生物实验室常用试剂的配制课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,生物实验室常用试剂的配制,一、检验酸碱性的试剂,1.,酚酞,试液 取,0.1,酚酞，溶解在,100mL6090%,的乙醇溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。,2.,麝香草酚酞,(,百里酚酞,),试液 把,0.1g,白色的麝香草酚酞溶解在,100mL90%,乙醇里制得。当,pH,值由,9.410.6,时，颜色为无色至蓝色。,3.,溴甲酚紫,指示剂 将,0.1g,溴甲酚溶于,9.25mL,的,0.02mol/L,氢氧化钠溶液中，加蒸馏水稀释至,250mL,制得。当,pH,值由,6.26.8,时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点在,pH6.7,。,二、定性鉴定某些物质的试剂,1.,鉴定葡萄糖的试剂,(1),班氏,(,Benedict,),试剂,a.,在,600mL,蒸馏水中溶解,173g,柠檬酸钠和,100g,无水碳酸钠，冷却后稀释到,850mL,。,.,生物,1,b.,在,100mL,热蒸馏水中溶解,17.4g,无水硫酸铜。冷却后稀释到,150mL,。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。,(2),裴林,氏,(,Fehlings Solution,),试剂,a.,取,35g,硫酸铜溶解在,400mL,蒸馏水里，加蒸馏水到,500mL,。,b.,取,85g,氢氧化钾,(,或,70g,氢氧化钠,),和,175g,酒石酸钾钠，溶解在,400mL,蒸馏水里，加水馏水到,500mL,。,上述两种溶液耍分别保存，使用时再等量地混和并搅拌。如溶液里有葡萄糖，加等量裴林试剂，煮沸，会产生红色的氧化亚铜沉淀。,2.,鉴定淀粉用的,碘液,取,2g,碘化钾，溶解在,10mL,蒸馏水中，再加,1g,碘，待溶解后用蒸馏水稀释到,300mL,。即成碘液。溶液在光亮处容易变成氢碘酸，须保存在棕色玻瓶里。因为,I,2,，不易溶于水，当加入,KI,后可大大增加,I,2,的溶解度。,.,b.在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水,2,3.,鉴定蛋白质用的,双缩脲,试剂 分别配制,10%,氢氧化钠溶液和,1%,硫酸铜溶液，待用。在,3,毫升待测液中加入,1mL10%,氢氧化钠溶液和,1,滴,1%,硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。,4.,鉴定脂肪的试剂,苏丹,IV,溶液的配制：取,0.2g,苏丹,IV,，放入无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。过滤后倒迸试剂瓶内密闭保存备用。,苏丹,溶液的配制：,0.1g,苏丹,粉末加入,95%,乙醇,100mL,待全部溶解后便可使用。,5.,鉴定,DNA,的,二苯胺,试剂,A,液,:1.5g,二苯胺溶于,1OOmL,冰醋酸中，再加,1.5mL,浓硫酸用棕色瓶保存,B,液,:,体积分数为,0.2%,的乙醛溶液。,实验前，将,0.1mL,的,B,液加入到,10mL,的,A,液中，现配现用。,6.,鉴定二氧化碳的试剂,(1),石灰水,取饱和石灰水澄清液，密闭瓶内备用。,(2),氢氧化钡,(Ba,(,OH,),2,),在蒸馏水中加氧化钡。氢氧化钡遇到二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊。,.,3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂 分别配制10,3,(3),溴代麝香草酚蓝,溶液 取,0.1,溴代麝香草酚蓝，溶解在,100mL,蒸馏水里，滴入少量,0.1%,氢氧化钾溶液，使它成为碱性溶液而呈蓝色。