血液标本采集和制片培训课件

血液血液标本采集和制片本采集和制片一、医学检验发展史一、医学检验发展史 基础。基础。医学检验奠基人医学检验奠基人 1673年列文霍克年列文霍克(ALeeuwenhoek)发明显发明显微镜微镜 他用自制显微镜发现了红细胞、细菌及原他用自制显微镜发现了红细胞、细菌及原虫等。虫等。2血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l一、医学检验发展史一、医学检验发展史 l临床医学检验临床医学检验-实验诊断学实验诊断学 l 临床检验基础临床检验基础l 临床生化检验临床生化检验l 临床免疫检验临床免疫检验l 临床微生物检验临床微生物检验l 临床血液检验临床血液检验l 临床输血检验临床输血检验l 临床分子诊断学检验临床分子诊断学检验临临床床医医学学检检验验3血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l二、二、医学检验现状和特点医学检验现状和特点 医学检验是一门具有多学科理论交叉、医学检验是一门具有多学科理论交叉、应用性强、发展迅速的应用技术学科，是应用性强、发展迅速的应用技术学科，是医学各科中发展最快的专业之一。医学各科中发展最快的专业之一。4血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l（一）现状（一）现状l1、临床检验已进入仪器化时代：临床检验已进入仪器化时代：电子技术和计算机在医学检验中得到电子技术和计算机在医学检验中得到了广泛应用，基础医学的重大进展了广泛应用，基础医学的重大进展促进促进了实验诊断迅猛发展。了实验诊断迅猛发展。标本用量少标本用量少、减少标本的转运环节、减少标本的转运环节、更快速、更灵活、易操作、信息量大、易更快速、更灵活、易操作、信息量大、易质控、报告及时。质控、报告及时。但是许多手工操作仍然是基础但是许多手工操作仍然是基础,是金指是金指标标,可校准仪器可校准仪器,是质量控制重要方法是质量控制重要方法。l二、临床检验现状和特点二、临床检验现状和特点5血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l 2、工作任务的转变：、工作任务的转变：（一）现状（一）现状 1、临床检验已进入仪器化时代：、临床检验已进入仪器化时代：由简单的为临床提供检验结果由简单的为临床提供检验结果发展发展检验技术检验技术+参与临床咨询参与临床咨询+临床诊断临床诊断+治疗治疗及预防工作及预防工作 3、运用循证医学理论、运用循证医学理论为临床提供合为临床提供合理的检验项目。理的检验项目。4、检验医师与临床医师共同制定诊断、检验医师与临床医师共同制定诊断和疗效判断标准。和疗效判断标准。6血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l1、检验操作的自动化：、检验操作的自动化：l2、检验方法的标准化：、检验方法的标准化：l3、检验技术的现代化：流式细胞术、生、检验技术的现代化：流式细胞术、生物芯片、分子杂交、物芯片、分子杂交、PCRl4、检验试剂的商品化：检验试剂的商品化：l5、计量单位的国际化：、计量单位的国际化：l6、质量管理的全程化：检测前、中、后、质量管理的全程化：检测前、中、后l（二）医学检验的特点（二）医学检验的特点7血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l7、生物安全的严格化：标本有潜在危险、生物安全的严格化：标本有潜在危险l 严格遵循严格遵循“实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求”、“临床实验室废物处理原则。临床实验室废物处理原则。l8、检验人员的合格化：、检验人员的合格化：l（二）医学检验的特点（二）医学检验的特点l 能做能做能质控能质控 能维护能维护 能分析能分析 期待检验医师能遵照和参与国家、国际期待检验医师能遵照和参与国家、国际标准化检验的实践活动，精通先进检验操作标准化检验的实践活动，精通先进检验操作方法，并能与临床医生进行交流。方法，并能与临床医生进行交流。