香碱,3滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。,28,精品课件,方法28精品课件,3、滴入毛果芸香碱,20分钟后,，分别在两眼滴入0.1%,肾上腺素,3滴，,15分钟后,测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。,4、滴入肾上腺素,15分钟后,，分别于两眼滴入0.05%硫酸,阿托品,注射液3滴，15分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3次，并取平均值。,29,精品课件,3、滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素,项目,正常,毛果芸香碱,肾上腺素,阿托品,瞳孔,大小,左眼,右眼,记录,讨论题,从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮,抗作用？,30,精品课件,项目正常毛果芸香碱肾上腺素阿托品瞳孔左眼右,实验四 戊巴比妥钠LD,50,的测定,一、毒理学实验方法,1.急性毒性实验：,一次性大剂量给予药物后观察药物的作用；,2.慢性毒性实验：,长期连续多次给予中、小剂量的药物，观察动物一些器官的慢性受损程度；,3.特殊毒性实验：,致癌，致畸，致突变，过敏反应等。,31,精品课件,实验四 戊巴比妥钠LD50的测定一、毒理学实验方法31精品课,二、,LD,50,的测定的,目的与原理,目的：,通过实验学习测定LD,的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性实验的常规方法。,LD50是指使一群体动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物优劣的重要参数。了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。,32,精品课件,二、LD50的测定的目的与原理32精品课件,LD50的测定方法很多，较为常用的有改良寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。本实验介绍结果较准确、计算简便、可计算出全部有关参数的改良寇氏法及及计算机应用程序中的Bliss-Finney法。,33,精品课件,33精品课件,三、具体实验,(以戊巴比妥钠为例),材料,1.动物：,小白鼠,(体重18-22g,，,雌雄各半,，,实验前禁食12h),2.器材：,注射器、鼠笼、天平 、计算器等。,3.药品：,戊巴比妥钠,34,精品课件,三、具体实验(以戊巴比妥钠为例)34精品课件,实验方法,1、预实验：,探索剂量范围：,根据经验或文献找出动物100%及0%死亡的剂量，即上下限剂量（Dm,Dn）。对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系（如2：1）稀释成多个剂量，方法是每组取2 10 只小鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出Dm,Dn。,35,精品课件,实验方法35精品课件,确定组数、计算各组剂量：,组数,（G）：5-8 组,各组,剂量,：各组剂量要按等比级数排列，按下列公式求出,公比r,:,按公比求各组剂量：,D1，D2，D3，D4，D5，Dm,其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1 r，D3 =D2 r，Dm =D n-1r,配制等比稀释溶液：,要求各小鼠给药容积一样，0.1ml/10g0.2ml/10g，按下列公式计算浓度：,36,精品课件,确定组数、计算各组剂量：36精品课件,2、正式实验,分组编号,：随机将小鼠分为五组，每组10 只，各半。,给药,：分别将配制好的等比稀释液按0.2ml/10g 由ip 给药。,观察记录：,给药后观察并记录中毒症状，30分钟后记录各组的死亡小鼠数。,37,精品课件,2、正式实验37精品课件,实验结果,全班结果汇总，计算硝酸士的宁的LD,50,、,LD,50,的可信限和可信限率。