消化系统疾病动模型课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,学习交流,PPT,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,*,第 八 章 消化系统疾病动物模型,The animal models of digestives system diseases,1,学习交流,PPT,第 八 章 消化系统疾病动物模型 The anim,讲授内容,胃炎动物模型,消化性溃疡模型,病毒性肝炎模型（乙型肝炎）,脂肪肝、肝硬化模型,胰腺炎模型,2,学习交流,PPT,讲授内容胃炎动物模型2学习交流PPT,第 一 节 急性胃炎动物模型,3,学习交流,PPT,第 一 节 急性胃炎动物模型 3学习交流PPT,Gastritis,胃黏膜层的炎症（上皮细胞、固有层、黏膜肌）,上皮细胞,固有层,黏膜肌,急性,固有层中性粒细胞浸润,糜烂出血,慢性,浅表性：,淋巴细胞、浆细胞浸润,萎缩性：,炎性细胞浸润，固有层腺,体减少，细胞增生,损伤与修复交替进行，病程迁延,4,学习交流,PPT,Gastritis胃黏膜层的炎症（上皮细胞、固有层、黏膜肌）,胃炎模型的种类,1,、,HP,法,2,、药物、乙醇、应激法,3,、非甾体抗炎药法,4,、复合法,5,、酸制剂法,5,学习交流,PPT,胃炎模型的种类1、HP法5学习交流PPT,HP,法,Helicobacter pylori,Spiral-shaped Gram-negative, oxidase and catalase-positive motile bacterium with 4-6 flagella (,Thruster and anchor,),Microaerophilic, i.e. it requires oxygen but at lower levels than those contained in the atmosphere (,5-8%),With its flagella and its spiral shape, the bacterium drills into the mucus layer of the stomach, and can either be found suspended in the gastric mucosa or attached to epithelial cells,Barry J. Marshall and J. Robin Warren got the Nobel Prize in 2005,2005,诺贝尔医学奖，,Warren,和,Marshall,6,学习交流,PPT,HP法Helicobacter pylori Spiral-,Produces adhesins which bind to membrane- associated lipids and carbohydrates and help its adhesion to epithelial cells,Breaks down urea (NH,2,CONH,2,) to NH,3,and HCO,-,3,Stomach acidity,Chassaing B. Gastroenterology, 2011,140(6):17208,7,学习交流,PPT,Produces adhesins which b,实验动物,小鼠（,18-22g,），蒙古沙鼠（,55-60g,），仔犬、仔猪,操作方法,HP,标准菌株灌胃（,10,9,-10,10,CFU/ml,）法,实验前,12,小时禁食禁水,实验前,1,小时，,0.1mol/L,碳酸氢钠,0.5ml,灌胃,0.5ml /,只,/,次 每两天一次（隔天灌胃）,8,周时模型成功率,90%,保证,HP,活性及浓度,8,学习交流,PPT,实验动物小鼠（18-22g），蒙古沙鼠（55-60g），仔犬,INFLAMMATION,GASTRITIS,MAP3KINASES,muropeptide,Naumann M, Trends in Microbiology, 2004, 12(1): 2936,H. Pylori induces inflammation,9,学习交流,PPT,INFLAMMATIONGASTRITISMAP3KINAS,体重,300g,左右雄性,Wistar,大鼠。,酸制剂法,急性胃炎动物,模型,实验动物,10,学习交流,PPT,体重300g左右雄性Wistar大鼠。