神经解剖学概论课件

文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展神经生理学神经生理学neorophysiology、神经化学神经化学neurochemistry、神经药理学神经药理学neuropharmacology神经病理学神经病理学neuropathology等相互联系、相互渗透，以至在某些方面达到了彼此无法划分界线的程度，于是产生了一门综合学科神经生物学神经生物学neurobiology文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。在这种情况下，神经解剖学就越来越难以确切定义了。由于在这种情况下，神经解剖学就越来越难以确切定义了。由于方法学方法学方法学方法学在在神经解剖学的发展中起着十分重要的作用，本章特介绍一些方法学的沿革神经解剖学的发展中起着十分重要的作用，本章特介绍一些方法学的沿革以及每发展阶段有代表性的技术方法。以及每发展阶段有代表性的技术方法。19 19世纪中期，神经解剖学家已逐渐趋向形成一门独立的科学。当时正世纪中期，神经解剖学家已逐渐趋向形成一门独立的科学。当时正处于化学工业兴起的时代，早期的解剖学家把当时的处于化学工业兴起的时代，早期的解剖学家把当时的化学染料技术引入组化学染料技术引入组化学染料技术引入组化学染料技术引入组织的染色中织的染色中织的染色中织的染色中来，以显示神经组织的不同成分，使人们对脑的复杂结构的认来，以显示神经组织的不同成分，使人们对脑的复杂结构的认识得到空前发展。从那时以来，陆续出现了许多优秀和杰出的神经解剖学识得到空前发展。从那时以来，陆续出现了许多优秀和杰出的神经解剖学家。家。发现发现无髓神经纤维无髓神经纤维无髓神经纤维无髓神经纤维unmyelinated fibersunmyelinated fibersunmyelinated fibersunmyelinated fibers的的RemarkRemark（1815186518151865）；）；详细观察神经纤维被切断后其远侧部可变性的详细观察神经纤维被切断后其远侧部可变性的WallerWaller（181618161880);wallers degeneration1880);wallers degeneration神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。n nForelForel共同完成共同完成切片机切片机切片机切片机并发现并发现GuddenGuddenGuddenGudden氏连合氏连合氏连合氏连合guddens guddens guddens guddens commissurecommissurecommissurecommissure等脑内重要结构的等脑内重要结构的Von GudenVon Guden（1824188618241886）；）；n n发现大脑皮质语言区发现大脑皮质语言区(BrocaBrocaBrocaBroca氏回氏回氏回氏回)的的 Broca(18241880)Broca(18241880)；n n证实证实底丘脑核底丘脑核底丘脑核底丘脑核的的LuysLuys（1828189718281897）；在脊髓发现）；在脊髓发现胸核胸核胸核胸核的的ClarkClark（1817188018171880）等，都是这一时期原代表人物。到）等，都是这一时期原代表人物。到19191919世纪世纪世纪世纪末叶末叶末叶末叶，更出现了几位杰出人物，创造了新的，更出现了几位杰出人物，创造了新的神经组织染色方法神经组织染色方法神经组织染色方法神经组织染色方法。这些方法迄今在神经解剖学中仍占有重要地位，他们给现代神经这些方法迄今在神经解剖学中仍占有重要地位，他们给现代神经解剖学奠定了全面的基础。解剖学奠定了全面的基础。神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。GolgiGolgi氏法氏法氏法氏法n n Camello Golgi(18431926),Camello Golgi(18431926),意大利人，意大利人，18731873年创建了年创建了GolgiGolgi法，法，即用即用硝酸银镀染整个神经元硝酸银镀染整个神经元硝酸银镀染整个神经元硝酸银镀染整个神经元的方法，当时他称之为的方法，当时他称之为“黑的染色黑的染色”(Reazione nera)”(Reazione nera)。GolgiGolgiGolgiGolgi器，器，器，器，GolgiGolgiGolgiGolgi氏氏氏氏1 1 1 1、2 2 2 2型细胞，型细胞，型细胞，型细胞，Golgi Golgi Golgi Golgi氏小体氏小体氏小体氏小体等等都是他发现的，并以他的名字而命名。都是他发现的，并以他的名字而命名。n n 在今天，在今天，GolgiGolgi法仍广泛应用着。这个方法的特点是，法仍广泛应用着。这个方法的特点是，在一张切片在一张切片在一张切片在一张切片中只有百分之几的神经纤维被染出中只有百分之几的神经纤维被染出中只有百分之几的神经纤维被染出中只有百分之几的神经纤维被染出（如果全部神经元都被染色，则成为（如果全部神经元都被染色，则成为漆黑一片而失去价值），可以漆黑一片而失去价值），可以看出完整的神经元轮廓及其突起看出完整的神经元轮廓及其突起看出完整的神经元轮廓及其突起看出完整的神经元轮廓及其突起的方向。的方向。在显示核团的内在组合（在显示核团的内在组合（在显示核团的内在组合（在显示核团的内在组合（IntrinsicorganizationIntrinsicorganizationIntrinsicorganizationIntrinsicorganization）或研究轴突和侧支）或研究轴突和侧支）或研究轴突和侧支）或研究轴突和侧支行向等方面，迄今还没有比它更优越的方法。行向等方面，迄今还没有比它更优越的方法。