,结果处理 实验资料按下表列出：,受试物剂量 对数剂量动物数死亡率概率单位 LD,50,（mg/kg） (X) (只) (%) (Y) 及置信限(95%),1,2,3,4,5,38,精品课件,实验结果 受试物剂量 对数剂量动物数死亡率概率单位,计算方法,计算LD,50,及95%可信限：,LD,50,=lg,1,Xmi(P0.5),Xm=最大剂量的对数值,i=相邻两组比值的对数（lgr）,P=各组死亡率,P =各组死亡率总和,LD,50,的95%平均可信限= LD,50,4.5LD50SX50,其中SX50为LD,50,的标准误,其中n=各组动物数,P,2,=各组死亡率平方的总和,39,精品课件,计算方法39精品课件,注意事项,药物称量、配制及给药的准确程度是本实验成功与否的关键。,1.实验过程中给药剂量一定要准确。,2.注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间。,讨论题,什么叫,？测定,的意义和根据 是什么？,40,精品课件,注意事项 讨论题40精品课件,实验五 利尿药对家兔尿量的影响,一、利尿药,1.定义,：是作用于肾脏，增加电解质和水的排出，使尿量增多的药物。,2.分类,：根据利尿药的作用部位，可分为高效、中效和低效利尿药,3.呋塞米,为高效利尿药, 利尿作用特点, 作用机制, 临床应用, 不良反应,41,精品课件,实验五 利尿药对家兔尿量的影响一、利尿药41精品课件,二、利尿药的实验方法,1.动物选择,可用大白鼠、小白鼠、家兔、猫和狗，其中以大白鼠较为常用。,2.实验方法, 代谢笼实验法：,适用于大、小白鼠；, 直接自输尿管或膀胱收集尿液：,适用于较大动物（家兔、猫、狗）。,42,精品课件,二、利尿药的实验方法42精品课件,三、具体实验,目的,1. 了解急性利尿的实验方法；,2. 观察速尿对麻醉兔的利尿作用。,材料,1. 动物,：家兔,2. 器材,：兔手术台、量筒、注射器、手术,器械,3. 药品,：25乌拉坦，1速尿,43,精品课件,三、具体实验43精品课件,方法,1.,麻醉：,取家兔一只，称重，耳缘,i.v. 25,乌拉坦,4ml/kg,；,注意：注射速度要缓慢，随时观察角膜反射，反射消失即停止注射。,2.,水负荷：,麻醉后,i.g.,给自来水,40ml/kg,；,注意：避免灌至气管，将灌胃管外端浸入水中，若有气泡立即拔出。,3.,手术：,背位固定后剪去下腹部毛，于耻骨联合上方切开皮肤约,45cm,，并沿腹白线剪开肌肉，暴露膀胱，在少血管区做荷包缝合后行膀胱插管；,注意：膀胱插管需注满生理盐水,44,精品课件,方法44精品课件,4.,记录,正常尿量(ml2分钟)，连续记录10min；,5.,耳缘i.v.,1速尿4mg/0.4ml/kg，记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20min尿量毫升数(ml2分钟)。,结果,结果汇总，计算不同时间尿量的均值，以尿量毫升数(ml2分钟)为纵坐标，给药后不同时间为横坐标作直方图。,45,精品课件,4.记录正常尿量(ml2分钟)，连续记录10min；45精,46,精品课件,46精品课件,解热镇痛药对发热家兔体温的影响,目的,观察解热镇痛药的解热作用。,材料,兔、复方氨基比林,溶液、10蛋白胨、电子秤、,体温表、注射器。,47,精品课件,解热镇痛药对发热家兔体温的影响 目的观察解热镇痛药的解,方法,取正常成年兔1只，检查并记录正常体温（兔体温在38.539.5者为合适）。于小时前给乙兔皮下注射10蛋白胨10mlkg，体温可比正常时升高以上，则进行试验，兔腹腔注射复方氨基比林溶液mlkg，给药后分别于0.5小时、1小时、1.5小时测量体温，观察兔体温的变化。,48,精品课件,方法48精品课件,兔号,体,重,药,物,正常体温,给药后体温,0.5h,1h,1.5h,甲,乙,记录,讨论,实验结果说明了什么问题？临床上应用,解热镇痛药应注意些什么？,49,精品课件,兔号体 药正常体温给药后体温0.5h1h1.5h甲,50,精品课件,50精品课件,51,精品课件,51精品课件,52,精品课件,52精品课件,53,精品课件,53精品课件,54,精品课件,54精品课件,55,精品课件,55精品课件,56,精品课件,56精品课件,57,精品课件,57精品课件,