本溶液,pH,值变化范围是,6.0(,黄,),至,7.6(,蓝,),。待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。,三、分离液,1.,用于分离肌纤维的试剂,(1),马克凯郎,(,MaecalIum,),氏液 也叫硝酸甘油溶液，取,1,份浓硝酸、,2,份甘油、,2,份水混合制得。适于分离横纹肌和心肌组织。,(2)30%,氢氧化钾,溶液或,30%,氢氧化钠,溶液 肌肉小块浸泡时间,0.5,一,1,小时。,2.,用于分离神经细胞的试剂,(1),甲醛生理盐水,溶液 称取,58.44g,氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到,1000mL,加入,2g40%,甲醛溶液，可得甲醛生理盐水溶液。这种溶液也是很好的上皮细胞分离液，既分离迅速，又能保护纤细的上皮细胞纤毛。在上述溶液里，分离小肠和气管上皮组织需,2,小时，口腔和皮肤上皮组织需,3,天。,.,(3)溴代麝香草酚蓝溶液 取0.1溴代麝香,4,(2),硼酸生理盐水,溶液 在,0.75%,生埋盐水中加入硼酸，使成为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织。,3.,用于分离神经纤维的试剂,硝酸银溶液,:,取,0.5G,硝酸银，溶解在,100mL,水中即成。,4.,用于分离植物根尖细胞的试剂,(1),盐酸乙醇溶液,在,1,份,95%,乙醇中徐徐加入,1,份浓盐酸，即成盐酸乙醇溶液。密闭保存。,(2)4%,盐酸溶液。,5.,用于细胞质壁分离的试剂,(1)30%,蔗糖液,；,(2)5%,氯化钠,溶液；,(3)5%,硝酸钾,溶液；,(4)24%,尿素溶液；,(5)1mol/L,氯化钙,溶液。,四、染色剂 有些动植物组织和大多数细胞及细胞器是无色透明的，必须经染色剂染色，才能在显微镜下观察清楚，常用染色剂的制法和适用范围见,122,表。,.,(2)硼酸生理盐水溶液 在0.75%生埋盐水中,5,五、干燥剂,干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用，物理吸附作用或两种作用兼有。选用干燥剂应注意其本身和被干燥的物质有无化学作用，以免引起被干燥物质的破坏或吸收。常用干燥有,:,1,、,氧化钙,(cao),白色固体，碱性氧化物，可干燥氧、氨、氨、胺等气体，不可用来干燥酸性气体，如二氧化碳、氯化氢、硫化氢。,2,、,碱石灰,白色固体，呈碱性。它由氧化钙粉末加入氢氧化钠溶液，经充分混和后置铁皿中于,200,250,下干燥而成。可以干燥氨、胺等气体。常用于避免水或二氧化碳进入反应系统的装置中。,3,、,硅胶,半透明，内表面很大的多孔性固体，对水有强烈的吸附作用。可干燥氧、氮、氨、胺等气体。常用于干燥器中。含有钴盐的硅胶，叫变色硅胶，干燥时呈蓝色，吸水后呈粉红色。硅胶吸附水后可以在,120,烘干再用。,其他的干燥剂还有,五氧化二磷、氯化钙、硫酸钙、氧化铝、氧化钡、硫酸镁、硫酸钠、碳酸钾和高氯酸镁,等。,.,五、干燥剂.,6,六、生理盐水,1.,各类动物实验常用的生理盐水 两栖类生理盐水是,0.65%,的氯化钠溶液,;,鸟类是,0.75%,的,;,哺乳类和人是,0.9%,。,2.,任氏,(Ringers),生理盐水 先把,6.5g,氯化钠、,0.14g,氯化钾、,0.2g,碳酸氢钠和,0.01g,磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混和后用蒸馏水稀释到,980mL,。取,0.12g,氯化钙溶解在,20mL,的蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液中，边滴边搅拌，以免产生不溶性的磷酸钙沉淀。常用于变温动物，如两栖类。