8血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l三、医学检验的基本任务三、医学检验的基本任务l 运用物理学、化学、生物学、免疫运用物理学、化学、生物学、免疫学、自动化检验等技术，对人体的血液、学、自动化检验等技术，对人体的血液、体液、排泄物、分泌物和脱落细胞等标本体液、排泄物、分泌物和脱落细胞等标本进行实验室检查，以获得病原学、病理学进行实验室检查，以获得病原学、病理学和脏器功能状况等资料，为疾病诊断、治和脏器功能状况等资料，为疾病诊断、治疗、病情观察、预后判断提供依据，并结疗、病情观察、预后判断提供依据，并结合病史、体格检查和其他各种辅助诊断资合病史、体格检查和其他各种辅助诊断资料，进行综合分析，以达到诊断明确、治料，进行综合分析，以达到诊断明确、治疗及时和制定预防措施的目的。疗及时和制定预防措施的目的。9血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l l 临床检验基础临床检验基础：是临床上最常用：是临床上最常用、最最基本的检测方法基本的检测方法，即运用现代分析技术、，即运用现代分析技术、显微镜、物理学、化学、生物学、免疫学、显微镜、物理学、化学、生物学、免疫学、遗传学等技术遗传学等技术对人体血液对人体血液、体液体液、分泌分泌物、排泄物及脱落细胞物、排泄物及脱落细胞等进行检验，等进行检验，以以获得疾病病因、病理变化、器官功能状态获得疾病病因、病理变化、器官功能状态等资料等资料,协助诊断疾病的学科。协助诊断疾病的学科。l 是集微观形态学和宏观理化检验于一是集微观形态学和宏观理化检验于一体综合性学科体综合性学科。10血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述l四、临床检验基础的临床应用四、临床检验基础的临床应用l1、为疾病诊断和鉴别诊断提供客观依、为疾病诊断和鉴别诊断提供客观依据据l2、为疾病疗效观察和预后判断提供动为疾病疗效观察和预后判断提供动态变化依据态变化依据l3、为预防疾病提供检测依据、为预防疾病提供检测依据l4、为健康咨询提供依据、为健康咨询提供依据l5、为科学研究提供基本数据、基本检、为科学研究提供基本数据、基本检验方法和操作技能验方法和操作技能11血液标本采集和制片血液标本采集和制片 概述概述 五、五、学习的基本要求学习的基本要求学习目的：学习目的：1 1、掌握本学科基本技能，用准确、掌握本学科基本技能，用准确 、经济经济 、简便、简便 、快速的检测方法、快速的检测方法获取检获取检测结果测结果 达到协助诊断疾病和预防疾病的达到协助诊断疾病和预防疾病的目的目的 2 2、为探索准确、为探索准确 、经济、经济 、简便、简便 、快、快速的检测方法，培速的检测方法，培养创新能力打下坚实的养创新能力打下坚实的基础。基础。12血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述五、五、学习的基本要求学习的基本要求 1 1、掌握临检的基本理论、掌握临检的基本理论 2 2、掌握各种操作技能、掌握各种操作技能 3 3、掌握方法学评价、掌握方法学评价 4 4、熟悉各项实验的参考区间、熟悉各项实验的参考区间 6 6、加强职业道德培养、加强职业道德培养 必须养成严谨必须养成严谨、细心、细心 、有条不紊、有条不紊 、一丝不苟一丝不苟 、认真负责、实事求是的工作认真负责、实事求是的工作作风作风 ,树立优良的职业道德。树立优良的职业道德。5、熟悉实验项目的临床意义、熟悉实验项目的临床意义13血液标本采集和制片血液标本采集和制片概述概述五、五、学习的要求学习的要求:7、勤学苦练基本技能和具有过硬的形勤学苦练基本技能和具有过硬的形态学本领态学本领,才能胜任工作才能胜任工作,成为一个优秀的检成为一个优秀的检验工作者。验工作者。8 8、上课要同时带理论教材和实验教材。、上课要同时带理论教材和实验教材。9 9、实验课前要求预习实验指导；实验课前要求预习实验指导；不无不无故缺课，故缺课，实验考试不及格不准参加理论考试。实验考试不及格不准参加理论考试。