免疫组织化学技术课件ppt

免疫组织化学技术免疫组织化学技术(immunohistochemistrytechnique)免疫组织化学技术(immunohistochemistryv免免疫疫组组织织化化学学是是根根据据抗抗原原与与抗抗体体特特异异性性结结合合的的原原理理，以以细细胞胞中中特特异异成成分分为为抗抗原原，用用标标记记的的抗抗体体在在组组织织细细胞胞原原位位通通过过抗抗原原抗抗体体反反应应和和组组织织化化学学的的呈呈色色反反应应，对对相相应应抗抗原原及及其其抗抗体体进进行行定定性性、定定位位、定定量量测测定定的的一一种种免免疫疫检检测测技技术术方方法法。免疫组织化学是根据抗原与抗体特异性结合的原理，以v基本原理：基本原理：v 抗原抗体反应抗原抗体反应标记化学反应标记化学反应呈色化学反应呈色化学反应概概述述基本原理：标记化学反应呈色化学反应概 述v与与IHCT相关的免疫学基础：相关的免疫学基础：v抗原：抗原：能刺激机体引起抗体的产生，并与相应抗能刺激机体引起抗体的产生，并与相应抗能刺激机体引起抗体的产生，并与相应抗能刺激机体引起抗体的产生，并与相应抗体发生特异性结合的物质体发生特异性结合的物质体发生特异性结合的物质体发生特异性结合的物质抗体原。抗体原。抗体原。抗体原。v抗体：抗体：针对某种抗原而产生的，并能识别相应抗针对某种抗原而产生的，并能识别相应抗针对某种抗原而产生的，并能识别相应抗针对某种抗原而产生的，并能识别相应抗原，与其发生特异性结合原，与其发生特异性结合原，与其发生特异性结合原，与其发生特异性结合与IHCT相关的免疫学基础：第一节第一节 抗原抗原 1.1.概念概念 凡能刺激机体免疫系统产生凡能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答；并能与相应的在体内特异性免疫应答；并能与相应的在体内或体外发生特异性结合的物质称为抗原或体外发生特异性结合的物质称为抗原（Antigen，Ag）。）。第一节 抗原 刺激机体免疫系统刺激机体免疫系统特异性反应特异性反应特异性反应特异性反应抗原（图示）抗原（图示）上页上页上页上页刺激机体免疫系统特异性反应特异性反应 抗原（图 抗抗原原主主要要具具有有两两方方面面的的特特性性，抗抗原原能能引引起起机机体体产产生生抗抗体体（和和/或或致致敏敏淋淋巴巴细细胞胞），称称之之为为免免疫疫原原性性；抗抗原原还还与与相相应应的的抗抗体体（及及致致敏敏淋淋巴巴细细胞胞）发发生生特特异异性性结合或反应，称为结合或反应，称为免疫反应性免疫反应性。抗原主要具有两方面的特性，抗原能引起机体产生免疫原性免疫原性抗原抗原 免疫反应性免疫反应性Fujian Blood Centerhttp:/www.fjxyzx.org/免疫原性抗原 免疫反应性Fujian Blood Cente 2.2.抗原的化学结构抗原的化学结构 一个天然抗原具有二种结构，一个天然抗原具有二种结构，一是高分子的载体（免疫原性）一是高分子的载体（免疫原性）二是抗原决定簇（特异性）二是抗原决定簇（特异性）2.抗原的化学结构3.3.抗原的性质抗原的性质 异异物物性性、大大分分子子、特特异异性性为为抗抗原原的的共共同同性性质质，凡凡种种系系越越远远、分分子子量量越越大大、构构型型越越复复杂杂、抗抗原原决决定定簇簇暴暴露露越越多多，则则其其抗抗原原性越强，特异性越高。性越强，特异性越高。3.抗原的性质抗原的免疫原性抗原的免疫原性（一）（一）异物性异物性（二）理化特性（二）理化特性 1.1.分子量分子量 2.2.化学组成和结构化学组成和结构 3.3.物理性状物理性状下页下页下页下页抗原的免疫原性（一）异物性（二）理化特性 1.分子量 异物性异物性概念：概念：指该抗原与自身正常组织成分的差异指该抗原与自身正常组织成分的差异 程度。程度。异物性分类异物性分类 异种物质异种物质 同种异体物质同种异体物质自身物质自身物质完完异物性返回概念：指该抗原与自身正常组织成分的差异异物性分类理化特性理化特性1.抗原的分子大小抗原的分子大小分子量越大，免疫原性越强：分子量越大，免疫原性越强：1.1.