中药注射液局部用药安全性评价

中 药 注 射 剂 局 部 用 药 安 全 性评 价 一 、 过 敏 反 应过 敏 反 应 是 一 种 变 态 反 应 ,即 一 型 超 敏 反 应 .当 过 敏 原 (包 括 抗 原 与 半 抗 原 ,如 异 种 血 清 ,微生 物 代 谢 产 物 ,花 粉 ,某 些 药 物 或 食 物 等 )进 入机 体 时 ,可 以 通 过 特 殊 机 制 ,刺 激 机 体 产 生 抗 体 .这 种 抗 体 附 着 在 肥 大 细 胞 上 ,此 后 当 又 有 同 样抗 原 进 入 机 体 时 ,即 与 抗 体 相 反 应 ,使 肥 大 细 胞释 放 出 组 胺 等 物 质 . 过 敏 原 刺 激 机 体 产 生 IgEIgE与 肥 大 细 胞 、 嗜 碱 细 胞 结 合致 敏 靶 细 胞脱 颗 粒 释 放 活 性 介 质 （ 如 组 胺 ， 白 三 烯 等 ）毛 细 血 管 扩 张 ， 通 透 性 增 加 等全 身 反 应 ， 呼 吸 道 反 应 ， 皮 肤 反 应 致 敏 阶 段发 敏 阶 段 芦 丁 提 取 物 过 敏 性 试 验实 验 目 的 :观 察 动 物 重 复 接 触 受 试 药 物 后 所 产 生 的过 敏 反 应 情 况 .动 物 ： 豚 鼠 （ 250 300g)分 组 :阴 性 对 照 组 (生 理 盐 水 ) 阳 性 对 照 组 (5%新 鲜 蛋 清 ) 芦 丁 提 取 物 组 (供 试 品 ) 实 验 步 骤致 敏 反 应 ： 取 豚 鼠 2只 ， 隔 天 肌 内 注 射 芦 丁 提取 物 0.5ml， 连 续 3次 ， 并 行 阴 性 对 照 组 和 阳 性对 照 组 各 为 2只 豚 鼠 。激 发 反 应 ： 于 首 次 注 射 后 的 第 14天 ， 腹 腔 注 射芦 丁 提 取 物 2-3ml， 观 察 注 射 后 有 无 用 爪 搔 鼻 、喷 嚏 、 竖 毛 、 抽 搐 、 呼 吸 困 难 、 大 小 便 失 禁 、休 克 和 死 亡 等 反 应 。 10分 钟 内 先 后 出 现 上 述体 征 ， 30分 钟 内 死 亡 。 过 敏 性 实 验 评 价 标 准 二 、 芦 丁 提 取 物 刺 激 性 反 应化 学 刺 激物 理 刺 激炎 症 等 其 它 刺 激 刺 激 性 实 验实 验 目 的 :观 察 动 物 接 触 芦 丁 提 取 物 后 所 产 生的 刺 激 反 应 情 况 .动 物 :首 选 成 年 健 康 家 兔 (2Kg)分 组 :阴 性 对 照 组 (生 理 盐 水 ) 阳 性 对 照 组 (1%酒 石 酸 锑 钾 注 射 液 ) 芦 丁 提 取 物 给 药 组 股 四 头 肌 法 股 四 头 肌 在 后 肢 大 腿 的 前 面 ， 正 中 为 股直 肌 ， 股 直 肌 之 下 为 股 中 间 肌 ， 股 直 肌 之 外 为股 外 侧 肌 ， 股 直 肌 之 内 侧 为 股 内 侧 肌 ， 四 块 肌肉 合 称 股 四 头 肌 。 实 验 步 骤取 健 康 家 兔 两 只 ， 分 别 于 一 侧 后 肢 的 股 四 头 肌处 注 射 芦 丁 提 取 物 提 取 物 3ml， 于 另 一 侧 后 肢的 对 应 部 位 注 射 同 容 积 的 灭 菌 生 理 盐 水 作 为 对照 。 进 针 角 度 30-45度 为 宜 。 48h后 试 验 家 兔 健康 如 常 。 将 家 兔 由 耳 缘 静 脉 注 射 空 气 处 死 ， 解剖 取 出 股 四 头 肌 ， 纵 向 切 开 ， 观 察 注 射 部 位 肌肉 组 织 的 反 应 。并 行 阳 性 对 照 组 ： 1%酒 石 酸 锑 钾 注 射 液 刺 激 性 实 验 评 价 标 准将 肌 肉 组 织 的 反 应 分 为 六 级 ：0级 （ -） ： 注 射 供 试 品 部 位 的 肌 肉 组 织 与 对 照 部 位 肌 肉 组 织 任 何 差异 。1级 （ +） ： 注 射 供 试 品 部 位 的 肌 肉 组 织 有 充 血 ， 直 径 在 0.5cm以 下 。2级 （ +） ： 注 射 供 试 品 部 位 的 肌 肉 组 织 有 红 肿 充 血 ， 直 径 在 1cm左右 。3级 （ +） ： 注 射 供 试 品 部 位 的 肌 肉 组 织 有 红 肿 、 发 紫 、 光 泽 消 失 、可 见 坏 死 点 。4级 （ +） ： 注 射 供 试 品 部 位 的 肌 肉 组 织 有 红 肿 、 发 紫 、 光 泽 消失 、 坏 死 范 围 直 径 达 0.5cm左 右 。5级 （ +） ： 注 射 供 试 品 部 位 肌 肉 的 各 项 反 应 更 重 ， 有 大 片 坏 死 。 