行向等方面，迄今还没有比它更优越的方法。行向等方面，迄今还没有比它更优越的方法。神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Golgi氏法氏法n n 在标记法盛行的今天，在标记法盛行的今天，GolgiGolgi法仍未失去其神经元形态和法仍未失去其神经元形态和联系研究中的重要地位。如联系研究中的重要地位。如5050年代以来，著名的年代以来，著名的ScheibelScheibel夫夫妇对网状结构神经元的研究等，都是用妇对网状结构神经元的研究等，都是用GolgiGolgi法完成的。所法完成的。所以有人将以有人将50505050年代称为年代称为年代称为年代称为GolgiGolgiGolgiGolgi法复活时期法复活时期法复活时期法复活时期。近年来，单细胞内。近年来，单细胞内注入注入辣根过氧化酶辣根过氧化酶(Horseradish peroxidase,HRP)Horseradish peroxidase,HRP)溶液溶液或色素或色素(Procion yellow,lucifer yellow)(Procion yellow,lucifer yellow)以显示整个神经以显示整个神经元的形态，有人称之为新元的形态，有人称之为新GolgiGolgi法。但是此法只能显示单个法。但是此法只能显示单个神经元的形态，不能同时显示出多数神经元以及它们之间的神经元的形态，不能同时显示出多数神经元以及它们之间的关系，且向小型细胞内注射也较困难。关系，且向小型细胞内注射也较困难。GolgiGolgiGolgiGolgi法的缺点是极法的缺点是极法的缺点是极法的缺点是极不稳定，不易掌握，染色机制也还不清楚不稳定，不易掌握，染色机制也还不清楚不稳定，不易掌握，染色机制也还不清楚不稳定，不易掌握，染色机制也还不清楚。是否所有类型的。是否所有类型的神经元都可用此法，尚不清楚。神经元都可用此法，尚不清楚。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。GolgiGolgi氏法氏法氏法氏法n n Golgi Golgi以坚忍不拔的精神，在以坚忍不拔的精神，在1870190018701900的三十的三十年间为神经解剖学发展做出了不可磨灭的贡献。年间为神经解剖学发展做出了不可磨灭的贡献。19061906年他和年他和CajalCajal共同获得了第六届诺贝尔医学奖。共同获得了第六届诺贝尔医学奖。19731973年为了纪念年为了纪念GolgiGolgi法问世一百周年，来自世界法问世一百周年，来自世界2020多个多个国家的国家的500500多位学者云集意大利北部多位学者云集意大利北部GolgiGolgi曾经学习和曾经学习和工作过的巴比亚大学举行了纪念会。会上匈牙利的工作过的巴比亚大学举行了纪念会。会上匈牙利的SzentagothaiSzentagothai教授从形态学方面，美国哥伦比亚大学教授从形态学方面，美国哥伦比亚大学的的GrundGrund教授从生理学方面做了专题报告。教授从生理学方面做了专题报告。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。CajalCajal氏法氏法氏法氏法n n Ramon Y.CajalRamon Y.Cajal（1852193418521934）西班牙人，他既是神经组织学家，）西班牙人，他既是神经组织学家，又是优秀的摄影家，并擅长绘画。又是优秀的摄影家，并擅长绘画。18871887年当他在朋友处看到从巴黎年当他在朋友处看到从巴黎带来的带来的GolgiGolgi法和法和Weiger-PalWeiger-Pal法标本后，深受感染。从此开始热衷于法标本后，深受感染。从此开始热衷于神经解剖学的研究。神经解剖学的研究。n n Cajal Cajal将照相技术引入到神经组织染色中，将照相技术引入到神经组织染色中，19031903年创立了年创立了CajalCajal法。法。CajalCajal法可以法可以镀染神经元内的神经原纤维，从而可以显示镀染神经元内的神经原纤维，从而可以显示镀染神经元内的神经原纤维，从而可以显示镀染神经元内的神经原纤维，从而可以显示轴突末梢和其他胞体间的联系情况轴突末梢和其他胞体间的联系情况轴突末梢和其他胞体间的联系情况轴突末梢和其他胞体间的联系情况。n nCajalCajal为神经解剖学留下了丰富的遗产。他的巨著人和脊椎动物的为神经解剖学留下了丰富的遗产。他的巨著人和脊椎动物的神经组织学以及神经系统的变性和再生今天仍是神经解剖学神经组织学以及神经系统的变性和再生今天仍是神经解剖学的经典著作。的经典著作。神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Cajal氏法氏法n n 19 19世纪末到世纪末到2020世纪初，围绕神经系统的构成方式世纪初，围绕神经系统的构成方式问题展开过一场激烈的论战。这场论战是以问题展开过一场激烈的论战。这场论战是以GolgiGolgi倡导倡导的网状学说和以的网状学说和以CajalCajal为代表所倡导的神经元学说为对为代表所倡导的神经元学说为对立的双方而进行的。立的双方而进行的。GolgiGolgiGolgiGolgi派认为神经细胞通过纤维束派认为神经细胞通过纤维束派认为神经细胞通过纤维束派认为神经细胞通过纤维束联系形成整体的网联系形成整体的网联系形成整体的网联系形成整体的网，借此对周围组织起着，借此对周围组织起着“积累积累”的的作用。作用。CajalCajal派则是根据用派则是根据用GolgiGolgi法所做的大量胎儿及法所做的大量胎儿及动物脑的标本，动物脑的标本，发现神经纤维反复分枝，最后都行向发现神经纤维反复分枝，最后都行向发现神经纤维反复分枝，最后都行向发现神经纤维反复分枝，最后都行向神经细胞体和树突周围形成密集的篮状构造或丛神经细胞体和树突周围形成密集的篮状构造或丛神经细胞体和树突周围形成密集的篮状构造或丛神经细胞体和树突周围形成密集的篮状构造或丛，从，从而认为神经元之间的联络不是连续的，而是而认为神经元之间的联络不是连续的，而是接触接触的。