表面的抗原决定簇多，对淋巴表面的抗原决定簇多，对淋巴 细胞的活化作用强。细胞的活化作用强。2.2.大分子物质溶于水中呈胶体状，大分子物质溶于水中呈胶体状，化学结构较稳定，不易被机体破化学结构较稳定，不易被机体破坏或排除，体内存留时间长。坏或排除，体内存留时间长。理化特性 1.抗原的分子大小分子量越大，免疫原性越强：2.化学组成和结构 复杂 蛋白质：大分子，免疫原性强。蛋白质：大分子，免疫原性强。多糖：细菌荚膜多糖有免疫原性。多糖：细菌荚膜多糖有免疫原性。核酸：免疫原性弱核酸：免疫原性弱 核蛋白：有免疫原性。核蛋白：有免疫原性。类脂：无免疫原性类脂：无免疫原性2.化学组成和结构 复杂2.抗原分子的化学组成和结构抗原分子的化学组成和结构氨基酸残基的位置和间距与免疫原性关系氨基酸残基的位置和间距与免疫原性关系 2.抗原分子的化学组成和结构氨基酸残基的位置和间距与免疫原 3.物理性状 *含芳香族氨基酸较多的蛋白质，免疫原性强，反之则较弱 *聚合体蛋白质分子：免疫原性强 *单体可溶性蛋白质分子：免疫原性弱说明：抗原物质化学成分和结构越复 杂，其免疫原性就强。3.物理性状说明：抗原物质化学成分和结构越复 抗原的特异性抗原的特异性 1.1.即专一性能；即专一性能；2.2.是免疫应答的基本特点；是免疫应答的基本特点；3.3.是免疫学诊断与防治的理论依据；是免疫学诊断与防治的理论依据；抗原的特异性免疫反应特异性的物质基础免疫反应特异性的物质基础-抗原决定簇抗原决定簇(antigenic determinant)或或表位表位(epitope)：是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。化学基团。免疫反应特异性的物质基础-抗原决定簇(antigenic大大多多数数蛋蛋白白质质抗抗原原可可有有多多个个抗抗原原决决定定簇簇,但但由由于于空空间间位位阻阻作作用用,在在同同一一时时间间内内仅仅有有部部分分抗抗原原决决定定簇簇暴暴露露和和相相应应的的抗抗体体结结合合。抗原结合价：抗原结合价：一个抗原分子上能与相应抗体一个抗原分子上能与相应抗体 分子结合的抗原决定簇总数。分子结合的抗原决定簇总数。大多数蛋白质抗原可有多个抗原决定簇,但由共同抗原表位与交叉反应共同抗原表位与交叉反应*共同抗原（共同抗原（common antigen):两种不同抗原具有相同或相似的抗原决定簇，两种不同抗原具有相同或相似的抗原决定簇，互称共同抗原。互称共同抗原。*交叉反应：交叉反应：由共同抗原决定簇刺激机体产生由共同抗原决定簇刺激机体产生 的抗体可以和两种共同抗原结合发生反应。的抗体可以和两种共同抗原结合发生反应。天然抗原有多个抗原决定簇，故为多价抗原。天然抗原有多个抗原决定簇，故为多价抗原。半抗原仅有一个抗原决定簇，故为单价抗原。半抗原仅有一个抗原决定簇，故为单价抗原。共同抗原表位与交叉反应*共同抗原（common antige 抗抗原原的的类类型型繁繁多多，分分类类方方法法也也很很多多，故抗原的名称各种各样故抗原的名称各种各样。根据溶解性抗原有根据溶解性抗原有可溶可溶和和不溶性不溶性两类。两类。抗原的类型繁多，分类方法也很多，故抗原的名称各种各样抗原的种类抗原的种类抗原的种类返回第二节第二节 抗体抗体 1.1.抗抗体体的的概概念念 抗抗体体（antibodyantibody）是是机机体体受受抗抗原原刺刺激激后后通通过过体体液液免免疫疫应应答答，由由B B淋淋巴巴细细胞胞活活化化、增增殖殖、分分化化的的浆浆细细胞胞合合成成并并分分泌泌的的，能能与与相相应应抗抗原原发发生生特特异异性性结结合合反反应应的免疫球蛋白（的免疫球蛋白（immunoglobulinimmunoglobulin，IgIg）。）。第二节 抗体 有关概念有关概念v免疫球蛋白免疫球蛋白:是浆细胞产生的球蛋白。是浆细胞产生的球蛋白。、抗抗体体（antibodies,antibodies,AbAb）：是是机机体体免免疫疫细细胞胞受受抗抗原原物物质质刺刺激激后后产产生生的的，能能与与相相应应抗抗原原特特异异性性结结合合，并并具具有有多多种种免免疫疫学学、生生物学活性的球蛋白。