,3.,乐氏,(,Lockes),生理盐水 先把,9g,氯化钠、,0.42g,氯化钾、,0.10.3g,碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混和后加蒸馏水到,980mL,。再取,0.24g,氯化钙溶解在,20mL,蒸馏水中，逐滴加入上述溶液中，常用于恒温动物，如哺乳类。,七、固定液和保存液 固定液能把有生命的材料迅速杀死，并尽可能保持它原有的形态和结构，具有防腐和保存和作用。,1.,甲醛也叫,福尔马林,液,(Fomalin),，固定材料常用,5%,甲醛溶液，保存生物标本常用,4,一,5%,的，消毒常用,3%,的。市售的是,40%,甲醛溶液，加,7,、,9,、,12,倍水分别稀释成,5%,、,4%,、,3%,甲醛,.,六、生理盐水.,7,溶液。甲醛溶液无色透明，有刺激性气味，味灼烈，是良好的动、植物材料固定液，有强烈的杀菌能力，穿透力大,(,仅次于乙酸,),，防腐性强，固定速度快，效果好。缺点是固定后可使材料少许膨胀，有浓度过高，能使材料发硬发脆，因此对于精细的解剖标本，最好用甲醛与甘油、乙醇、石炭酸等混和使用。,2.,乙醇,(C,2,H,5,OH),有强烈的杀菌作用，渗透力较大，但固定效果不及甲醛溶液。可使蛋白质凝固，并有较强的脱水作用，因此，单纯用乙醇固定的材料会产生硬化和收缩，而使体积变小。对含水量多的材料，固定应从低浓度开始，逐步转入高浓度。从经济和效果来考虑，乙醇宜与甲醛等固定液混和使用。常用的乙醇固定液或保存液浓度都是,70%,左右。,3.,乙酸,带有刺激味的无色液体，纯乙酸在,16.7,以下凝固，故名冰乙酸。乙酸固定液的常用浓度是,0.30.5%,。乙酸能凝固细胞核内的蛋白质,(,核蛋白,),，对染色质或染色体的固定，染色较好。用乙酸溶液固定材料，可使细胞膨胀和防止收缩，组织也不会硬化。它常跟乙醇、甲醛、铬酸等易引起硬变的收缩的液体组成混合固定液，效果较好。,.,溶液。甲醛溶液无色透明，有刺激性气味，味灼烈，是良好的动、,8,4,、,乙酸乙醇,溶液 由冰乙酸,1,份与纯乙醇,3,份混和而成，适用于动、植物组织和细胞核内,DNA,的测定。动物的组织固定需,1.5,3,小时后，即移入纯乙醇中,15,分钟，再透明。根尖固定需,15,分钟，花药固定需,1,小时。,八、脱水剂 材料中含有水分，就会降低透明度。脱水剂有利于材料透明，也有利于材料的永久保存。脱水剂的种类很多、如,乙醇、丙酮、甘油、正丁醇,和,叔丁醇,等。中学生物实验最常用的乙醇，而甘油则常用于菌类和藻类等。在用乙醇脱水时，为了避免材料萎缩、僵硬，应从低到高使用不同的浓度，逐渐脱水，有时还用无水乙醇脱水。一般组织,(,除神经组织，柔软组织外,),可从,70%,乙醇开始经,80%,、,95%,、,100%,乙醇，使它逐步脱水。对一些柔软组织如胚胎组织、低等无脊椎动物组织，要从,50%,或,30%,或,20%,乙醇开始，否则组织收缩较严重。,九、透明剂 材料经脱水后，须经透明剂透明，方能浸蜡包埋或在树胶中封藏。其目的在于使组织中的乙醇或丙酮被透明剂所替代，使石蜡能很顺利进进入组织和增强组织的折光系数，便于显微镜的观察，并能和封藏剂混和进行封藏。透明剂的种,.,4、乙酸乙醇溶液 由冰乙酸1份与纯乙醇3份混和而成，,9,类很多，常用的有,二甲苯、甲苯、苯、氯仿,和,香柏油,。如二甲苯是应用最广的廉价透明剂。易溶于乙醇又能溶解石蜡，能与封减剂树胶混和，但不能和水混合，透明力强，作用较快。用二甲苯透明时，先经纯乙醇和二甲苯等量混合浸,12h,，以置换材料中的乙醇，冉置于纯二甲苯中透明，全部时间不宜超过,3h,。如是染色后的制片，在二甲苯中经过,510min,即可透明。,十、封藏剂 材料经脱水，透明或染色后，须经封藏才能长期保存。,1.,加拿大树胶,半透明的固体树脂，溶于二甲苯或苯里，用以封片透明度很好，干后坚硬牢固，可长期保存。,2.,甘油,临时封片常用的封藏剂，材料先用,10%,的甘油浸润数日，待水分蒸发，浓缩成纯甘油时，再加盖玻片。