的。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Cajal氏法氏法n nCajal认为在神经元之间的接触面上有颗粒颗粒状的粘合物质乃至特殊的传递物质状的粘合物质乃至特殊的传递物质。这场论战一直持续了许多年，直到电子显微镜应用到神经学研究，从而证实了突触突触的结构之后，才告正式结束。虽然由于时代的限制两派人的学说都有局限性和不确切之点，但是Cajal的论点更符合实际。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。NisslNissl法法法法n n Franz Nissl(18601919),Franz Nissl(18601919),德国病理组织学家，德国病理组织学家，18921892年创立了年创立了NisslNissl染色法，并以发现染色法，并以发现NisslNisslNisslNissl体和体和体和体和NisslNisslNisslNissl变性变性变性变性等而闻名。等而闻名。NisslNissl法给中枢神经系统的研法给中枢神经系统的研究开辟了细胞构筑学途径。究开辟了细胞构筑学途径。CampbellCampbell、Brodmann Brodmann、VoghtVoght夫妇等对大脑皮质的分区，夫妇等对大脑皮质的分区，Rexed Rexed对脊髓灰对脊髓灰质的分层，都是以质的分层，都是以NisslNissl法研究细胞构筑学为基础法研究细胞构筑学为基础的。的。神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Nissl法法n n 半个多世纪以来，一直被沿用着的染色质溶解半个多世纪以来，一直被沿用着的染色质溶解(Chromatolysis)(Chromatolysis)方法是方法是NisslNissl的一大贡献。这个的一大贡献。这个现象是现象是Nissl1892Nissl1892年发现的。他切断家兔面神经，年发现的。他切断家兔面神经，几天后发现面神经核的胞体膨大，几天后发现面神经核的胞体膨大，NisslNissl物质溶解，物质溶解，细胞核稍膨大且向轴丘对侧的胞体边缘部移动，细胞核稍膨大且向轴丘对侧的胞体边缘部移动，细胞中央部呈现细胞中央部呈现“牛奶牛奶”样。他把这样的变化叫样。他把这样的变化叫做原发反应。做原发反应。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Nissl法法n n 用用NisslNissl法逆行追踪细胞变性或用镀银法和法逆行追踪细胞变性或用镀银法和MarchiMarchi法顺行追踪纤维或髓鞘变性，是多年来追踪法顺行追踪纤维或髓鞘变性，是多年来追踪神经元联系的主要手段。但染质溶解方法也有弱点。神经元联系的主要手段。但染质溶解方法也有弱点。如对于侧支较多的神经元，只离断其轴突主干往往如对于侧支较多的神经元，只离断其轴突主干往往胞体变性不明显；在镜下辨认变性细胞需有相当的胞体变性不明显；在镜下辨认变性细胞需有相当的经验，特别是小型细胞更难辨认；在细胞已消失的经验，特别是小型细胞更难辨认；在细胞已消失的部位虽可根据局部的胶质变化加以判断，但不和健部位虽可根据局部的胶质变化加以判断，但不和健侧对比则无法断定细胞的数量或形态等。侧对比则无法断定细胞的数量或形态等。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。WeigertWeigert氏法和氏法和氏法和氏法和MarchiMarchin n Karl Weigert(18431904)Karl Weigert(18431904)，德国病理学家，德国病理学家，18841884年发表了年发表了髓鞘髓鞘髓鞘髓鞘染色法染色法染色法染色法。用。用金属化合物先将神经组织（特别是髓鞘）进行媒染，再以金属化合物先将神经组织（特别是髓鞘）进行媒染，再以金属化合物先将神经组织（特别是髓鞘）进行媒染，再以金属化合物先将神经组织（特别是髓鞘）进行媒染，再以苏木素进行染色苏木素进行染色苏木素进行染色苏木素进行染色。WeigertWeigert氏法是显示神经髓鞘的优秀方法。以后，氏法是显示神经髓鞘的优秀方法。以后，又出现了不少的改良方法，其中又出现了不少的改良方法，其中palpal（18861886）和）和KultschitzhyKultschitzhy的改良的改良方法应用最为普遍。方法应用最为普遍。n n Vittari Marchi(18511908)Vittari Marchi(18511908)，意大利人，意大利人，18901890年发表了年发表了专门显专门显专门显专门显示变性髓鞘示变性髓鞘示变性髓鞘示变性髓鞘的优秀方法，过去多年曾广泛应用于变性有髓纤维束的追的优秀方法，过去多年曾广泛应用于变性有髓纤维束的追踪。由于踪。由于MarchiMarchi氏法可选择地镀染变性髓鞘，故它对束路学研究的贡氏法可选择地镀染变性髓鞘，故它对束路学研究的贡献颇大。献颇大。神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。WeigertWeigert氏法和氏法和氏法和氏法和MarchiMarchin n 到到2020世纪初，上述的经典方法已经定型，在光学显微镜下全面地世纪初，上述的经典方法已经定型，在光学显微镜下全面地研究脑内结构的工作得到空前发展，研究脑内结构的工作得到空前发展，神经解剖学已成为一门实验科学神经解剖学已成为一门实验科学神经解剖学已成为一门实验科学神经解剖学已成为一门实验科学。