物学活性的球蛋白。2 2、免免疫疫球球蛋蛋白白（immunoglobulins,Igimmunoglobulins,Ig）：指指具具有有抗抗体体活活性性或或化化学学结结构构与与抗抗体体相相似似的的球蛋白。球蛋白。v 有关概念免疫球蛋白:是浆细胞产生的球蛋白。抗抗体体是是免免疫疫球球蛋蛋白白，而而免免疫疫球球蛋蛋白白不不都具有抗体活性。都具有抗体活性。抗体是生物学和功能上的命名，抗体是生物学和功能上的命名，而而IgIg是结构和化学本质上的概念。是结构和化学本质上的概念。抗体是免疫球蛋白，而免疫球蛋白不都具有抗体活性。免疫球蛋白的免疫球蛋白的基本结构基本结构 (一一一一)重链重链重链重链（heavy chainheavy chain，HH）2 2 2 2条条条条 轻链轻链轻链轻链（light chainlight chain，L L）2 2 2 2条条条条 (二二二二)可变区（可变区（可变区（可变区（variable region,Vvariable region,V区区区区）恒定区恒定区恒定区恒定区（constant region,Cconstant region,C区）区）区）区）(三三三三)铰链区铰链区铰链区铰链区（hinge regionhinge region）(四四四四)结构域结构域结构域结构域免疫球蛋白的基本结构 IgIg单单体体的的基基本本结结构构是是由由二二条条相相同同的的轻轻链链和和二二条条相相同同的的重重链链组组成成，各各自自链链间间（轻轻重重或或重重重重链链）由由二二硫硫键键（SSSS）相连接，呈相连接，呈Y Y字构型（图解）字构型（图解）IgIg分子的氨基酸构型可分为分子的氨基酸构型可分为可变区可变区（N-N-端）和端）和恒定区恒定区（C-C-端）两部份。端）两部份。Ig单体的基本结构是由二条相同的轻链和二条相同的重链免疫组织化学技术课件ppt基本结构基本结构基本结构基本结构基本结构基本结构基本结构基本结构基本结构基本结构v可变区可变区（variableregions,V区）区）v位位于于免免疫疫球球蛋蛋白白多多肽肽链链的的N N端端，占占轻轻链链的的1/21/2与与重链的重链的1/41/4。v该该区区的的氨氨基基酸酸组组成成及及排排列列顺顺序序随随抗抗体体特特异异性性不不同而发生变化。同而发生变化。v 它赋予抗体以特异性。它赋予抗体以特异性。可变区（variable regions,V区）v恒定区恒定区（constantregions,C区）区）v位位于于免免疫疫球球蛋蛋白白多多肽肽链链的的N N端端，占占轻轻链链的的1/21/2与重链的与重链的3/43/4。v 其氨基酸组成及排列顺序都比较恒定。其氨基酸组成及排列顺序都比较恒定。恒定区（constant regions,C区）抗体的基本结构抗体的基本结构 人类人类IgIg有五类，有五类，即即IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA、IgDIgD、IgEIgE，是是由由其其分子结构中相应的重链（分子结构中相应的重链（H H链）链）、决定的。决定的。重链不同，重链不同，IgIg的类型就不同。的类型就不同。抗体的基本结构 抗体的特性抗体的特性 IgIg都都是是大大分分子子蛋蛋白白质质，既既具具有有免免疫疫原原性性，又又具具有有能能与与相相应应抗抗原原结结合合的的抗抗体体活活性。性。抗体的特性 免免疫疫原原性性的的类类属属特特异异性性是是由由IgIg分分子子的的重重链链和和轻轻链链恒恒定定区区特特定定的的氨氨基基酸酸序序列列所所决定。决定。抗抗体体特特异异性性结结合合抗抗原原的的活活性性位位点点存存在在于于IgIg的的可变区可变区。免疫原性的类属特异性是由Ig分子的重链和轻链恒定IgIg由由B B淋淋巴巴细细胞胞衍衍生生的的浆浆细细胞胞生生成成，主主要要以可溶性蛋白的形式存在于体液中。以可溶性蛋白的形式存在于体液中。IgIg的的主主要要生生物物学学功功能能有有：特特异异性性结结合合抗抗原；活化补体；结合原；活化补体；结合FcFc受体等。受体等。