本课程总课时学本课程总课时学128128时时,其中理论其中理论6464学时学时;实验实验6464学时学时 14血液标本采集和制片血液标本采集和制片第一章血液标本采集和血涂片制备 15血液标本采集和制片血液标本采集和制片第一节 血液标本的采集 l一、血标本类型一、血标本类型l（一）（一）全血全血:l 血细胞血细胞+血浆血浆l 静脉全血、动脉全血、毛细血管全血静脉全血、动脉全血、毛细血管全血l（二）血（二）血 浆：浆：l 全血全血血细胞血细胞l（三）血（三）血 清清 ：l 全血全血血细胞纤维蛋白原及其他血细胞纤维蛋白原及其他凝血因子凝血因子 l（四）分离或浓缩的血细胞（四）分离或浓缩的血细胞16血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血标本采集的方法二、血标本采集的方法 第一节 血液标本的采集 皮肤采血皮肤采血 静脉采血法静脉采血法 动动脉采血脉采血采采集集部部位位普通静脉采血普通静脉采血真空采血法真空采血法 17血液标本采集和制片血液标本采集和制片 凡用血量较少凡用血量较少,0.1ml,0.1ml的检验项目，均的检验项目，均可用此法采血。可用此法采血。如：如：手工操作做手工操作做 RBCRBC、WBCWBC、HbHb、PLTPLT等。等。婴幼儿血液分析仪做血常规婴幼儿血液分析仪做血常规第一节 血液标本的采集 二、血标本采集的方法二、血标本采集的方法 （一）皮肤采血（一）皮肤采血(毛细血管采血毛细血管采血)18血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血标本采集的方法、血标本采集的方法 （一）皮肤采血（一）皮肤采血(毛细血管采血毛细血管采血)1 1、采血部位：、采血部位：1 1）、手手指指：WHOWHO推推荐荐以以左左手手中中指指或或无无名指尖内名指尖内侧为宜。宜。婴幼幼儿儿 半半岁以以上上用用手手指指,半半岁以以下用拇指或足底部内、外下用拇指或足底部内、外侧缘 烧伤病病人人 视具具体体情情况况选择皮皮肤肤完完整部位采血或静脉血。整部位采血或静脉血。第一节 血液标本的采集 19血液标本采集和制片血液标本采集和制片（一）皮肤采血：（一）皮肤采血：1 1、采血部位：、采血部位：1 1）手指：）手指：第一节 血液标本的采集 2 2）耳耳垂垂：痛痛感感较轻，操操作作方方便便，适适于于反复采血。反复采血。缺缺陷陷：血血循循环较差差，受受气气温温影影响响较大大，血血细胞胞汁汁数数和和血血红蛋蛋白白浓度度等等结果果静静脉脉血，且冬季波血，且冬季波动幅度幅度较大，已是淘汰。大，已是淘汰。20血液标本采集和制片血液标本采集和制片（一）皮肤采血：（一）皮肤采血：2 2、采血器材、采血器材 （1 1）采血针皮肤采血法）采血针皮肤采血法 1 1）微量吸管：）微量吸管：10ul10ul、20ul20ul刻度。刻度。2 2）采采血血针：用用三三棱棱针或或专用用“采采血血针”，用用前前须高高压或或煮煮沸沸消消毒毒，为为避避免免交交叉叉感感染染应严格实行一人一支吸管和一根针应严格实行一人一支吸管和一根针。目前最好的是激光无痛采血仪。目前最好的是激光无痛采血仪。3 3）消毒用具：）消毒用具：3 3、采血方法：略、采血方法：略第一节 血液标本的采集21血液标本采集和制片血液标本采集和制片（一）皮肤采血：（一）皮肤采血：4 4、注意事、注意事项：(1)(1)采采血血部部位位应应无无水水肿肿、冻冻疮疮、炎炎症症、紫绀、溃疡。紫绀、溃疡。(2)(2)注意消毒及用具一次性使用。注意消毒及用具一次性使用。(3 3)以血液自行流出为佳。可轻以血液自行流出为佳。可轻挤压挤压,切忌用力挤压，以免组织液混入。切忌用力挤压，以免组织液混入。(4 4)采血顺序为：采血顺序为：PLTPLTRBCHbWBC RBCHbWBC DCDC等。等。(5 5)若做出血时间测定若做出血时间测定,需另刺一针，需另刺一针，不能拭去第一不能拭去第一 滴血。凝血时间另外测定。滴血。凝血时间另外测定。第一节 血液标本的采集22血液标本采集和制片血液标本采集和制片第一节 血液标本的采集l激光皮肤采血法激光皮肤采血法l（1 1）器材：激光采血器、一次性激）器材：激光采血器、一次性激光防护罩、微量吸管、消毒用品光防护罩、微量吸管、消毒用品l（2 2）方法：）方法：23血液标本采集和制片血液标本采集和制片第一节 血液标本的采集l激光皮肤采血法激光皮肤采血法l（3 3）注意事项：）注意事项：l禁止在有易燃易爆气体环境中操作，禁止在有易燃易爆气体环境中操作，以免引起爆炸事故；以免引起爆炸事故；l禁止用肉眼观看激光窗口或将激光窗禁止用肉眼观看激光窗口或将激光窗口对准身体其他部位；口对准身体其他部位；l防护罩要紧贴采血部位，以免影响标防护罩要紧贴采血部位，以免影响标本采集效果；本采集效果；l激光采血器的透镜部分应经常清洁。