n n 为了探索脑内结构的复杂联系，在神经解剖学研究中广泛使用了为了探索脑内结构的复杂联系，在神经解剖学研究中广泛使用了实验破坏的方法，即有目的地破坏中枢内某一核团或束路，用逆行追实验破坏的方法，即有目的地破坏中枢内某一核团或束路，用逆行追踪细胞变性或顺行追踪纤维或髓鞘变性的手段，探讨核团间联系，这踪细胞变性或顺行追踪纤维或髓鞘变性的手段，探讨核团间联系，这种方法对搞清脑内某一机能系统有重要作用。种方法对搞清脑内某一机能系统有重要作用。n n 作为实验破坏的手段可以用吸除、电解、放射线照射，超声波以作为实验破坏的手段可以用吸除、电解、放射线照射，超声波以及药物等。为了精确地找到破坏目标，需要脑定位仪（及药物等。为了精确地找到破坏目标，需要脑定位仪（Stereotaxic Stereotaxic instrumentinstrument）以及脑定位图谱。脑定位仪是）以及脑定位图谱。脑定位仪是2020年代初年代初HorslyHorsly和和ClarkeClarke创创建的，它既适用于电生理学，也适用于形态学研究。由于实验用动物建的，它既适用于电生理学，也适用于形态学研究。由于实验用动物种属不同，陆续出版了各种动物的脑定位图谱。种属不同，陆续出版了各种动物的脑定位图谱。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。5050年代后年代后年代后年代后n n一一一一.镀银法的革新镀银法的革新镀银法的革新镀银法的革新n n Marchi Marchi问世后，几十年中用此法做了大量的问世后，几十年中用此法做了大量的束路追踪束路追踪束路追踪束路追踪工作，工作，发展了束路学的研究。但是发展了束路学的研究。但是MarchiMarchi法法只适用于有髓纤维，对无髓只适用于有髓纤维，对无髓纤维以及细小的有髓纤维或髓鞘很薄的部分并不适用纤维以及细小的有髓纤维或髓鞘很薄的部分并不适用，且易出现，且易出现假象。由于这种方法对神经元联系的最重要部分假象。由于这种方法对神经元联系的最重要部分轴突终末的位轴突终末的位置不能确定，因而在相当长的时间内人们企图改善镀银法，使之置不能确定，因而在相当长的时间内人们企图改善镀银法，使之能够追踪出无髓纤维或神经终末。能够追踪出无髓纤维或神经终末。19461946年，年，GleesGlees在在BielschowskyBielschowsky氏法的基础上做了改进，取得了较稳定的成绩，特别是它可以比氏法的基础上做了改进，取得了较稳定的成绩，特别是它可以比较可靠地染出变性的神经终末。但此法仍是将正常纤维和变性纤较可靠地染出变性的神经终末。但此法仍是将正常纤维和变性纤维同时染出。观察终末溃变时常常发生误差。维同时染出。观察终末溃变时常常发生误差。神经解剖学的形成及其早期的发展神经解剖学的形成及其早期的发展文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。一一一一.镀银法的革新镀银法的革新镀银法的革新镀银法的革新n n 1954 1954年，年，NautaNauta法问世，法问世，NautaNauta及其同事做了许多尝试及其同事做了许多尝试以改进镀银法，于以改进镀银法，于19541954年发表了年发表了用高锰酸钾进行前处理以用高锰酸钾进行前处理以用高锰酸钾进行前处理以用高锰酸钾进行前处理以降低组织还原力并抑制正常纤维嗜银性的方法降低组织还原力并抑制正常纤维嗜银性的方法降低组织还原力并抑制正常纤维嗜银性的方法降低组织还原力并抑制正常纤维嗜银性的方法。这样，可。这样，可以追踪到终末前以追踪到终末前(Preterminal)(Preterminal)变性，从而可显示变性纤变性，从而可显示变性纤维靠近终末部分的变性象。直到维靠近终末部分的变性象。直到7070年代初以前，作为顺行年代初以前，作为顺行追踪手段，此法对束路学的发展起了很大的作用。但追踪手段，此法对束路学的发展起了很大的作用。但NautaNauta法在稳定方面仍有欠缺，法在稳定方面仍有欠缺，NautaNauta本人和许多学者继续本人和许多学者继续探索了对此法的进一步改良。探索了对此法的进一步改良。NautaNauta法的改良法甚多，其法的改良法甚多，其中应用最广泛的是中应用最广泛的是Fink-HeimerFink-Heimer使用销酸铀的改良法，它可使用销酸铀的改良法，它可追踪出更靠近终末的部位或终末的变性象。追踪出更靠近终末的部位或终末的变性象。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。电子显微镜对神经解剖学发展的推动电子显微镜对神经解剖学发展的推动n n 光学显微镜的分辨率只能达到光学显微镜的分辨率只能达到0.20.2微米。对细胞内超过微米。对细胞内超过限度的微细结构在应用电子显微镜后才逐步得到认识。其限度的微细结构在应用电子显微镜后才逐步得到认识。其中最重要的是对突触的认识，在神经学中开辟了突触学中最重要的是对突触的认识，在神经学中开辟了突触学(Synaptology)(Synaptology)的新领域。早在的新领域。早在19061906年年SherringtonSherrington就提出突就提出突触的概念，他认为突触是神经元之间或神经元和效应器之触的概念，他认为突触是神经元之间或神经元和效应器之间的信息传递部位。只至应用了电子显微镜之后，才真正间的信息传递部位。只至应用了电子显微镜之后，才真正对突触的形态、构造有了全面的认识。对突触的形态、构造有了全面的认识。n n 上世纪上世纪5050年代以来突触的研究日新月异，不仅了解了轴年代以来突触的研究日新月异，不仅了解了轴突的构造、种类及性质等一般状况，而且进一步认识了光突的构造、种类及性质等一般状况，而且进一步认识了光镜研究中未能解决的问题。如电镜下认识了树突小棘是一镜研究中未能解决的问题。如电镜下认识了树突小棘是一种存在范围很广泛的一般构造种存在范围很广泛的一般构造.文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。