刺 激 性 实 验 评 价 标 准凡 两 只 家 兔 的 平 均 反 应 级 数 在 2以 下 者 可 供 肌肉 注 射 之 用 ； 平 均 反 应 级 数 超 过 3者 不 能 供 肌肉 注 射 之 用 ； 平 均 反 应 级 数 在 2-3之 间 者 可 进行 复 试 或 结 合 其 他 项 目 考 虑 其 临 床 试 用 问 题 。凡 刺 激 性 试 验 不 能 达 到 肌 肉 注 射 要 求 的 知 己 制剂 一 般 也 不 宜 供 皮 下 注 射 之 用 。 静 脉 注 射 制 剂 的 安 全 性 评 价 静 脉 注 射 制 剂 根 据 我 国 药 政 部 门 的 规 定 ， 要 必须 进 行 常 规 安 全 性 评 价 ， 主 要 包 括 血 管 刺 激 性试 验 、 体 外 溶 血 性 试 验 、 过 敏 性 试 验 、 热 原 试验 等 。 血 管 刺 激 性 试 验实 验 目 的 :为 确 保 注 射 液 制 剂 安 全 性 ， 检 查 制剂 经 多 次 静 脉 注 射 后 对 血 管 刺 激 性 反 应 。 动 物 :家 兔分 组 :供 试 品 组 生 理 盐 水 对 照 组 实 验 步 骤家 兔 8只 ， 禁 食 16小 时 ， 随 机 分 成 2组 ， 每 组 4只 。 设 供试 品 组 与 生 理 盐 水 对 照 组 。 兔 固 定 于 兔 箱 ， 药 液 通 过消 毒 恒 速 注 射 器 与 小 儿 头 皮 针 注 入 耳 缘 静 脉 内 。 每 天给 药 1次 ， 连 续 3天 。 实 验 给 药 期 间 ， 观 察 动 物 全 身 反 应 、 血 管 及 周 围 组 织的 刺 激 性 反 应 。组 织 病 理 学 检 查 于 末 次 给 药 完 毕 后 两 天 ， 剪 下 各兔 进 针 点 前 方 的 耳 静 脉 及 其 周 围 组 织 一 段 （ 长 约 1.5cm）固 定 于 福 尔 马 林 生 理 盐 水 溶 液 中 ， 送 病 理 学 检 查 。 图1 0.9%氯化钠注射液对照组兔耳静脉血管（HE 3.310） 图2 银杏叶提取物注射液组兔耳静脉血管与对照组比较无明显改变（HE 3.310） 三 、 体 外 溶 血 试 验实 验 目 的 :为 确 保 注 射 液 制 剂 安 全 性 ， 检 查 制剂 ,有 无 溶 血 和 红 细 胞 凝 集 等 反 应 。动 物 :家 兔供 试 品 ： 芦 丁 提 取 物 实 验 步 骤2%兔 红 细 胞 生 理 盐 水 混 悬 液 制 备 ： 取 兔 1只 ，颈 动 脉 放 血 ， 将 血 盛 于 放 有 玻 璃 珠 的 烧 杯 内 ，轻 轻 摇 荡 约 10分 钟 ， 除 去 纤 维 蛋 白 ， 用 生 理盐 水 反 复 洗 3-4次 ， 将 所 得 红 细 胞 按 其 容 积 ，用 生 理 盐 水 稀 释 成 2%的 混 悬 液 。 实 验 步 骤试 管 7支 ， 编 号 后 依 次 排 列 于 试 管 架 上 ， 按 表格 分 别 加 入 2%兔 红 细 胞 混 悬 液 和 生 理 盐 水 ， 混匀 后 置 于 37C水 浴 中 30min， 然 后 向 各 管 内 加入 不 同 量 的 芦 丁 提 取 物 注 射 液 ， 第 6管 为 阴 性对 照 ， 第 7管 加 入 蒸 馏 水 作 为 阳 性 对 照 。 各 管轻 轻 摇 匀 后 ， 置 37C恒 温 水 浴 中 。 开 始 每 隔 15分 钟 观 察 1次 ， 1小 时 后 每 隔 1小 时 观 察 1次 ， 共观 察 4 小 时 （ 双 管 法 测 定 ） 。 试管号 1 2 3 4 5 6 7 2%兔红细胞混悬液(ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 生理盐水(ml) 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.5(蒸馏水)芦丁提取物注射液(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 结果 +注：“”表示阴性反应；“+”表示阳性反应。 实 验 步 骤 评 价 标 准全 溶 血 :溶 液 澄 明 ,红 色 ,管 底 无 红 细 胞 残 留 。部 分 溶 血 :溶 液 澄 明 ,红 色 或 棕 色 ,底 部 尚 有 少量 红 细 胞 残 留 。 镜 检 红 细 胞 稀 少 或 变 形 。不 溶 血 ： 红 细 胞 全 部 下 沉 ， 上 层 液 体 无 色 澄 明 。镜 检 红 细 胞 不 粘 集 。凝 集 ： 虽 不 溶 血 ， 但 出 现 红 细 胞 凝 集 ， 经 振 摇后 不 能 分 散 ， 或 出 现 药 物 性 沉 淀 。