激光采血器的透镜部分应经常清洁。24血液标本采集和制片血液标本采集和制片（二）静脉采血法（二）静脉采血法 1 1、普通静脉采血、普通静脉采血 凡凡需需血血量量较多多（0.2ml0.2ml）的的检验项目目，用用此此采采血血法法，如如：多多项血血细胞胞分分析析、压积、血沉等。血沉等。采采血血部部位位：肘肘前前静静脉脉为主主，亦亦可可用用手手背背部部、手手腕腕部部和和外外踝踝部部静静脉脉。幼幼儿儿用用颈外外静静脉脉采血。采血。第一节 血液标本的采集25血液标本采集和制片血液标本采集和制片（二）静脉采血法（二）静脉采血法 1 1、普通静脉采血、普通静脉采血注意事项注意事项 严格无菌操作，严格无菌操作，止血带压迫时间不超止血带压迫时间不超过过1min1min,抽血时避免气泡。抽血时避免气泡。以检查项目要求选择是否空腹采血。以检查项目要求选择是否空腹采血。出血性疾病要用硅化或塑料注射器和出血性疾病要用硅化或塑料注射器和试管。试管。应拔下注射针头后应拔下注射针头后,将血沿试管壁注将血沿试管壁注入试管。入试管。第一节 血液标本的采集26血液标本采集和制片血液标本采集和制片2 2、真空真空采血法采血法 又又称称负负压压采采血血法法。真真空空采采血血装装置置有有套套筒筒式、头皮静脉式。式、头皮静脉式。封封闭闭式式采采血血无无需需容容器器之之间间转转移移，减减少少了了溶溶血血现现象象，同同时时样样本本转转运运方方便便，避避免免医医患患间间的交叉感染。的交叉感染。根根据据需需要要不不同同，不不同同检检验验项项目目，在在真真空空管上标有不同颜色。管上标有不同颜色。第一节 血液标本的采集27血液标本采集和制片血液标本采集和制片盖子盖子颜色色 添加抗凝添加抗凝剂 注意事注意事项 用用 途途红色色 无无 凝凝块形成形成约需需30min 30min 化学、血清学、血化学、血清学、血库紫色紫色 EDTA EDTA 须颠倒混匀倒混匀6 68 8次次 全血全血细胞胞计数数(CBC)(CBC)淡淡蓝色色 枸枸橼酸酸钠 须颠倒混匀；血液与抗倒混匀；血液与抗 凝血凝血检查(PT(PT、APTTAPTT、凝凝剂比例比例为9:1 9:1 因子因子测定定)绿色色 肝素肝素钠、肝素、肝素锂、根据根据实验需要需要选择不同不同 化学化学 肝素肝素铵 类型的肝素型的肝素灰色灰色 氟化氟化钠、草酸、草酸钾 不能用于其他化学不能用于其他化学检查 葡萄糖、糖耐量、乙醇葡萄糖、糖耐量、乙醇 浓度度黄色黄色 多茴香多茴香脑磺酸磺酸钠 须颠倒混匀倒混匀8 8次次 血培养血培养 (SPS)(SPS)深深蓝色色 无抗凝无抗凝剂或肝素或肝素 化学清化学清洁的的试管管 毒理学、微量金属毒理学、微量金属 钠、EDTAEDTA金黄色金黄色 分离胶凝分离胶凝块激激 须颠倒混匀倒混匀5 5次，使血液次，使血液 化学，不适于血化学，不适于血库 活活剂 与激活与激活剂充分接触。凝充分接触。凝块完完 全形成后离心全形成后离心淡淡绿色色 分离胶肝素分离胶肝素锂 钾测定定桔黄色桔黄色 凝血凝血酶酶 须颠倒混匀倒混匀8 8次次 化学化学黑色黑色 枸枸橼酸酸钠 血液与抗凝血液与抗凝剂比例比例为4:1 4:1 血沉血沉棕色棕色 肝素肝素钠 铅浓度度0.1ug8080草酸酸草酸酸盐可被分解可被分解为碳酸碳酸盐而失效。而失效。三、三、血液标本的抗凝血液标本的抗凝 33血液标本采集和制片血液标本采集和制片 （三）双草酸（三）双草酸盐：草酸：草酸钾+草酸草酸铵 用用途途：草草酸酸钾盐或或钠盐可可使使红细胞胞体体积皱缩（约11%11%）。草草酸酸铵可可使使红细胞胞胀大大。二二者者适适当当混混合合不不影影响响红细胞胞形形态和和体体积如如：红细胞胞比比积，血血细胞胞计数数，网网织红计数等，抗凝以后小数等，抗凝以后小时结果可靠。果可靠。缺缺点点：草草酸酸盐可可引引起起血血小小板板聚聚集集，并并可可影影响响白白细胞胞形形态故故不不适适用用于于血血小小板板计数数和白和白细胞分胞分类计数。数。三、三、血液标本的抗凝血液标本的抗凝 34血液标本采集和制片血液标本采集和制片 （四）肝素：（四）肝素：肝肝素素广广泛泛存存在在于于肺肺、肝肝、脾脾等等几几乎乎所所有有组织的的血血管管肥肥大大细胞胞和和嗜嗜碱碱性性粒粒细胞胞的的颗粒中。粒中。三、三、血液标本的抗凝血液标本的抗凝 35血液标本采集和制片血液标本采集和制片 （四）肝素：（四）肝素：机理：机理：1.1.