电了显微镜对神经解剖学发展的推动电了显微镜对神经解剖学发展的推动n n 对于突触前成分的神经终末的变性变化，在电镜下认识对于突触前成分的神经终末的变性变化，在电镜下认识得更为清楚，这有利于判断变性束路的性质以及探讨突触得更为清楚，这有利于判断变性束路的性质以及探讨突触的重新建立问题。应用扫描电镜及冰冻蚀刻方法，对突触的重新建立问题。应用扫描电镜及冰冻蚀刻方法，对突触处的膜的研究也有了一定发展。处的膜的研究也有了一定发展。n n 电镜可以观察到突触的微细结构，但不利于对纤维行电镜可以观察到突触的微细结构，但不利于对纤维行踪的追踪。只根据突触部位的所见并不能窥得脑内某一机踪的追踪。只根据突触部位的所见并不能窥得脑内某一机能系统的全貌。前述的镀银方法能追踪纤维行径，但不能能系统的全貌。前述的镀银方法能追踪纤维行径，但不能确定神经纤维终末部分和另外神经元之间的联络状态。因确定神经纤维终末部分和另外神经元之间的联络状态。因此在解决某一问题时常常出现电子显微镜与传统的镀银法此在解决某一问题时常常出现电子显微镜与传统的镀银法或新兴的或新兴的HRPHRP标记法、组织化学方法、免疫组织化学法并用标记法、组织化学方法、免疫组织化学法并用的局面。的局面。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。神经递质的形态学显示方法神经递质的形态学显示方法n n 突触部位的神经信息传递是以某种化学物质为媒体而实现突触部位的神经信息传递是以某种化学物质为媒体而实现的。这种化学物质一般称为神经递质的。这种化学物质一般称为神经递质(Neurotransmitter)(Neurotransmitter)，它从突触前成分被释放于组织间隙内，和突触后膜的特殊受它从突触前成分被释放于组织间隙内，和突触后膜的特殊受体结合，并使膜的离子通透性改变而引起去极化可超极化，体结合，并使膜的离子通透性改变而引起去极化可超极化，借此，突触后神经元发生兴奋或抑制性反应。借此，突触后神经元发生兴奋或抑制性反应。n n 几十年来，发现的神经递质越来越多。到几十年来，发现的神经递质越来越多。到5050年代，大体年代，大体上已肯定了周围的神经肌接头部，多数自主神经节以及支配上已肯定了周围的神经肌接头部，多数自主神经节以及支配各器官的自主神经未梢部等处的化学物质不外是乙酰胆碱和各器官的自主神经未梢部等处的化学物质不外是乙酰胆碱和去甲肾上腺素。脑和脊髓中所含的神经递质则复杂的多，除去甲肾上腺素。脑和脊髓中所含的神经递质则复杂的多，除乙酰胆碱外，还有属于单胺类的去甲肾上腺素、多巴胺、肾乙酰胆碱外，还有属于单胺类的去甲肾上腺素、多巴胺、肾上腺素和五羟色胺；属于氨基酸的上腺素和五羟色胺；属于氨基酸的YY氨基丁酸、甘氨酸、谷氨基丁酸、甘氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸；其它还有组织胺和属于肽类的氨酸和天门冬氨酸；其它还有组织胺和属于肽类的P P物质等。物质等。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。神经递质的形态学显示方法神经递质的形态学显示方法n n 由于组织化学方法的进展，借助显示脑内各个投射系统的神经递质由于组织化学方法的进展，借助显示脑内各个投射系统的神经递质的分布，可以制成各种神经递质在脑内分布的图形（有人称之为化学的分布，可以制成各种神经递质在脑内分布的图形（有人称之为化学构筑图构筑图Chemo-architectureChemo-architecture）。这种方法不仅可以追踪出某一系统在）。这种方法不仅可以追踪出某一系统在脑内的分布范围，还可以了解该系统的机能性质等，从而将脑的构造、脑内的分布范围，还可以了解该系统的机能性质等，从而将脑的构造、代谢和机能的研究结合起来。代谢和机能的研究结合起来。n n 乙酰胆碱是广泛存在于神经系统的神经递质，当它在突触被释放乙酰胆碱是广泛存在于神经系统的神经递质，当它在突触被释放后，被胆碱脂酶水解而失去作用。乙酰胆碱脂酶（后，被胆碱脂酶水解而失去作用。乙酰胆碱脂酶（ACHEACHE）是最早用组）是最早用组织化学方法显示的酶之一。此酶的分布可用织化学方法显示的酶之一。此酶的分布可用KoelleKoelle法显示，凡是胆碱法显示，凡是胆碱能神经元都用此法显示。能神经元都用此法显示。19621962年年FalckFalck等介绍甲醛诱发荧光的组织化学等介绍甲醛诱发荧光的组织化学法（即法（即Falck-HillarpFalck-Hillarp法）。这个方法可显示单胺类物质与醛聚合成新法）。这个方法可显示单胺类物质与醛聚合成新的环形化合物，在荧光显微镜下，发射出波长不同的荧光。儿茶酚胺的环形化合物，在荧光显微镜下，发射出波长不同的荧光。儿茶酚胺类神经元呈绿色，类神经元呈绿色，55羟色胺能神经元呈黄色。羟色胺能神经元呈黄色。19631963年以来，年以来，DahlstronDahlstron和和FuxeFuxe等此法观察了大鼠脑内单胺类神经元的分布，将含儿等此法观察了大鼠脑内单胺类神经元的分布，将含儿茶酚胺神经元组成的核群称茶酚胺神经元组成的核群称A A群，含群，含55羟色神经元的核群称为羟色神经元的核群称为B B群。群。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。标记法的应用及其进展标记法的应用及其进展n n 70 70年代初，在追踪神经元联系方面开始采用了标年代初，在追踪神经元联系方面开始采用了标记法。标记法是以轴浆流的原理为基础发展起来的。记法。标记法是以轴浆流的原理为基础发展起来的。在神经元的正常活动状态下应用标记物质借轴浆流本在神经元的正常活动状态下应用标记物质借轴浆流本身将神经元的胞体、轴突标记出来。身将神经元的胞体、轴突标记出来。