酸制剂法急性胃炎动物模,大鼠禁食,24h,，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：,（,1,）水杨酸制剂（如,20 mmol/L,阿司匹林或水杨,酸溶液）按,100 mg/kg,体重灌胃；,（,2,）,10 mmol/L,的醋酸；,（,3,）不同浓度的盐酸（,1,，,10,，,100 mmol/L,）；,（,4,）同种动物胆汁；,（,5,）,2 mmol/L,的牛磺胆酸；,（,6,）,15%,的乙醇；,（,2,）,-,（,6,）可单独或几种合用（,2ml,左右）灌胃；,急性胃炎动物,模型,操作方法,11,学习交流,PPT,大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：,4h,后处死动物，剖检可见胃内发生急性,弥漫性炎症改变。,胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层内见中性粒细胞浸润。,急性胃炎动物,模型,结 果,病 变,12,学习交流,PPT,4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性 胃,13,学习交流,PPT,13学习交流PPT,观察指标：,？,组织：,HE,，免疫荧光，干湿重比等,NOS,，,PGE2,等,PCR,：特定基因或炎症因子,Western,：特定激酶或信号分子，特定基因等,14,学习交流,PPT,观察指标：？组织：HE，免疫荧光，干湿重比等14学习交流PP,第 二 节 急性胃溃疡动物模型,15,学习交流,PPT,第 二 节 急性胃溃疡动物模型 15学习交流PPT,溃疡病的病因,致溃疡因素,:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药不合理应用、幽门螺杆菌感染等。,防御因素,：粘液,-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因子和内生性前列腺素等。,溃疡的形成主要由于,防御因素,和,致溃疡因素,的平衡失调所致。,16,学习交流,PPT,溃疡病的病因致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药不合理应,应激法, 幽门结扎法, 药物法, 醋酸法,常用的方法,急性胃溃疡动物,模型,在抗溃疡药物药效学试验中，应激法、幽门结,扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血,平法和乙醇法可任选其一。,乙醇,组胺,促胃液素,肾上腺类固醇,水杨酸盐,血清素,利血平,保泰松,17,学习交流,PPT, 应激法常用的方法急性胃溃疡动物模型 在,应激法, 幽门结扎法, 药物法, 醋酸法,常用的方法,急性胃溃疡动物,模型,治疗性给药,醋酸法复制的模型,预防性给药,其他模型,乙醇,组胺,促胃液素,肾上腺类固醇,水杨酸盐,血清素,利血平,保泰松,18,学习交流,PPT, 应激法常用的方法急性胃溃疡动物模型治疗性给药,应激法, 幽门结扎法, 药物法, 醋酸法,常用的方法,急性胃溃疡动物,模型,阳性对照药：,H,2,受体拮抗药,西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等,加强胃黏膜防御功能,甘珀酸，果胶铋，硫糖铝,乙醇,组胺,促胃液素,肾上腺类固醇,水杨酸盐,血清素,利血平,保泰松,19,学习交流,PPT, 应激法常用的方法急性胃溃疡动物模型阳性对照药,研究抗胃溃疡药物,胃黏膜形态观察,胃分泌试验,胃黏膜血流量测量,胃粘液测定,抗炎镇痛试验,抑制幽门螺杆菌试验等,20,学习交流,PPT,研究抗胃溃疡药物 胃黏膜形态观察20学习交流PPT,幽门结扎法胃溃疡模型,21,学习交流,PPT,幽门结扎法胃溃疡模型 21学习交流PPT,幽门结扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度,胃液在胃中潴留，损伤胃黏膜造成胃溃疡。,成年大鼠，雄雌均可。,幽门结扎法胃溃疡模型,造模机制,实验动物,22,学习交流,PPT,幽门结扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度 成年,1.,给药,3,天。实验前大鼠禁食,(24h),不禁水。,2.,自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约,23cm,。在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露胃。