与与抗抗凝凝血血酶酶(AT-)(AT-)一一起起，在在低低浓度度能能抑抑制制因因子子IXaIXa、和和PF3PF3之之间的的作作用用，阻止凝血阻止凝血酶酶形成。形成。2.2.加加强强抗抗凝凝血血酶酶(AT-)(AT-)灭活活丝氨氨酸蛋白酸蛋白酶酶，从而阻止凝血，从而阻止凝血酶酶形成形成 3.3.抑抑制制凝凝血血酶酶的的自自我我催催化化抑抑制制因因子子的作用。的作用。4.4.高高浓度度时可可阴阴断断凝凝血血酶酶与与纤维蛋蛋白白的反的反应 三、三、血液标本的抗凝血液标本的抗凝 36血液标本采集和制片血液标本采集和制片 （四）肝素：（四）肝素：配配制制：肝肝素素粉粉（每每mgmg含含100100125125单位位），配配成成1g/L1g/L水水溶溶液液取取0.5ml0.5ml置置小小瓶瓶中中，放放37375050烘干，可抗凝血烘干，可抗凝血5ml5ml。三、三、血液标本的抗凝血液标本的抗凝 37血液标本采集和制片血液标本采集和制片三、血液标本的抗凝三、血液标本的抗凝 （四）肝素：（四）肝素：用用途途：肝肝素素具具有有抗抗凝凝能能力力强强，不不影影响响血血细胞胞引引起起溶溶血血等等优点点，为一一种种较好好的的抗抗凝凝剂。红细胞胞计数数，血血红蛋蛋白白测定定，红细胞胞比比积及及多多种种生生化化分分析析。也也是是抗抗血血栓栓药物物之一。之一。缺缺点点：过量量肝肝素素会会引引起起白白细胞胞凝凝集集和和血血小小板板减减少少，故故不不能能用用于于白白细胞胞计数数，血血小小板板计数数。肝肝素素抗抗凝凝血血瑞瑞氏氏染染色色后后背背景景呈呈是深是深兰色，影响色，影响镜检，故也不适于作，故也不适于作DCDC。38血液标本采集和制片血液标本采集和制片三、血液标本的抗凝三、血液标本的抗凝 （五）乙二胺四乙酸（五）乙二胺四乙酸（EDTAEDTA）盐：机机理理:与与血血中中钙离离子子结合合成成螯螯合合物物,阻阻止血液凝固止血液凝固.配配制制：ICSHICSH建建议其其使使用用浓度度为每每毫毫升升血血1.51.52.2mg2.2mg。实验室室常常将将其其配配成成15g/L15g/L，取，取0.5ml1000.5ml100，烘干，可抗凝血，烘干，可抗凝血5ml5ml。39血液标本采集和制片血液标本采集和制片三、血液标本的抗凝三、血液标本的抗凝 用途：适用于多用途：适用于多项血液学血液学检查 血血细胞胞计数（特数（特别是血小板是血小板计数）数）红细胞胞比比积测定定（室室温温下下48h48h内内红细胞比胞比积不改不改变）（五）乙二胺四乙酸（五）乙二胺四乙酸（EDTAEDTA）盐：40血液标本采集和制片血液标本采集和制片三、血液标本的抗凝三、血液标本的抗凝 （五）乙二胺四乙酸（五）乙二胺四乙酸（EDTAEDTA）盐：缺点：缺点：1.1.影影响响血血小小板板聚聚集集和和白白细胞胞吞吞噬噬功功能能，不适于出血凝血不适于出血凝血检查及血小板功能及血小板功能检验。2.2.能能影影响响某某些些酶酶的的活活性性和和抑抑制制红斑斑狼狼疮因因子子，故故不不适适于于制制作作组化化染染色色和和检查红斑狼斑狼疮细胞的血涂片。胞的血涂片。41血液标本采集和制片血液标本采集和制片三、血液标本的抗凝三、血液标本的抗凝 （六）脱（六）脱纤维蛋白法（物理抗凝）：蛋白法（物理抗凝）：方方法法：将将血血液液注注入入有有玻玻璃璃珠珠的的盛盛器器中中不不停停转动，使使纤维蛋蛋白白缠绕凝凝固固于于玻玻璃璃珠珠上，从而阻止血凝固。或用棉上，从而阻止血凝固。或用棉签挠。用用途途：适适用用于于免免疫疫学学检查和和红斑斑狼狼疮细胞胞检查。42血液标本采集和制片血液标本采集和制片l四、血标本的运送、保存与处理四、血标本的运送、保存与处理 l 血标本处理的基本原则血标本处理的基本原则l 把每一分标本当作无法重新获得的把每一分标本当作无法重新获得的唯一标本唯一标本,加以小心运送、保护、保存加以小心运送、保护、保存 、检测和报告；检测和报告；l 要视每一分标本都有传染性要视每一分标本都有传染性,对高对高危标本要注明标识；危标本要注明标识；l 严禁用口吸标本严禁用口吸标本,避免标本污染皮肤避免标本污染皮肤和实验台；和实验台；l 检验完毕检验完毕,标本必须消毒处理标本必须消毒处理,容器容器要消毒、毁型或焚烧。要消毒、毁型或焚烧。