,3.,松香,取纯松香将其磨碎，放入烧杯内，置于,80,100,处加热,1,2h,后，待松香熔解时其中挥发性杂质和气泡外逸，加入约为松香重量一半的二甲苯，搅拌均匀即成松香封藏剂，本品原料易得，效果与加拿大树胶相同。缺点是材料不纯或调制不好时，易发生结晶和褪色。,.,类很多，常用的有二甲苯、甲苯、苯、氯仿和香柏油。如二甲苯是,10,十一、消毒剂 优良的消毒剂应具有杀菌力强、性质稳定，易于溶解和穿透力大的特性，此外还要求对人和动物组织的毒性低，对器具衣服没有腐蚀性，且价格低廉。,1.,乙醇,它可使蛋白质脱水和变性，故有消毒和防腐的作用。,70%,乙醇的杀菌力最强，可在,35mim,内杀死细菌。且对人毒性小，适用于皮肤及器械等消毒。,95100%,乙醇能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使乙醇分子不易继续透入，杀菌能力反而减弱。,2.,碘酒,它是碘和碘化钾的乙醇溶液，有稀碘酒和浓碘酒两种。市售的是,2%,的稀碘酒，在,10min,内能杀死细菌及芽抱，可用于消毒皮肤，但对皮肤的刺激性很大，故用后应以,70%,乙醇拭净。浓碘酒多用于手术后创面消毒。自配碘酒时，可取,5g,碘化钾和,7g,碘溶解在,5mL,蒸馏水中，再加无水乙醇到,1OOmL,。,3.,高锰酸钾,强氧化剂，遇到有机物即放出新生态氧而使有机物氧化，其杀菌作用强于过氧化氢。高浓度时有刺激及腐蚀作用；,0.1%,水溶液可作创口或粘膜洗涤剂，使皮肤消毒,;25%,水溶液能在,24h,内杀死细菌芽孢。本液在空气中易分解，失去氧,.,十一、消毒剂 优良的消毒剂应具有杀菌力强、,11,化能力，要现配现用。,4.,甲醛,溶液 它常用来杀灭细菌、病毒。通常以,2,5%,溶液消毒器具。本品又可作实验室熏蒸消毒。,5.,漂白粉,本品含有效氯为,25,30%,，有强杀菌力，能消毒、防腐、防臭和溶解坏死组织，但作用时间短。,十二、麻醉剂 它可分挥发性,(,如乙醚,),和非挥发性,(,如氨基甲酸乙酷,),两类。前者作用时间短麻醉深度容易掌握，动物麻醉后也容易苏醒；后者作用的时间比较长，用法简单，但麻醉后苏醒较慢，不大容易掌握麻醉的深浅程度。在中学生物实验申，使用较多的是乙醚和氨基甲酸乙酷两种。,1.,乙醚,无色液体，味灼烈，有强挥发性和易燃性。乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹。乙醚吸入法是最常用的麻醉方法。,2.,氨基甲酸乙脂,它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉末，其水溶液是比较温和的麻醉药，安全度大，多数实验动物都可使用，更适用于小动物。,.,化能力，要现配现用。.,12,作为麻醉剂，氨基甲酸乙脂常配成,20%,水溶液注射入动物体内。剂量是，狗、猫、兔直肠灌注,1.5g,g,体重，皮下静脉或腹腔注射,0.751g/Kg,体重。蛙类,2g/Kg,体重，由背部淋巴囊注射。作静脉注射时必须溶在生理盐水,(,哺乳类用,8.59.0%),中，配成,10%,的溶液，每,Kg,体重注射,10mL,。,十三、防腐剂 防腐剂多用于剥制标本，现将其中的防腐剂分述如下,:,如最简单的无毒防腐剂是用硼酸粉,130g,、明矾粉,60g,和樟脑粉,60g,，三种粉末混和后撤在动物皮内，效果一般，但使用安全。,十四、密封剂 它常用来封标本瓶口。,1,石蜡,取石蜡,(,熔点,52)1,份,+,松香,1,份,+,甘油数滴，溶化后趁热使用。,2,赛潞咯,取赛潞咯，如碎、废乒乓球剪碎后，浸入在乙醚、丙酮或氯仿等有机溶剂中加盖后静置二三天，等溶化成糊状时，涂在瓶口和瓶塞外面，形成不透气的薄膜。