n n 根据神经元学说以及根据神经元学说以及WallerWaller变性，人们很早即已认变性，人们很早即已认识到一个神经元的胞体是突起的营养中心，并推想由识到一个神经元的胞体是突起的营养中心，并推想由胞体向末梢有物质流动。胞体向末梢有物质流动。19481948年年WeissWeiss和和HiscoeHiscoe研究神研究神经元轴突生长的再生中证明了这种设想。基于这个理经元轴突生长的再生中证明了这种设想。基于这个理论，放射性同位素示踪的方法广泛地用于神经元联系论，放射性同位素示踪的方法广泛地用于神经元联系的追踪研究中，开创了同位素放射自显影方法。的追踪研究中，开创了同位素放射自显影方法。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。放射自显影法放射自显影法(Autoradiography(Autoradiography，ARGARG法法)n n 1965 1965年年TaylorTaylor等向小鼠眼球玻璃体内注入等向小鼠眼球玻璃体内注入3H-3H-亮氨酸，亮氨酸，在视神经内发现顺向传递的放射性物质。以后有人用此法在视神经内发现顺向传递的放射性物质。以后有人用此法观察后根节神经元中枢突在脊髓内的终止状况。观察后根节神经元中枢突在脊髓内的终止状况。n n 1972 1972年年CowanCowan发表了较为系统的材料，后来在神经学发表了较为系统的材料，后来在神经学研究中即广泛应用放射自显影方法。研究中即广泛应用放射自显影方法。3 3H H1414C C是取常用的同是取常用的同位素，而最常用的标记物质是为位素，而最常用的标记物质是为3H3H标记的氨基酸（亮氨酸、标记的氨基酸（亮氨酸、脯氨酸和赖氨酸等）。将标记的氨基酸注入核团内，可被脯氨酸和赖氨酸等）。将标记的氨基酸注入核团内，可被胞体摄入，并合成蛋白质向末梢方向运送。随后将制成的胞体摄入，并合成蛋白质向末梢方向运送。随后将制成的切片涂原子核乳剂，使之感光成像，借此可以追踪被标记切片涂原子核乳剂，使之感光成像，借此可以追踪被标记的轴突的行径和终末。的轴突的行径和终末。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。放射自显影法放射自显影法(Autoradiography(Autoradiography，ARGARG法法)n n此法的主要优点有：（此法的主要优点有：（1 1）和变性法不同，它是在神经细）和变性法不同，它是在神经细胞生活过程中进行传递；（胞生活过程中进行传递；（2 2）在注射过程中不象变性那）在注射过程中不象变性那样由于手术而过多地破坏过路纤维；（样由于手术而过多地破坏过路纤维；（3 3）这种材料还可）这种材料还可用闪烁计算器测量放射能，以达到计量的目的。此法的缺用闪烁计算器测量放射能，以达到计量的目的。此法的缺点是：（点是：（1 1）由于放出的是低能量的射线，在切片上只有）由于放出的是低能量的射线，在切片上只有表面表面2 23 3微米范围内乳剂溴化银可被感光，因而只能观察微米范围内乳剂溴化银可被感光，因而只能观察到切片的最浅层像，从这一点来看，它不如到切片的最浅层像，从这一点来看，它不如NautaNauta法；法；（2 2）有些纤维系统其末梢分支分布弥散，如在单位面积）有些纤维系统其末梢分支分布弥散，如在单位面积内出现的末梢数量很少时，不易和背景上的假象区别；内出现的末梢数量很少时，不易和背景上的假象区别；（3 3）注入氨基酸在神经毡内扩散，不易严格控制注入范）注入氨基酸在神经毡内扩散，不易严格控制注入范围。围。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（Horseradish peroxidase,HRPHorseradish peroxidase,HRP）轴突逆行轴突逆行轴突逆行轴突逆行传递法（传递法（传递法（传递法（Retro-grade axonal transportRetro-grade axonal transport）自自WeissWeiss和和HiscoeHiscoe发现顺向性轴浆输送现象发现顺向性轴浆输送现象以来，在轴浆内运输的物质归宿如何，有没有以来，在轴浆内运输的物质归宿如何，有没有从末梢再被逆向输送回胞体的可能等问题，引从末梢再被逆向输送回胞体的可能等问题，引起了人们的重视。实际上白蛋白、带状疱疹病起了人们的重视。实际上白蛋白、带状疱疹病毒、破伤风病毒以至于神经生长因子（毒、破伤风病毒以至于神经生长因子（Nerve Nerve growth factorgrowth factor，NGFNGF）都可由神经末梢吸收而）都可由神经末梢吸收而向胞体传递。向胞体传递。19651965年年DahlistromDahlistrom利用利用WeissWeiss和和HiscoeHiscoe的方法结扎周围的交感神经轴突，发现的方法结扎周围的交感神经轴突，发现结扎部远侧也出现物质潴留现象。结扎部远侧也出现物质潴留现象。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（Horseradish peroxidase,HRPHorseradish peroxidase,HRP）轴突逆行轴突逆行轴突逆行轴突逆行传递法（传递法（传递法（传递法（Retro-grade axonal transportRetro-grade axonal transport）n n 70 70年代初，瑞典的年代初，瑞典的KristenssonKristensson等将等将HRPHRP法用于神经系统，法用于神经系统，他们向幼鼠的腓肠肌及舌肌内注入他们向幼鼠的腓肠肌及舌肌内注入HRPHRP溶液，结果在相应的运溶液，结果在相应的运动神经元胞体内发现动神经元胞体内发现HRPHRP的反应物。正式将的反应物。正式将HRPHRP轴突逆行追踪法轴突逆行追踪法用于中枢神经系统研究的是用于中枢神经系统研究的是LavailLavail等。不久此法即被广泛地传等。