43血液标本采集和制片血液标本采集和制片l四、血标本的运送、保存与处理四、血标本的运送、保存与处理 l （一）血液标本检测前预处理（一）血液标本检测前预处理l分离血清、分离血浆、分离血细胞分离血清、分离血浆、分离血细胞l （二）血液标本运送（二）血液标本运送l 遵循：唯一标识原则、生物安全原则、遵循：唯一标识原则、生物安全原则、及时运送原则及时运送原则 44血液标本采集和制片血液标本采集和制片l四、血标本的运送、保存与处理四、血标本的运送、保存与处理 l （三）血液标本拒收（三）血液标本拒收l 溶血、容器不当、标本量不足、转运溶血、容器不当、标本量不足、转运不当、申请单标识不清、标本污染或破损均不当、申请单标识不清、标本污染或破损均要拒收要拒收l （四）血液标本保存（四）血液标本保存l 按要求分为室温保存、冷藏保存、冷按要求分为室温保存、冷藏保存、冷冻保存冻保存l 立即送检标本：血氨、血沉、血气分立即送检标本：血氨、血沉、血气分析酸性磷酸酶、乳酸等。析酸性磷酸酶、乳酸等。l （五）检测后标本处理（五）检测后标本处理l 原则：将危险减至最小、对环境危害原则：将危险减至最小、对环境危害减至最小减至最小45血液标本采集和制片血液标本采集和制片第二节血液标本采集质量保证第二节血液标本采集质量保证l一、采血环境要求与生物安全一、采血环境要求与生物安全l 1 1、环境要求：环境应舒适、宽敞、环境要求：环境应舒适、宽敞、明亮通风、有足够的采血窗口。明亮通风、有足够的采血窗口。l 2 2、生物安全：防止交叉感染，履行、生物安全：防止交叉感染，履行环境消毒。环境消毒。血液标本的采集是分析前质量控制血液标本的采集是分析前质量控制的重要环节之一的重要环节之一46血液标本采集和制片血液标本采集和制片第二节血液标本采集质量保证第二节血液标本采集质量保证l二、标本的采集的一般要求二、标本的采集的一般要求l （一）检验申请单（一）检验申请单l （二）标本采集和处理具体要求（二）标本采集和处理具体要求l 患者告知、患者准备说明书、标本采患者告知、患者准备说明书、标本采集类别和数量、标本采集日期和时间、标集类别和数量、标本采集日期和时间、标本处理要求、标本采集人员、标本采集器本处理要求、标本采集人员、标本采集器材和安全处理。材和安全处理。l （三）标本信息完整性与接收（三）标本信息完整性与接收l 对特殊标本处理、急危重病人标识、对特殊标本处理、急危重病人标识、规定时间内送检、注意物理条件对标本影规定时间内送检、注意物理条件对标本影响、标本归档记录、接收记录等响、标本归档记录、接收记录等47血液标本采集和制片血液标本采集和制片第二节血液标本采集质量保证第二节血液标本采集质量保证l三、血液标本采集及检测结果的影响因素三、血液标本采集及检测结果的影响因素l 1、患者生理状态和饮食的影响患者生理状态和饮食的影响l 标本采集时的活动情况、精神状态、标本采集时的活动情况、精神状态、饮食、吸烟、等都影响结果饮食、吸烟、等都影响结果(见见p12p12表表1 1-5 5)l 、药物对检验结果药物对检验结果影响影响:l 影响反应系统待测成分的物理性质；影响反应系统待测成分的物理性质；l 参与检验化学反应；参与检验化学反应；l 影响机体生理功能和细胞活动的代影响机体生理功能和细胞活动的代谢；谢；l 对器官的药理活性和毒性作用。对器官的药理活性和毒性作用。48血液标本采集和制片血液标本采集和制片第二节血液标本采集质量保证第二节血液标本采集质量保证l3 3、采血操作对检验结果的影响、采血操作对检验结果的影响 l（1）采血的时间采血的时间l 应尽可能上午应尽可能上午9 9时前空腹采血，应尽时前空腹采血，应尽可能检查和治疗前采血可能检查和治疗前采血l（）（）采血部位采血部位l 1)1)皮肤采血：避开炎症、化脓皮肤采血：避开炎症、化脓 、冻伤、冻伤等处；等处；l 2)2)静脉采血静脉采血:选择大而浅表的大血管。选择大而浅表的大血管。49血液标本采集和制片血液标本采集和制片第二节血液标本采集质量保证第二节血液标本采集质量保证l3 3、采血操作对检验结果的影响、采血操作对检验结果的影响 l （3 3）采血体位：直立比仰卧血液浓）采血体位：直立比仰卧血液浓缩，细胞计数和大分子增高。缩，细胞计数和大分子增高。l （4 4）止血带压迫时间：不超过）止血带压迫时间：不超过1min1min，过长将引起血液浓缩，成分改变，影，过长将引起血液浓缩，成分改变，影响结果。响结果。