,.,作为麻醉剂，氨基甲酸乙脂常配成20%水溶液注射入动物体内,13,十五、培养液和培养基,1,植物无土栽培完全培养液配方：,(1),配方一,:,称取硝酸钙,0.812g,、硝酸钾,0.506g,、磷酸二氢钾,0.136g,、硫酸镁,0.120g,、酒石酸铁,0.005g,，把这些盐类溶解在少量水里，稀释到,1000mL,。,(2),配方二,:,称取,1g,硝酸钙、,0.25g,磷酸二氢钾、,0.25g,硫酸镁和,0.25g,硝酸钾。把这些盐类先分别用少量水溶解，然后混和在一起用水稀释到,1000mL,最后加,1,滴,1,氯化铁溶液。,2,配制缺氮、缺磷和缺钾的不完全营养液：,(1),缺氮培养液：硫酸钙,052g,、磷酸二氢钾,025g,、硫酸镁,025g,、氯化钾,008g,、氯化铁微量。,(2),缺磷培养液：硫酸钙,05g,、硝酸铵,016g,、硝酸镁,025g,、硝酸钾,020g,、氯化铁微量。,(3),缺钾培养液：硫酸钙,034g,、硝酸铵,024g,、硫酸镁,0.25g,、磷酸氢钙,0.17g,、氯化铁微量。,以上,3,种不完全营养液都用水稀释到,1000mL,。,.,十五、培养液和培养基.,14,2,土壤浸出液 把肥沃的土壤放在等量清水申，用玻璃棒充分搅拌后静置，使土壤沉淀，取上清液用滤纸过滤即得。,3,牛肉膏蛋白胨培养基,(,用于细菌培养,),牛肉膏,3g,，蛋白胨,10g,，,NaCl5g,，琼脂,15g,，水,1000mL,，,PH7476,。,4,高氏,1,号培养基,(,放线菌培养,),可溶性淀粉,20g,，,kno,3,1g,，,NaCl0.5g,，,K,2,HP0,4,3H,2,O05g,，,MgS0,4,7H,2,O05g,，,FeS0,4,7H,2,O001,，水,1000mL,，,pH74,一,76,。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。,5,马丁氏,(Martin),培养基,(,用于从土壤中分离真菌,) K,2,HPO,4,1g,，,MgS0,4,7H,2,O0.5g,，蛋白陈,5g,，葡萄糖,10g,，,1/30000,孟加拉红水溶液,100mL,，水,900mL,，自然,pH,，,121,湿热灭菌,30min,，待培养基融化后冷却至,5560,时加入链霉素,(,含量,30,g/mL),。,6,马铃薯培养基,(PDA)(,用于霉菌或酵母菌培养,),马铃薯,(,去皮,)200g,，蔗糖,(,或葡萄糖,)20g,，琼脂,1520g,水,1000mL,，,PH,值自然。配制万法如下,:,马铃薯去皮，切成小块，煮沸,30min,，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖及琼脂溶化后再补足水至,.,2土壤浸出液 把肥沃的土壤放在等量清水申，用玻璃棒充,15,1000mL,。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。,7,乳酸菌培养基,(,用于乳酸发酵,),肉膏,5g,，酵母膏,5g,，蛋白胨,10g,，葡萄糖,10g,，乳糖,5g,，,NaCl5g,，水,1000mL,，,pH6.8,，,12l,湿热灭菌,20min,8,酒精发酵培养基,(,用于酒精发酵,),蔗糖,10g,，,MgSO,4,7H,2,O 05g,，,NH,4,NO,3,0.5g,，,20,豆芽汁,2mL,，,KH,2,PO,4,05g,，水,100mL,，自然,pH,。,9,无氮琼脂培养基,(,用于从土壤中分离自生固氮菌,),葡萄糖,(,或蔗糖,)10g,，磷酸氢二钾,02g,、氯化钠,02g,、硫酸镁,0.2g,、硫酸钾,02g,、碳酸钙,50g,，琼脂,20g,，蒸馏水,1000mL,10,花粉萌发培养基 蔗糖,10g,、硼酸,lmg,、琼脂,05g,、水,90mL,，放入烧杯中，在,100,水浴中溶化，冷却后加水至,100mL,备用。,.,1000mL。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。.,16,