不久此法即被广泛地传播开来。播开来。n n HRP HRP的呈色反应是一种组织化学方法。的呈色反应是一种组织化学方法。HRPHRP可通过胞饮现可通过胞饮现象被摄入细胞内，神经末梢、胞体和树突均可摄入。有人认为象被摄入细胞内，神经末梢、胞体和树突均可摄入。有人认为无髓的轴突亦可摄入有髓的轴突只在无髓的轴突亦可摄入有髓的轴突只在RanvierRanvier结处，结处，HRPHRP可以可以到达轴突膜的表面。轴突的损伤部位也可摄入。从末梢摄入被到达轴突膜的表面。轴突的损伤部位也可摄入。从末梢摄入被传送到胞体内的传送到胞体内的HRPHRP分子，在溶酶体内作为对联苯胺呈阳性反分子，在溶酶体内作为对联苯胺呈阳性反应的物质而出现，它的活性可持续应的物质而出现，它的活性可持续4 45 5天。从末梢摄入蓄存在天。从末梢摄入蓄存在细胞体内者，大约细胞体内者，大约4 41111天后可能被溶酶体分解而消失。天后可能被溶酶体分解而消失。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（Horseradish peroxidase,Horseradish peroxidase,HRPHRP）轴突逆行）轴突逆行）轴突逆行）轴突逆行传递法（传递法（传递法（传递法（Retro-grade axonal transportRetro-grade axonal transport）n n HRP HRP法较以往的方法显然具有较大的优越性。它首先被应用于神法较以往的方法显然具有较大的优越性。它首先被应用于神经元的经元的逆行追踪逆行追踪，可以清楚地标记出胞体和树突，这是用染质溶解的，可以清楚地标记出胞体和树突，这是用染质溶解的方法所无法比拟的。后来发现此法也可用于神经元的顺行追踪方法所无法比拟的。后来发现此法也可用于神经元的顺行追踪（HanssonHansson，19731973）。近年来还证明顺行追踪不仅在短距离内是可行）。近年来还证明顺行追踪不仅在短距离内是可行的，也可做长距离的追踪。当我们将的，也可做长距离的追踪。当我们将HRPHRP注入家兔胫神经干内通过胯注入家兔胫神经干内通过胯神经节细胞的输送可以在延髓薄束核内看到有一定定位关系的密集的神经节细胞的输送可以在延髓薄束核内看到有一定定位关系的密集的标记终末。标记终末。HRPHRP法观察到的标记神经终末的分布较放射自显影法的操法观察到的标记神经终末的分布较放射自显影法的操作过程短得多，并且适于在电镜下进行突触水平的研究。作过程短得多，并且适于在电镜下进行突触水平的研究。HRPHRP法的另法的另一个优点是在同一材料上既可看到逆行踪的标记胞体，也可看到顺行一个优点是在同一材料上既可看到逆行踪的标记胞体，也可看到顺行追踪的标记终末，借此可以了解一个核团的传入和传出的联系。此外，追踪的标记终末，借此可以了解一个核团的传入和传出的联系。此外，HRPHRP法不仅可以用于中枢内核团间联系的追踪，也适用于周围神经的法不仅可以用于中枢内核团间联系的追踪，也适用于周围神经的传入、传出的追踪。将传入、传出的追踪。将HRPHRP溶液注入脏器壁内或脏器实质内以至自主溶液注入脏器壁内或脏器实质内以至自主神经内，可以标记出节前神经元的胞体和内脏一级传入神经元的所在神经内，可以标记出节前神经元的胞体和内脏一级传入神经元的所在位置及节段范围。位置及节段范围。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（Horseradish peroxidase,HRP）轴突逆行）轴突逆行传递法（传递法（Retro-grade axonal transport）n n 10 10年来，年来，HRPHRP法本身也在不断改良，在这方面法本身也在不断改良，在这方面MesulamMesulam做出了很做出了很多成绩，他用非致癌物质的四甲基联苯胺（多成绩，他用非致癌物质的四甲基联苯胺（TMBTMB）做反应底物（蓝色）做反应底物（蓝色反应），大大提高了呈色反应的灵敏感程度。近年来，有人将反应），大大提高了呈色反应的灵敏感程度。近年来，有人将HRPHRP和和某种植物凝集素（如麦芽凝集素）或和霍乱毒素结合，在提高标记物某种植物凝集素（如麦芽凝集素）或和霍乱毒素结合，在提高标记物的出现率方面都取得良好的结果。的出现率方面都取得良好的结果。n n HRP HRP法已有局限性，其最大的弱点是向中枢神经内注入的法已有局限性，其最大的弱点是向中枢神经内注入的HRPHRP分分子在神经毡中的扩散。尽管使用微量注射或微电泳技术导入技术，也子在神经毡中的扩散。尽管使用微量注射或微电泳技术导入技术，也难严格控制摄取的范围。注入区的中心部呈色反应较浓，向周围较淡，难严格控制摄取的范围。注入区的中心部呈色反应较浓，向周围较淡，究竟可被末梢摄取的有效范围有多大，还没有准确的判断标准。究竟可被末梢摄取的有效范围有多大，还没有准确的判断标准。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。荧光色素标记法荧光色素标记法n n 1977 1977年年KuypersKuypers等利用轴浆流逆向输送的特点，将荧等利用轴浆流逆向输送的特点，将荧光色素（荥光示踪剂）做为标记物质，成功地标记了神经光色素（荥光示踪剂）做为标记物质，成功地标记了神经元的胞体。此法的特点可以将两种（或两种以上）不同的元的胞体。此法的特点可以将两种（或两种以上）不同的荧光色素分别注入两个部位，如果一个神经元的轴突干及荧光色素分别注入两个部位，如果一个神经元的轴突干及其侧支分别分布于这两个部位，则它们所摄取的不同种类其侧支分别分布于这两个部位，则它们所摄取的不同种类的荧光色素可被输送到同一胞体中，即此神经元的胞体可的荧光色素可被输送到同一胞体中，即此神经元的胞体可被两种荧光色素同时标记，在不同波长的激发光照射下，被两种荧光色素同时标记，在不同波长的激发光照射下，此胞体可分别显示为两种不同颜色的荧光。