,3.,在胃幽门与十二指肠连接处用结扎线将幽门结扎，注意勿将邻近的其他器官、血管结扎。同时经十二指肠给予受试药。缝合腹壁切口，用纱布包扎切口。,幽门结扎法胃溃疡模型,操作方法,23,学习交流,PPT,1.给药3天。实验前大鼠禁食(24h)不禁水。幽门结扎法胃溃,4.,幽门结扎后，停止供水供食，术后,18h,处死大鼠，取胃固定、剖检。,5.,沿胃大弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展开，胃黏膜面向上用大头钉固定在蜡板上。,6.,用肉眼或放大镜观察胃黏膜面，记录每只动物产生的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃疡指数）及病变的情况。,幽门结扎法胃溃疡模型,24,学习交流,PPT,4. 幽门结扎后，停止供水供食，术后18h处死大鼠，取胃固定,病变程度的评价,1,溃疡面积,通过溃疡中心量取的最大纵径和横径,S=,（,d,1,/2,）（,d,2,/2,）,式中,S,为溃疡面积，,d,1,为通过溃疡中心量取的最大纵径，,d,2,为通过溃疡中心量取的最大横径。,幽门结扎法胃溃疡模型,25,学习交流,PPT,病变程度的评价1溃疡面积 通过溃疡中心量取的,病变程度的评价,2,溃疡指数,可计数,前胃,部溃疡面积，以其总和作为溃疡指数。,幽门结扎法胃溃疡模型,26,学习交流,PPT,病变程度的评价2溃疡指数 幽门结扎法胃溃疡模,病变程度的评价,3,溃疡程度（,Okabe,法）,在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只,鼠溃疡面积的总合分为,5,个等级作为溃疡指数：,溃疡面积,(mm,2),：,1-12 13-25 26-37 38-50 50mm,2,或穿孔,溃疡指数,:,1,级,2,级,3,级,4,级,5,级,幽门结扎法胃溃疡模型,27,学习交流,PPT,病变程度的评价3溃疡程度（Okabe法） 在解剖显微,模型组溃疡指数给药组溃疡指数,溃疡抑制百分率,100%,模型组溃疡指数,发生溃疡的动物数,溃疡发生百分率,100%,实验动物数,病变程度的评价,3,溃疡程度（,Okabe,法）,幽门结扎法胃溃疡模型,28,学习交流,PPT,模型组溃疡指数给药组溃疡指数,形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的前胃部（瘤胃），多为圆形或椭圆形。,但病变较表浅，属于胃黏膜急性出血性糜烂，与人类胃溃疡的典型病变差距较大。,结 果,幽门结扎法胃溃疡模型,29,学习交流,PPT,形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的前胃部（瘤胃,1.,该模型是,Shay,等创立的模型，方法简单，溃疡发生快，发生率达,97%,，主要用于观察药物对溃疡形成的预防作用。,幽门结扎法胃溃疡模型,模型评价与注意事项,2.,原法规定大鼠禁食,4872h,。一般经验是：,体重小于,180g,，禁食,2448h,，这样动物可以耐受手术；,体重超过,180g,，禁食,4872h,，可提高溃疡发生率。,3.,对笼具的要求。,30,学习交流,PPT,1.该模型是Shay等创立的模型，方法简单，溃疡发,4.,术中要求。,幽门结扎法胃溃疡模型,模型评价与注意事项,5.,观察药物对溃疡的影响时，动物应预先给,药或同时给药，若粗制剂可采用灌胃给药，应确,认胃内已排空后方能结扎幽门。粗制剂可在幽门,结扎的同时采用十二指肠内注入给药较好。,6.,阳性对照药,:,灌胃给予,西咪替丁（甲氰咪胍）,1.0g/kg,体重,雷尼替丁,0.135g/kg,体重,31,学习交流,PPT,4.术中要求。幽门结扎法胃溃疡模型模型评价与注意事项,大鼠胃的解剖及幽门结扎法所致胃溃疡图,32,学习交流,PPT,大鼠胃的解剖及幽门结扎法所致胃溃疡图32学习交流PPT,33,学习交流,PPT,33学习交流PPT,大鼠慢性胃溃疡模型,34,学习交流,PPT,大鼠慢性胃溃疡模型34学习交流PPT,35,学习交流,PPT,35学习交流PPT,第 三 节 急性和慢性肝损伤动物模型,36,学习交流,PPT,第 三 节 急性和慢性肝损伤动物模型 36学习交流,常用的肝损伤物质,四氯化碳,D-半乳糖胺,硫代乙酰胺,刀豆蛋白A,37,学习交流,PPT,常用的肝损伤物质四氯化碳37学习交流PPT,一、四氯化碳急性肝损伤模型,38,学习交流,PPT,一、四氯化碳急性肝损伤模型38学习交流PPT,CCl,4,在肝内经,NADPH,和肝微粒体细胞色素,P450,混合功,能氧化酶的作用，生成活泼的,三氯甲基自由基,（,CCl,3,）和,氯,自由基,（,Cl,3,） 。