l 50血液标本采集和制片血液标本采集和制片第二节血液标本采集质量保证第二节血液标本采集质量保证l4 4、其他、其他 l （1 1）输液：）输液：l （2 2）避免溶血：）避免溶血：l （3 3）抗凝剂对标本影响）抗凝剂对标本影响l （4 4）低温保存对标本的影响）低温保存对标本的影响 l 血液分析仪测定抗凝血标本不宜低温血液分析仪测定抗凝血标本不宜低温保存，低温可使血液成分及细胞形态发生保存，低温可使血液成分及细胞形态发生变化；室温保存时间不能超过变化；室温保存时间不能超过6h6h，冰冻标，冰冻标本不宜反复冻融，解冻后应完全融化、混本不宜反复冻融，解冻后应完全融化、混匀后应用。匀后应用。51血液标本采集和制片血液标本采集和制片52血液标本采集和制片血液标本采集和制片l一、血片制备一、血片制备l（一）载玻片的清洁（一）载玻片的清洁l 、新玻片用、新玻片用1mol/L1mol/L（1010）HclHcl浸浸泡泡2424hh清水彻底冲洗清水彻底冲洗烤干后备用。烤干后备用。l 、用过的玻片用肥皂水煮沸、用过的玻片用肥皂水煮沸20min20min趁热将血膜刷洗干净趁热将血膜刷洗干净清水反复清水反复冲洗。冲洗。第三节第三节 血涂片制备和染色血涂片制备和染色53血液标本采集和制片血液标本采集和制片（二）制血片：（二）制血片：推片法推片法于载玻片于载玻片1/31/3与与2/32/3交交界处界处加绿豆大血加绿豆大血1 1滴滴左手拇指与中指持载左手拇指与中指持载玻片玻片(血滴靠中指端血滴靠中指端)右手持边缘平滑的推右手持边缘平滑的推片片,从血滴前方接触从血滴前方接触血液血液使血液散开成使血液散开成一线一线 以推片与载以推片与载片保持片保持2525 3030度夹角度夹角向前向前(母指方向母指方向)推推动动形成血膜形成血膜54血液标本采集和制片血液标本采集和制片(1 1)血血滴滴大大小小(2 2)推推片片与与玻玻片片之之间间角角度度(3 3)推推片片速速度度56血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、二、血涂片染色血涂片染色l常用染色方法有：常用染色方法有：l 瑞氏染色法、姬姆萨染色法、瑞姬瑞氏染色法、姬姆萨染色法、瑞姬氏染色法氏染色法l(一一)瑞氏染色法（瑞氏染色法（right)right)l 【原理原理】l1 1、瑞氏、瑞氏染液组成：染液组成：瑞氏粉瑞氏粉+甲醇甲醇l(1)(1)瑞氏粉的组成：瑞氏粉的组成：l 美蓝的氯盐美蓝的氯盐 +伊红的钠盐伊红的钠盐 +水水 瑞氏粉沉淀瑞氏粉沉淀(ME)(ME)l 瑞氏粉不溶于水，而溶于甲醇瑞氏粉不溶于水，而溶于甲醇57血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血涂片染色二、血涂片染色l (2)(2)瑞氏粉的性质：瑞氏粉的性质：l 是一种中性盐（是一种中性盐（伊红伊红E E、美蓝美蓝M M），难溶于水，可溶于甲醇并解离难溶于水，可溶于甲醇并解离l(一一)瑞氏染色法（瑞氏染色法（right)right)l 【原理原理】l1 1、瑞氏、瑞氏染液组成：染液组成：l (1)(1)瑞氏粉的组成：瑞氏粉的组成：l ME(ME(瑞氏粉瑞氏粉)甲醇甲醇MM+E+E -l 瑞氏瑞氏染液染液l 美蓝氧化后美蓝氧化后-天青天青(紫红色紫红色)58血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血涂片染色二、血涂片染色l2 2、甲醇作用：甲醇作用：l 固定血膜片（具强大脱水力）固定血膜片（具强大脱水力）,防止防止细胞溶解；增加染色效果；使细胞粘附于细胞溶解；增加染色效果；使细胞粘附于玻片玻片 l 溶解瑞氏粉，起溶剂的作用：过多溶解瑞氏粉，起溶剂的作用：过多瑞氏液或染色过久反可使细胞不着色。瑞氏液或染色过久反可使细胞不着色。l(一一)瑞氏染色法（瑞氏染色法（right)right)l 【原理原理】l1 1、瑞氏、瑞氏染液组成：染液组成：59血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血涂片染色二、血涂片染色l3 3、细胞对染液的反应：细胞对染液的反应：l 染色过程中染色过程中既有物理吸附既有物理吸附作用作用又有又有化化学亲和力学亲和力作用作用（各类细胞和细胞的各种成（各类细胞和细胞的各种成份份,化学性质不同，化学性质不同，对对染液亲和力不同染液亲和力不同对各染料可发生不同的化学对各染料可发生不同的化学 结合）。结合）。l 因而在染色后同一张血膜上，可以看因而在染色后同一张血膜上，可以看到不同的着色，从而区分各细胞。到不同的着色，从而区分各细胞。