因而将此法称此胞体可分别显示为两种不同颜色的荧光。因而将此法称为荧光色素逆行双重标记法（为荧光色素逆行双重标记法（Fluorescent retrograde Fluorescent retrograde double labeling techniquedouble labeling technique）。几年来已被应用的荧光色）。几年来已被应用的荧光色素主要有下列几种：素主要有下列几种：文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。荧光色素标记法荧光色素标记法n nEvans blue(EB)550Evans blue(EB)550纳米（激发光的波长，纳米（激发光的波长，下同），发红色荧光下同），发红色荧光n nPrimuline(Pr)360Primuline(Pr)360纳米，金黄色荧光纳米，金黄色荧光n nPropidium iodide(PI)550Propidium iodide(PI)550纳米，橙红色荧光纳米，橙红色荧光n nNuclear yellow 360Nuclear yellow 360纳米，金黄色荧光纳米，金黄色荧光n nBisbenzimide(Bb)360Bisbenzimide(Bb)360纳米，蓝绿色荧光纳米，蓝绿色荧光n n46-diamidino-2-phenylindo2HCI(DAPI)36046-diamidino-2-phenylindo2HCI(DAPI)360纳米，蓝色荧光纳米，蓝色荧光n nFast blue(FB)360Fast blue(FB)360纳米，蓝色荧光纳米，蓝色荧光n n 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。荧光色素标记法荧光色素标记法n n 此外，还有此外，还有True blue(TB),granular blue(GB)True blue(TB),granular blue(GB)发蓝光的色素。发蓝光的色素。n n 在进行双重标记时，应选择两种荧光色素配成一组。如在进行双重标记时，应选择两种荧光色素配成一组。如KuypersKuypers等等（19801980）采用）采用NYNY同同FBFB（或同（或同GBGB、TBTB）搭配，）搭配，NYNY标记细胞核，另外的标标记细胞核，另外的标记胞浆，在不同波长激发光照射时，细胞的胞浆或胞核分别显示出两种记胞浆，在不同波长激发光照射时，细胞的胞浆或胞核分别显示出两种不同的荧光。由于各种荧光色素所需的存活时间不同，一般需要将两种不同的荧光。由于各种荧光色素所需的存活时间不同，一般需要将两种荧光色素分别在不荧光色素分别在不 的时间注入。的时间注入。n n Schmued Schmued等（等（19821982）提出）提出4 4乙酰乙酰44异硫氰酸芪异硫氰酸芪-2-2，22双硫酸双硫酸(4-(4-acetamido,4-isothiocyanostibene-2disulfonic acid,SITS)acetamido,4-isothiocyanostibene-2disulfonic acid,SITS)作为逆行追踪作为逆行追踪标记物，它的优点是荧光物质严格局限于标记细胞内，不扩散且不被过标记物，它的优点是荧光物质严格局限于标记细胞内，不扩散且不被过路纤维摄取。它呈浅蓝色荧光，可与路纤维摄取。它呈浅蓝色荧光，可与NyNy或或BbBb搭配用于双重标记。搭配用于双重标记。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。脱氧葡萄糖和免疫组织化学方法脱氧葡萄糖和免疫组织化学方法n n 上述的所有标记法都只能在一个神经元的范围内逆上述的所有标记法都只能在一个神经元的范围内逆行或顺行标记出胞体或终末。行或顺行标记出胞体或终末。19771977年年WiselWisel在巴黎国际在巴黎国际生理科学会议上，做了关于用脱氧葡萄糖生理科学会议上，做了关于用脱氧葡萄糖（DeoxyglucoseDeoxyglucose）显示皮质视区的定向柱（）显示皮质视区的定向柱（Orientation Orientation columncolumn）的报告。用脱氧葡萄糖或同位素标记的脱氧）的报告。用脱氧葡萄糖或同位素标记的脱氧葡萄糖，可以显示出处于兴奋状态的桔某一机能系统的葡萄糖，可以显示出处于兴奋状态的桔某一机能系统的神经元链。神经元链。Sok-OloffSok-Oloff等等19771977年提出年提出14C-2-14C-2-脱氧葡萄法。脱氧葡萄法。脑细胞活动增强时，对葡萄糖摄取量也相应地增加。但脑细胞活动增强时，对葡萄糖摄取量也相应地增加。但2-2-脱氧葡萄糖是葡萄糖第二个碳原子上的脱氧葡萄糖是葡萄糖第二个碳原子上的-OH-OH基所代替，基所代替，被摄取后不能转为果糖从而不能分解为二氧化碳和水，被摄取后不能转为果糖从而不能分解为二氧化碳和水，因此，积蓄于细胞内，可借放射自显影法显示出来。此因此，积蓄于细胞内，可借放射自显影法显示出来。此法可标记出某一个机能系统兴奋时的全过程。法可标记出某一个机能系统兴奋时的全过程。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。脱氧葡萄糖和免疫组织化学方法脱氧葡萄糖和免疫组织化学方法n n 自上世纪自上世纪7070年代以来，免疫组织化学方法开始用于神经解剖学的年代以来，免疫组织化学方法开始用于神经解剖学的研究，开辟了免疫神经组织化学或化学的神经解剖学，它是一门新兴研究，开辟了免疫神经组织化学或化学的神经解剖学，它是一门新兴的学科，作为生物化学与神经解剖学之间的桥梁，可有效地显示各种的学科，作为生物化学与神经解剖学之间的桥梁，可有效地显示各种神经递质、合成递质的酶以及与递质结合的受体在细胞水平的定位。神经递质、合成递质的酶以及与递质结合的受体在细胞水平的定位。它的基本概