,这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合，引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化，导致膜结构和功能完整性的破坏，肝细胞损伤坏死；,三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性，使,Ca,2+,内流增加，从而引起细胞中毒死亡；,三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键，损害线粒体使,NADH,及,ATP,在肝内生成减少，脂肪酸氧化受抑制，影响肝脏能量生成障碍，并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积。,造模机制,CCl,4,急性肝损伤,模型,39,学习交流,PPT,CCl4在肝内经NADPH和肝微粒体细胞色素P4,常用实验动物,CC l,4,致急性肝损伤所需剂量和用法,动物,(CCl,4,),剂量 用法 形成肝损伤,(ml/kg,体重,),所需时间,0.5% 10,颈背部皮下注射,1,次 约,24h,小鼠,0.1% 10,腹腔注射,1,次 约,24h,0.2% 10,于,1,、,4,、,7,日各灌胃,1,次 末次后,12,24h,25% 5,皮下注射,1,次,18d,大鼠,25% 5,皮下注射,2,次,间隔,4,日,18d,15% 1,每隔,3,日灌胃,1,次，共,3,次 末次后,16h,家兔,50% 0.5,皮下注射,1,次,，共,3,次,47d,33% 1.5,隔日灌胃,1,次，共,2,次,7,d,CCl,4,急性肝损伤,模型,40,学习交流,PPT,常用实验动物CC l4致急性肝损伤所需剂量和用法动物,1. 根据所用,CCl,4,剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不同,；,2. 一般在给予,CCl,4,后,1624 h血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性升高，并能反映肝损伤的程度,；,3. 形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性。,结 果,CCl,4,急性肝损伤,模型,41,学习交流,PPT,1. 根据所用CCl4剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不同,1. 根据所用,CCl,4,剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不同,；,2. 一般在给予,CCl,4,后,1624 h血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性升高，并能反映肝损伤的程度,；,3. 形态学上表现为,肝小叶中央区坏死和脂肪变性。,结 果,CCl,4,急性肝损伤,模型,42,学习交流,PPT,1. 根据所用CCl4剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不同,43,学习交流,PPT,43学习交流PPT,44,学习交流,PPT,44学习交流PPT,CCl,4,急性肝损伤,模型,45,学习交流,PPT,CCl4急性肝损伤模型45学习交流PPT,1,CCl,4,肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型，造模方法简单，成功率高，重复性好，价格低廉。,2,CCl,4,剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。,3,CCl,4,是无色澄清的有毒液体，难溶于水，一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度。,模型评价与注意事项,CCl,4,急性肝损伤,模型,46,学习交流,PPT,1CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型，造模方法简单,四氯化碳的配制,CCl,4,常配成乳剂使用，如需配成,10%,乳剂，,可取,5ml,植物油和,5g,阿拉伯胶，放在乳钵中研,匀，再加纯,CCl,4,10ml,研匀，然后加蒸馏水,10,15ml,调成乳状，最后加蒸馏水使体积至,100ml,，,用前摇匀。