l(一一)瑞氏染色法（瑞氏染色法（right)right)l 【原理原理】l1 1、瑞氏、瑞氏染液组成：染液组成：l2 2、甲醇作用：甲醇作用：60血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血涂片染色二、血涂片染色l3 3、细胞对染液的反应：、细胞对染液的反应：l 带正电的蛋白质带正电的蛋白质(细胞内碱性物质细胞内碱性物质)与带负电的酸性伊红结合，而染成红色与带负电的酸性伊红结合，而染成红色l 如：红细胞浆内如：红细胞浆内HbHb，嗜酸性颗粒等均，嗜酸性颗粒等均l 带负电的蛋白质带负电的蛋白质(细胞内酸性物质细胞内酸性物质)将与带正电的碱性美蓝结合将与带正电的碱性美蓝结合,而染成深蓝色而染成深蓝色 l 如：细胞核如：细胞核(DNA)(DNA)、原始细胞浆（含、原始细胞浆（含RNARNA），嗜碱性颗粒等均为性酸性物质。），嗜碱性颗粒等均为性酸性物质。l 中性物质既能与伊红结合，又能与中性物质既能与伊红结合，又能与美篮结合美篮结合,而染成粉红色、淡紫红色。而染成粉红色、淡紫红色。l 如：嗜中性颗粒。如：嗜中性颗粒。61血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血涂片染色二、血涂片染色l4 4、PHPH值对细胞着色的影响值对细胞着色的影响 :l 当溶液当溶液PH pIPH pI:PH pI:偏碱偏碱 负电荷负电荷增多增多(OH(OH )，易与带正电的美蓝结合，易与带正电的美蓝结合 染色偏蓝。染色偏蓝。l a.a.玻片必须化学清洁（洗衣粉）；玻片必须化学清洁（洗衣粉）；l b.b.用用PH6.4PH6.46.86.8缓冲液或新鲜蒸馏缓冲液或新鲜蒸馏水调节水调节PHPH；l c.c.染色完后应用近中性水冲洗。染色完后应用近中性水冲洗。62血液标本采集和制片血液标本采集和制片二、血涂片染色二、血涂片染色l【试剂试剂】l瑞氏染液、瑞氏染液、pH6.4pH6.46.86.8磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液l【染色方法染色方法】略略63血液标本采集和制片血液标本采集和制片【瑞氏染色结果判断瑞氏染色结果判断】正常正常染色染色偏偏酸酸偏偏碱碱64血液标本采集和制片血液标本采集和制片【瑞氏染色注意事项瑞氏染色注意事项】l ()未干透血膜，染色时易脱落，未干透血膜，染色时易脱落，故血膜应干透再染色。故血膜应干透再染色。l ()染色时间与染液浓度，室温高染色时间与染液浓度，室温高低，细胞多少有关。低，细胞多少有关。l ()冲洗前，先在低倍镜下观察有冲洗前，先在低倍镜下观察有核细胞是否着色。否则适当延长时间。核细胞是否着色。否则适当延长时间。l ()染液不能过少，以防蒸发，染染液不能过少，以防蒸发，染料沉着在血膜上不易冲掉，影响观察。料沉着在血膜上不易冲掉，影响观察。染料缓冲液。染料缓冲液。65血液标本采集和制片血液标本采集和制片【瑞氏染色注意事项瑞氏染色注意事项】l ()冲洗时，应以流水冲去，防染冲洗时，应以流水冲去，防染料沉着。料沉着。l ()染色应注意保存血片尾部，不染色应注意保存血片尾部，不能用蜡笔划去，因体积大的细胞常在此出能用蜡笔划去，因体积大的细胞常在此出现。现。l ()若要复染若要复染,应先加缓冲液后再应先加缓冲液后再加染液，或加已混合好的。加染液，或加已混合好的。l ()染色过深可用水冲洗或浸泡一染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，或用甲醇定时间，或用甲醇 退色。退色。66血液标本采集和制片血液标本采集和制片（二）姬姆萨染色法（二）姬姆萨染色法l原理与原理与WrightWright染色法大致相同染色法大致相同,l 姬姆萨染料由天青和伊红组成姬姆萨染料由天青和伊红组成l【评价评价】:l (1)(1)本法对细胞核和疟原虫染色本法对细胞核和疟原虫染色较好较好l (2)(2)对细胞质和颗粒较差对细胞质和颗粒较差67血液标本采集和制片血液标本采集和制片(三三)瑞瑞-姬氏染色姬氏染色l 瑞瑞-姬氏染色液姬氏染色液 =瑞氏粉瑞氏粉1g1g甲醇甲醇500ml+500ml+姬氏粉姬氏粉0.3g 0.3g l 【评价评价】兼有上述两法的优点兼有上述两法的优点,染色效果更好、快速。染色效果更好、快速。68血液标本采集和制片血液标本采集和制片