VMP1regulatescelldeathVMP1（膜泡蛋白1）与结肠直肠癌细胞的ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,文章名：,VMP1 related autophagy and apoptosis in colorectal cancer cells: VMP1 regulates cell death,杂志名：,Biochemical and biophysical research,communications,发表时间：,2013,任安然,文章名：VMP1 related autophagy and,1,VMP1 related autophagy and apoptosis in colorectal cancer cells: VMP1 regulates cell deathVMP1（膜泡蛋白1）与结肠直肠癌细胞的细胞自噬和细胞凋亡有关：VMP1调控细胞死亡,任安然,2011级生物技术,VMP1 related autophagy and apo,2,VMP1,VMP1( Vacuole membrane protein 1)小鼠泡膜蛋白,功能,：,蛋白分泌、细胞器官形成,、,多细胞发育过程,、,细胞学过程（包括细胞膜运输、生长增殖、自噬等）,、,调控细胞粘附能力,、,增强胞内小泡的形成,。,在进化中高度保守,，,是一种关键的,自噬调控蛋白,，,过量表达能引起细胞死亡。,VMP1VMP1( Vacuole membrane pro,3,Background,胰腺癌细胞,：,VMP1的表达与细胞自噬和细胞凋亡的调控呈,正相关性,。,肝癌细胞,：,VMP1调控肝癌细胞的粘附能力，体内外上调VMP1的表达可显著,抑制肝癌的侵袭转移,。,Background胰腺癌细胞：VMP1的表达与细胞自噬和细,4,Overview,Results：,VMP1增量表达,细胞自噬,VMP1减量表达,细胞凋亡,Methods：,电子显微镜、免疫荧光，免疫印迹、,免疫共沉淀、si,RNA等,；,血清,缺失,饥饿培养和雷帕霉素处理诱导细胞自噬,OverviewMethods：电子显微镜、免疫荧光，免疫印,5,Introduction,不断的化疗,导致,许多的癌细胞产生了,化学抵抗力,，细胞自噬是导致结肠直肠癌细胞产生化学抵抗力的一个机制。,ATGs,(autophagy-related genes),:,调控细胞自噬的特殊基因，,如,VMP1基因。VMP1和BECLIN1结合形成复合物，就能够,正向调控自噬体的形成,。,BECLIN1蛋白,可以调控自噬前体的形成，引导相关蛋白定位于自噬体膜。,Introduction不断的化疗导致许多的癌细胞产生了化学,6,1. 饥饿诱导的细胞自噬与结肠直肠癌细胞中上调VMP1的表达有关,为了确定,饥饿培养,或,雷帕霉素培养,会诱导结肠直肠癌细胞的细胞自噬，分别用无血清培养基和雷帕霉素处理,癌,细胞，并用,透射电镜(TEM),进行观察。,Fig. 1A,：根据细胞,中自噬体的观察，饥饿和雷帕霉素都,可,强烈诱导,细胞自噬。,1. 饥饿诱导的细胞自噬与结肠直肠癌细胞中上调VMP1的表达,7,Fig. 1B and C,：,检测LC3蛋白水平。饥饿培养,的时间,和雷帕霉素处理,浓度,与LC3-II /LC3-I比例的上升,正相关,，,即,处理时间越长、浓度越高，细胞自噬水平越高。,Tips,：,微管相关蛋白LC3是细胞自噬功能的标志物,，,自噬形成时，,胞,浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉C末端的一小段多肽，转变,为,（自噬体）膜型（即LC3-II）,，,LC3-II可以通过Western blotting检测。,Fig. 1B and C：检测LC3蛋白水平。饥饿培养的时,8,Fig. 1D and E,：随着饥饿处理时间和雷帕霉素处理浓度的增加，VMP1蛋白表达量也在增加。