,47,学习交流,PPT,四氯化碳的配制47学习交流PPT,4,用,CCl,4,复制肝损伤模型的主要缺点是，不同动物个体肝损伤的程度差异较大。,小鼠,接受,CCl,4,后肝脏病理学改变与血清,ALT,等生化指标改变的相关性不如,大鼠好,。,5,CCl,4,可从呼吸道、皮肤吸收，对人体有毒性，注意防护。,模型评价与注意事项,CCl,4,急性肝损伤,模型,48,学习交流,PPT,4用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是，不同动物个体肝损伤,病毒性肝炎模型（,HBV,）,全球因乙肝死亡,100,万,/,年，居第,7,位。我国,30,万,49,学习交流,PPT,病毒性肝炎模型（HBV）全球因乙肝死亡100万/年，居第7位,50,学习交流,PPT,50学习交流PPT,乙肝病毒（,HBV,）的特性,（,1,）,HBV,具有顽强的抵抗力：,对热、对低温、对干燥、对紫外线及一般浓度的化学消毒剂，都能耐受；在零下,20,度时可存活,20,年；在,37,度时可存活,7,天。,（,2,）,HBV,的嗜肝性：,PreS1,和,S2,特异识别肝细胞表面受体,（,3,）严格的种属特性：,到目前为止，只有人、黑猩猩、长臂猿、狒狒对,HBV,易于感染,51,学习交流,PPT,乙肝病毒（HBV）的特性（1）HBV具有顽强的抵抗力：对热,structural maintenance of chromosomes,，,Smc5/6,Decorsire A,et al,. Nature. 2016 Mar 17;531(7594):386-9.,Hepatitis B virus encodes the regulatory HBx protein whose primary role is to promote transcription of the viral genome, which persists as an extrachromosomal DNA circle in infected cells.,52,学习交流,PPT,structural maintenance of chro,目前唯一的,HBV,自然感染动物模型,HLA-I,分子和,HBV,的,CTL,多肽表位与人类有重叠，可用于研究,HBV,感染的,CTL,应答,价格昂贵，存在伦理学限制,大猩猩（,Gorilla,）,53,学习交流,PPT,目前唯一的HBV自然感染动物模型大猩猩（Gorilla）53,树鼩（,Treeshrew/Tupaia belangeri,）,与松鼠大小相近，与灵长类动物亲缘关系较近,可被,HBV,感染，但感染率极低。将,HBsAg,和,HBeAg,阳性患者血清,0.5ml,经股静脉接种。幼年和围生期树鼩感染率较高,成本低、操作方便、伦理限制弱,2012,年树鼩肝细胞发现有,HBV,和丁肝病毒的共受体：钠离子,-,牛磺胆酸共转运多肽（,sodium taurocholate cotransporting peptide,，,NTCP,）,Yan H,. J Virol. 2013 Jul;87(14):7977-91,.,54,学习交流,PPT,树鼩（Treeshrew/Tupaia belangeri）,鸭（,Duck,）,采用肌肉注射、静脉注射、腹腔甚至肝内注射、鸭胚静脉注射等方式将,DHBV,注射到鸭体内，感染率比较高。,可用来研究,HBV,表面受体、病毒复制和基因突变；研究病毒持续存在和清除机制，药物筛选等,成本低、操作方便、伦理限制弱，与人的亲源关系远，研究成果的实际转化受限,Zhang YY, Front Med. 2014 Jun;8(2):129-34.,Mason WS. Cold Spring Harb Perspect Med. 2015 Apr 1;5(4).,55,学习交流,PPT,鸭（Duck）采用肌肉注射、静脉注射、腹腔甚至肝内注射、鸭胚,旱獭（,Woodchuck,）,56,学习交流,PPT,旱獭（Woodchuck）56学习交流PPT,小鼠（,mouse,）,采用高压水动力法向小鼠尾静脉注射,HBV,质粒,DNA,，适合研究,HBV,变异株的生物学特性,研究针对,HBV,的免疫应答，免疫调节、天然免疫等；建立可持续感染模型,+,Iannacone M, Cold Spring Harb Perspect Med. 2015 Aug 20;5(11).,57,学习交流,PPT,小鼠（mouse）采用高压水动力法向小鼠尾静脉注射HBV质粒,第 四 节 脂肪肝和肝硬化动物模型,58,学习交流,PPT,第 四 节 脂肪肝和肝硬化动物模型58学习交流PPT,脂肪肝模型,NAFLD,（,n,on,a,lcoholic,f,atty,l,iver,d,isease,）特殊品系动物,1,、,ADK,（,/,）小鼠：,2002,年美国苏黎士大学,Boison,所发现建立。