资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,免疫组化结果判断及常见问题分析,免疫组化结果判断及常见问题分析,1,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,2,肝脏:,CK8,理想着色,胆管上皮细胞强阳性,,肝细胞呈不同层次阳性。,肝脏:CK8理想着色,胆管上皮细胞强阳性,,3,pan CK,(,AE1/AE3,) 在肝脏理想的染色,采用了热修复。,肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。,pan CK(AE1/AE3) 在肝脏理想的染色,,4,一、特异性染色的判断,1.特定的定位,细胞阳性,根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型,或胞核型,间质阳性,表现为细胞外着色,局限性或弥散性,2.染色的不均一性,阳性细胞的染色分布不均,片状或点状散在分布,染色强弱不等,颜色深浅反映抗原量的多少,3.,排除人为造成的非特异性染色,切片的折叠、刀痕,色素沉着,组织细胞坏死。,4.,颗粒性显色,DAB,显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。,一、特异性染色的判断1.特定的定位,5,免疫组化标准化照片,CK10,CD44v6,ER,免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER,6,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,7,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,8,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,9,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,10,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,11,合格,的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提,不合格,的免疫组化染色切片容易导致误判,合格的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提不,12,C-erbB-2,优,良,中,差,C-erbB-2优良中差,13,4,3,2,1,ER,4321ER,14,子宫内膜,PR,染色,修复不足 子宫内膜,PR,染色,修复良好,PR,子宫内膜PR染色,修复不足 子宫内膜PR,15,编号,阳性片,待检片,阴性对照,结论,1,2,3,4,5,操作失误,抗体失效,非特异性着色,阳性片不含靶抗原,待检片不含定位抗原,待检片含定位抗原,二、染色结果的判断,编号阳性片待检片阴性对照结论1 操作失误,抗体失效二、,16,PCNA,S-P,400,S-P,400,1-,day CM,4-,day CM,阳性强度,2010视野下,随机选取5个视野,测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。,三、结果分析,PCNA S-P400S-P4001-day CM4-,17,P53,阳性细胞百分比,计数100个瘤细胞,其中阳性细胞的比例:,5% (),5%30% (),30%50% ( ),50% ( ),P53阳性细胞百分比,18,PCNA,Barnes,法,A:,瘤细胞显色有无及深浅,0(不着色) 1(浅黄色),2(棕黄色) 3(棕褐色),B:,显色细胞的比例,1(1%10%),2(11%50%),3(51%80%),4(80%),评分=,AB,0,分:阴性,14分:弱阳性,4分:强阳性,PCNABarnes法,19,胶原染色,阳性面积百分比,4010视野,选取5个视野,计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。,胶原染色阳性面积百分比,20,CD34,Weidner,法(,MVD,计数),孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。,低倍镜下找到组织内密度最高区域。,4010视野下计数微血管数目。,CD34Weidner法(MVD计数),21,K-ras,VEGF,K-rasVEGF,22,附:定量分析,图象处理系统,1、图象处理,:,利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。,1)“狭义”指消除图象的模糊不清部分,校正畸变。,2)“广义”包括对图象的结构分析,提取特征进行测量。,附:定量分析图象处理系统,23,2、图象处理系统组成,图象输入(显微镜、扫描仪),图象处理运算(病理图文分析软件),图象、数据输出,2、图象处理系统组成,24,3、图象处理系统功能,几何形态学定量分析,细胞核、浆的大小、面积、核浆比; 细胞分布密度、个数; 血管、腺体的面积、密度;间质的面积,免疫组织化学分析,按着色灰度分类,计算阳性、阴性细胞的面积含量,DNA,倍体分析,计算正常细胞及肿瘤细胞,DNA,含量,给出倍体参数、,DNA,参数分布直方图,AgNOR,分析,颗粒分析:数目、大小、面积、比例,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,25,免疫组化结果判断及常见问题的分析-课件,26,四、免疫组化异常着色及对策,1.非特异性着色及其对策,非特异性着色原因,对策,操作过程冲洗不充分,每步冲洗,35min,内源性过氧化物酶,3,H,2,O,2,封闭,内源性生物素,使用生物素阻断试剂盒阻断,电荷吸附,非免疫动物血清封闭,抗体不纯,采用单克隆抗体,切片制片不当,改善取材和制片,加试剂后切片干燥,防止切片干燥,四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着,27,内源性生物素,肾小管,内源性生物素肾小管,28,内源性生物素,淋巴结转移性甲状腺腺癌,内源性生物素淋巴结转移性甲状腺腺癌,29,蜕膜组织部分胞核,PR,阳性,血管内红细胞,过氧化物酶,显色,蜕膜组织部分胞核PR阳性,血管内红细胞过氧化物酶显色,30,嗜酸性粒细胞中,细胞色素,显色,嗜酸性粒细胞中细胞色素显色,31,吞噬细胞内,含铁血黄素,吞噬细胞内 含铁血黄素,32,坏死组织着色:,AE1/AE3,坏死组织着色:AE1/AE3,33,坏死组织着色,坏死组织着色,34,交叉反应:乳腺,ki-67,组织细胞胞浆着色,交叉反应:乳腺ki-67组织细胞胞浆着色,35,黑色素瘤,细胞内含,黑色素,,呈紫黑色,,HE,染色,黑色素瘤,细胞内含黑色素,呈紫黑色,HE染色,36,灶状着色:机械原因着色,灶状着色:机械原因着色,37,Cyclin D1,套细胞淋巴瘤,全片着色,Cyclin D1 套细胞淋巴瘤全片着色,38,全片着色,全片着色,39,边缘着色,边缘着色,40,“阴阳脸”着色,“阴阳脸”着色,41,气泡,气泡,42,非特异性着色原因,对策,操作过程冲洗不充分,每步冲洗,35min,内源性过氧化物酶,3,H,2,O,2,封闭,内源性生物素,使用生物素阻断试剂盒阻断,电荷吸附,非免疫动物血清封闭,抗体不纯,采用单克隆抗体,切片制片不当,改善取材和制片,加试剂后切片干燥,防止切片干燥,非特异性着色及其对策,非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗35min内,43,无信号片,CD30,无信号片CD30,44,2. 染色的假阴性及其对策,染色假阴性原因,对策,组织处理不当(固定、浸蜡),改善条件,重取材,一抗与二抗种属连接错误,确定抗体种属无误,抗体失效,不得使用过期的试剂盒,显色系统不相适配,更换适配的显色系统,操作不当,遗漏重要步骤,严格遵守操作规程,2. 染色的假阴性及其对策染色假阴性原因对策组织处理不当(固,45,无色或浅色片,MCL,理想的,CD5,着色。所有的瘤细胞都着色很强。散在的,T,细胞着色比瘤细胞深。,MCL,的,CD5,染色不足,(,一抗浓度太低,),。,MCL,瘤细胞几乎都没有着色。,无色或浅色片MCL理想的 CD5着色。所有的瘤细胞都着色很强,46,
展开阅读全文