,Result of step 1 ：,细胞自噬可以由饥饿培养和雷帕霉素处理引发，并且VMP1的表达与细胞自噬,水平正相关,。,Fig. 1D and E：随着饥饿处理时间和雷帕霉素处理浓,9,2. 通过十字孢碱（staurosporine）的诱导，VMP1在细胞凋亡中的表达量降低,十字孢碱,可以促进细胞凋亡，形成稳定的细胞凋亡模型。,Fig. 2A,：,断裂的半胱天冬酶3和PARP（两者是细胞凋亡的诱导物）在有十字孢碱处理之后被激活。,Fig. 2B,：,随着十字孢碱的处理,时间增加,，VMP1蛋白水平降低。但BECLIN1,的表达,水平,没有,变化,，说明VMP1在调控细胞凋亡中可能是一个独立的调控因子,2. 通过十字孢碱（staurosporine）的诱导，VM,10,Fig. 2C and D,：,高剂量的十字孢碱可以使断裂的半胱天冬酶3,量升高，即,细胞凋亡水平升高。,也,可以使VMP1的表达水平,下调,更加明显。,Result of step 2 ：,VMP1可能在结肠直肠癌细胞的细胞凋亡过程中发挥一定作用，并且是负调控作用。,Fig. 2C and D：高剂量的十字孢碱可以使断裂的半胱,11,3. 当VMP1被抑制时，饥饿培养会导致细胞死亡,利用,siRNA,技术，敲,除结肠直肠,癌细胞中的VMP1基因,Fig.,3,A,and 3B,：,VMP1的基因被敲除掉了,。,3. 当VMP1被抑制时，饥饿培养会导致细胞死亡利用siRN,12,Tips,：etoposide（依托泊甙）和staurosporine（十字孢碱）均可促进细胞凋亡。,Fig. 3C and,3,D,：,纵坐标表示细胞凋亡百分率,。,敲除掉VMP1基因的细胞，对细胞凋亡的诱导剂更敏感,（,细胞凋亡率更高,）,。,Tips：etoposide（依托泊甙）和staurospo,13,Fig. 3E,：,敲除掉VMP1基因的细胞，在营养缺乏的情况下，,生存能力,显著,降低,。纵坐标,为,细胞生存率。,Fig. 3F and,3,G,：,LC3在敲除,VMP1,基因的癌细胞中含量降低，这也就说明了细胞自噬水平降低，,即,VMP1与细胞自噬水平正相关,。,Fig. 3E：敲除掉VMP1基因的细胞，在营养缺乏的情况下,14,Result of step 3 ：,VMP1在结肠直肠癌细胞系可能是一种抗细胞凋亡因子，VMP1在结肠直肠癌细胞中有促生存作用,且具有促进细胞自噬的作用,。,Result of step 3 ：VMP1在结肠直肠癌细胞,15,4. VMP1是通过结合BECLIN1而引发细胞自噬的,Tips,：,BECLIN1-Class III PI3K复合物被认为是自噬细胞形成的开始，BECLIN1和VMP1的结合在其他的癌细胞系中已经被证明。,Fig. 4AD,：,免疫共沉淀实验。与正常培养的癌细胞相比，在饥饿培养或雷帕霉素处理的细胞中，VMP1-BECLIN1复合蛋白水平升高。证明了,VMP1与BECLIN1结合促进细胞自噬,。,4. VMP1是通过结合BECLIN1而引发细胞自噬的Tip,16,Results,1,.,VMP1是结肠直肠癌细胞系进行细胞自噬的正调控因子，VMP1通过与BECLIN1结合形成复合物，诱导自噬体形成，促进细胞自噬；,2,.,VMP1在结肠直肠癌细胞系中起到了促进其生存的作用；,3,.,VMP1是结肠直肠癌细胞发生细胞凋亡的负调控因子。,Results1. VMP1是结肠直肠癌细胞系进行细胞自噬的,17,Personal viewpoints,VMP1在不同癌细胞中的作用效果不同，物质？机制？,VMP1对细胞自噬和细胞凋亡的调控是否还有其他途径？,VMP1在动物细胞中的过表达+敲除实验,Personal viewpointsVMP1在不同癌细胞中,18,VMP1regulatescelldeathVMP1（膜泡蛋白1）与结肠直肠癌细胞的ppt课件,19,