胚胎期发育正常，于出生后,4,天即发生肝细胞小泡性脂肪变性，并于,14,天内死于脂肪肝。,2,、,FLS,小鼠模型 ：,1999,年日本,Soga,等利用近亲繁殖的方法建立。自发形成脂肪肝，不伴有肥胖和糖尿病。,3,、,JVS,小鼠模型：,1996,年,Kuwajima M,等发现幼年内脏脂肪变小鼠（,juvenile visceral steatosis mouse,，,JVS,小鼠）存在原发性肉毒碱缺乏，使脂肪酸转运入线粒体的过程受阻，脂肪酸在肝细胞浆内积聚。,4,、,ArKO,小鼠：,Australia,亨利医学研究院,Robert,等建立。芳香酶,Cyp9,（摧化,C19,类固醇转化为,C18,雌激素）基因敲除小鼠不能合成内源性雌激素，无论雌性或雄性鼠，腹腔内脂肪细胞的体积和数量增加。,ArKO,小鼠肝脏具有特征性的大量脂肪滴积累。,59,学习交流,PPT,脂肪肝模型NAFLD（nonalcoholic fatty,5,、,BHE,大鼠：,Berdanier CD1991,年发现的一种生后,300,天自发形成糖耐量异常，导致高脂血症、脂肪肝，但无肥胖的特殊种系。,6,、,PBB/Ld,小鼠 ：,Hunt CE1976,年发现，随成熟期的成长自发形成特征性的脂肪组织细胞结构增加、血清免疫反应性胰岛素增加、糖耐量减低、脂肪肝和高脂血症。为研究成年起始肥胖的一个代表小鼠品系。,7,、,Zucker,大鼠（,fa/fa rat,）和,ob/ob,小鼠（,ob/ob mice,）：,遗传性食欲抑制激素,leptin,的基因缺乏鼠，可发生高胰岛素血症、胰岛素抵抗而自发形成糖尿病、肥胖和脂肪肝。,60,学习交流,PPT,5、BHE大鼠： Berdanier CD1991年发现的一,肝纤维化,肝纤维化是指各种致肝脏损伤因素长期反复作用于肝脏，引起肝细胞变性、坏死和炎症，在修复过程中导致,ECM,异常增多和过度沉积的病理过程。,肝纤维化的形成，主要是由于肝星状细胞激活，,ECM,成分生成过多，降解相对不足，胶原等,ECM,在肝内大量沉积所致。,61,学习交流,PPT,肝纤维化 肝纤维化是指各种致肝脏损伤因素长期,病因与分类,病毒性肝纤维化,血吸虫性肝纤维化,酒精性肝纤维化,胆汁性肝纤维化,代谢性肝纤维化,中毒性肝纤维化,营养不良性肝纤维化,心源性肝纤维化,四氯化碳诱发,62,学习交流,PPT,病因与分类病毒性肝纤维化四氯化碳诱发62学习交流PPT,肝纤维化与肝硬化的区别？,63,学习交流,PPT,肝纤维化与肝硬化的区别？63学习交流PPT,肝纤维化与肝硬化的区别？,肝细胞弥漫性,变性、坏死,肝内纤维组织增生,肝细胞结节状再生,这三种,病变反,复交错,进行,肝内,血循环改建,假小叶,形成,肝,硬,化,64,学习交流,PPT,肝纤维化与肝硬化的区别？ 肝细胞弥漫性 肝内纤维组织增生 肝,四氯化碳肝纤维化肝硬化模型,如果长期反复多次给予CCl,4,，可导致肝内纤维增生，逐渐形成肝硬化。,造模机制,65,学习交流,PPT,四氯化碳肝纤维化肝硬化模型 如果长期,1,皮下注射,40%50% CCl,4,植物油溶液，首次,5 ml/kg体重，以后2 ml/kg体重，每周2次，共10周。动物自由饮水进食。,2制备肝脏组织石蜡切片，HE和胶原纤维染色，进行病理学检查。,操作方法,CCl,4,肝纤维化肝硬化,模型,66,学习交流,PPT,1皮下注射40%50% CCl4植物油溶液，首次5 ml,该模型较为可靠，复制时间较短，肝纤维化进展稳定，适合于肝纤维化发生、发展过程的动态观察和研究，是目前国内外常采用的动物模型。,模型评价,CCl,4,肝纤维化肝硬化,模型,67,学习交流,PPT,该模型较为可靠，复制时间较短，肝纤维,第2周,：肝小叶中央区出现片状肝细胞变性坏死，未见明显纤维组织增生。,第,4周,：除肝细胞变性坏死外，肝内开始形成较薄的纤维间隔。,第,6周,：肝脏纤维间隔进一步增厚，有假小叶形成。,第,8周,：肝组织正常结构破坏，形成厚的纤维间隔，并分割形成假小叶。,实验中大鼠成活率在,60%左右。,结 果,CCl,4,肝纤维化肝硬化,模型,68,学习交流,PPT,结 果CCl4肝纤维化肝硬化模型68学习交流PPT,参与肝纤维化的细胞,?,肝星状细胞,库普弗细胞,内皮细胞,Pit,细胞,肝细胞,69,学习交流,PPT,参与肝纤维化的细胞?肝星状细胞69学习交流PPT,形态学观察：可使用各种胶原纤维染,色，并可做图象分析；,血清胶原代谢指标检测,如,P,III,P,、,HA,、,FN,等。,检测指标,CCl,4,复合因素,模型,肝组织中相关基因表达，如胶原等,70,学习交流,PPT,形态学观察：可使用各种胶原纤维染血清胶原代谢指标检测,坏死后性肝硬化,71,学习交流,PPT,坏死后性肝硬化71学习交流PPT,A,：正常肝小叶,(Mallory,染色,),；,B,，,C,：肝硬化,(Masson trichrome),72,学习交流,PPT,A：正常肝小叶72学习交流PPT,第 五 节 胰腺炎动物模型,73,学习交流,PPT,第 五 节 胰腺炎动物模型73学习交流PPT,引起胰腺自身消化 其他酶反应,引起胰蛋白酶被激活的原因：,（,1,）胆汁反流；,（,2,）胰液分泌亢进；,（,3,）病毒感染、外伤、药物等造成腺泡的损伤。,胆汁和肠液,中的肠激酶,激活,发病机制,胰蛋白酶原,胰蛋白酶,74,学习交流,PPT,胆汁和肠液激活发病机制胰蛋白酶74学习交流PPT,急性胰腺炎模型,急性胰腺炎的主要表现为胰腺呈炎症水肿、出血和坏死。,临床表现为突然发作的上腹部剧烈疼痛并可出现休克。,急性胰腺炎,75,学习交流,PPT,急性胰腺炎模型 急性胰腺炎的主要表现为胰腺呈炎症水,急性胰腺炎模型,牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法,急性胰腺炎,76,学习交流,PPT,急性胰腺炎模型牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法 急性胰腺炎76学习,早期牛磺胆酸钠可直接导致胰腺腺泡细胞或小导管壁的细胞溶解，进一步的损害可能是胆盐激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，产生腺泡自身消化。,采用胰管逆行注射法诱发动物急性胰腺炎，是根据胰管、胆管共同通路和胆汁反流理论，模拟人类胆源性胰腺炎的发病机制,造模机制,急性胰腺炎,77,学习交流,PPT,造模机制急性胰腺炎77学习交流PPT,正常情况下主胰管的压力高于总胆管，胆汁不会进入胰管。但当胆总管阻塞时，胆道内的胆汁可被压入主胰管，引起急性胰腺炎。,大鼠的胆管和胰管为共同开口的管道，解剖上称为胆胰管，从胆胰管上分出,68,支胰管的分支进入胰腺实质。,生理解剖特点,急性胰腺炎,78,学习交流,PPT,正常情况下主胰管的压力高于总胆管，胆汁不会进入胰管。但当胆总,大鼠实验前禁食不禁水,12h，3%戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉。,上腹正中切口进入腹腔，提起胃和十二指肠，显露出胰腺，辨认胆胰管走向，于肝门处用微型无损伤动脉夹夹闭胆总管，以防药液逆流进入肝脏。,用4号钝针头朝胰腺方向穿刺十二指肠前壁，在其浆膜下潜行通过十二指肠乳头穿入胆胰管，用手指固定针头，缓慢（约2min）注入3.5%或5%牛磺胆酸钠溶液1ml/kg体重。,300350gWistar,或,SD,大鼠,操作方法,3.5%,或,5%,牛磺胆酸钠,急性胰腺炎,79,学习交流,PPT,大鼠实验前禁食不禁水12h，3%戊巴比妥钠（40mg/kg）,4.另一种穿刺方法是，用,4号针头紧贴胆胰管汇入十二指肠处，自肠外穿刺胆胰管。,5.注射完毕拔除针头后继续按住穿刺处约,1min。检查无漏胆，逐层关腹。,6.假手术组仅翻动胰腺和十二指肠后关腹。,7.术后,15,h处死动物，解剖时肉眼观察胰腺大体变化。取胰腺等组织，,10%中性缓冲甲醛液固定，常规制备石蜡切片，在光镜下观察胰腺等脏器的改变。取血测定血清淀粉酶水平。,操作方法,急性胰腺炎,80,学习交流,PPT,4.另一种穿刺方法是，用4号针头紧贴胆胰管汇入十二指肠处，自,术后,15 h血清淀粉酶水平明显升高。,肉眼观察，胰腺充血肿胀，包膜紧张，出现不同程度出血坏死，腹腔内可见血性腹水，胰腺周围大网膜和肠系膜出现淡黄色的皂化斑。胃肠道明显水肿，肾脏明显增大，颜色晦暗。,光镜检查，于术后,15 h可见胰腺组织大片出血、凝固性坏死及脂肪坏死，坏死区之间有大量中性粒细胞和单核细胞浸润，表现为急性出血坏死性胰腺炎。,结 果,急性胰腺炎,81,学习交流,PPT,术后15 h血清淀粉酶水平明显升高。结 果急性胰腺炎,本模型在病因、发病机制及胰腺病变等方面与人类急性胰腺炎相似，是目前被公认的、比较常用的复制急性胰腺炎的方法。,通过改变注射速度、注射持续时间、所用牛磺胆酸钠的浓度或剂量可控制胰腺病变的程度，操作简单，造模成功率较高，重复性较好，适合于评价药物对急性胰腺炎的防治效果。,胰腺病变程度及动物死亡率与所用牛磺胆酸钠的浓度呈正相关，随着所用牛磺胆酸钠浓度的提高，胰腺损害逐渐加重。,除胰管逆行注射牛磺胆酸钠外，还可注射自体胆汁、胆汁酸、胰酶等诱发急性胰腺炎。,模型评价,急性胰腺炎,82,学习交流,PPT,本模型在病因、发病机制及胰腺病变等方面与人类急性胰腺炎相似，,急性胰腺炎模型,(,一,),牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法,（二）牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射法,急性胰腺炎,83,学习交流,PPT,急性胰腺炎模型(一) 牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法 （二）,急性胰腺炎模型,(,一,),牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法,（三）大剂量,L-,精氨酸分次腹腔注射法,（二）牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射法,急性胰腺炎,84,学习交流,PPT,急性胰腺炎模型(一) 牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法 （三）,造模原理,大剂量,L-,精氨酸能减少多胺的合成，抑制核酸和蛋白质的合成，而胰腺细胞的蛋白质合成最为活跃，故极易受损。,与氧自由基及细胞因子的作用有关。,急性胰腺炎,85,学习交流,PPT,造模原理大剂量L-精氨酸能减少多胺的合成，抑制核酸和蛋白质的,血尿淀粉酶、血清脂肪酶、淀粉同工酶等,形态学,生化,：注射后,12h,，血清淀粉酶、脂肪酶明显升高，,24h,升高最明显，,48h,开始下降，,72h,接近正常。,大体检查,：注射后,12h,，胰腺轻度充血水肿；,24h,后充血水肿明显，,48h,胰腺出现坏死，胰腺周围脂肪皂化，伴有血性腹水；,72h,胰腺坏死明显，胰腺组织变薄。,光镜检查,：注射后,12h,，胰腺轻度充血水肿，,24h,明显充血，,48h,胰腺实质大片凝固性坏死，间质炎细胞浸润，,72h,胰腺组织模糊。,指标检测,结 果,急性胰腺炎,86,学习交流,PPT,血尿淀粉酶、血清脂肪酶、淀粉同工酶等生化：注射后12h，血清,本模型制备方法简单，重复性小，损伤小，病变在各部位较一致，与人类急性坏死性胰腺炎在病程及病理改变相似，是研究急性胰腺炎发病机制和防治措施较为理想的模型。,腹腔注射后，胰腺病变逐渐加重，其特点是胰腺组织的坏死十分明显，而出血少见。,L-,精氨酸的剂量十分关键，应先摸索剂量。当单次注射剂量大于,400mg/100g,体重时，动物多在数小时内死亡，而剂量小于,400mg/100g,体重时，胰腺病变不明显。,用成年雄性昆明种小鼠分两次腹腔注射,L-,精氨酸，也可复制急性坏死性胰腺炎。,模型评价与注意事项,急性胰腺炎,87,学习交流,PPT,本模型制备方法简单，重复性小，损伤小，病变在各部位较一致，与,急性胰腺炎模型,(,一,),牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法,（三）大剂量,L-,精氨酸分次腹腔注射法,（二）牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射法,（四）,超大剂量雨蛙素大鼠、小鼠模型,（五）,乙硫氨酸饮食法,急性胰腺炎,88,学习交流,PPT,急性胰腺炎模型(一) 牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法 （三）,89,学习交流,PPT,89学习交流PPT,急性胰腺炎,90,学习交流,PPT,急性胰腺炎90学习交流PPT,91,学习交流,PPT,91学习交流PPT,92,学习交流,PPT,92学习交流PPT,白藜芦醇对,L-,精氨酸所致急性胰腺炎小鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响,注：,A. TUNEL,染色图,(100),；,B.,凋亡指数；*,P0.05,与,Con,组比较；,#P0.05,与,AP,组比较（,n=5,）,93,学习交流,PPT,白藜芦醇对L-精氨酸所致急性胰腺炎小鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影,谢 谢,！,94,学习交流,PPT,谢 谢 ！94学习交流PPT,