一一个个（IgGIgG）抗抗体体分分子子具具有有两两个个抗抗原原结结合合位点（两价）。位点（两价）。Ig由B淋巴细胞衍生的浆细胞生成，主要以可溶性蛋白的形式存血清型血清型同种异型同种异型 同一物种不同个体间的同一物种不同个体间的Ig分子所具有分子所具有(allotype)特异性不同的抗原决定簇，遗传标志。特异性不同的抗原决定簇，遗传标志。Ig具有与具有与Ag特异性结合的特性，又有免疫原性。特异性结合的特性，又有免疫原性。同种型同种型 同一物种所有个体间的同一物种所有个体间的Ig分子所共有分子所共有(isotype)的抗原特异性。的抗原特异性。独特型独特型 不同不同B细胞产生的细胞产生的Ig分子分子V区所具有区所具有(idiotype)抗原特异性标志抗原特异性标志 血清型同种异型 同一物种不同个体间的Ig分子所具有(a免疫球蛋白免疫球蛋白水解片段水解片段 1.1.木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶（Papain）IgG Fab段段(fragmentofantigen-binding,抗原结合抗原结合 片段片段)Fc段（段（fragmentcrystalizable,可结晶片段）可结晶片段）2 2.胃蛋白酶胃蛋白酶（Pepsin）IgGF(ab)2pFc 3.3.意义：阐明意义：阐明Ig分子生物学作用；分子生物学作用；构建基因工程抗体。构建基因工程抗体。免疫球蛋白水解片段酶水解免疫球蛋白示意图酶水解免疫球蛋白示意图FabFab段段(fragment antigen binding)F(ab)F(ab)2 2段：段：大片段，功大片段，功能同能同FabFab段段木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶（papain)papain)胃蛋白酶胃蛋白酶(pepsin)(pepsin)FcFc段段(fragment crystallizable)pFcpFc：小分：小分子多肽碎片，子多肽碎片，无生物学活性无生物学活性酶水解免疫球蛋白示意图Fab段(fragment antig抗体的种类抗体的种类依来源分依来源分免疫抗体；免疫抗体；天然抗体；天然抗体；自身抗体。自身抗体。依反应分依反应分完全抗体；完全抗体；不完全抗体。不完全抗体。依制备方法分依制备方法分 多克隆抗体；多克隆抗体；单克隆抗体；单克隆抗体；基因工程抗体。基因工程抗体。抗体的种类v 抗体是免疫组织化学技术的最关键试剂与抗体是免疫组织化学技术的最关键试剂与v 示踪工具。示踪工具。v 按制备方法分类：按制备方法分类：v 1 1、多克隆抗体、多克隆抗体(polyclonal antibody,PcAb)(polyclonal antibody,PcAb)v 2 2、单克隆抗体、单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)(monoclonal antibody,McAb)v 3 3、基因工程抗体、基因工程抗体(genetic engineering antibody)(genetic engineering antibody)。抗体是免疫组织化学技术的最关1、多克隆抗体、多克隆抗体：是多个：是多个B淋巴细胞克隆所产生淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。的抗体混合物。是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清。所获得的免疫血清。特异性低，会产生抗体的交特异性低，会产生抗体的交叉反应。叉反应。2 2、单克隆抗体：单克隆抗体：是一个是一个B淋巴细胞克隆分泌的淋巴细胞克隆分泌的针对单一抗原决定簇的抗体。针对单一抗原决定簇的抗体。特异性强、抗体产特异性强、抗体产量高。量高。1、多克隆抗体：是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混McAb and PcAbMcAb and PcAbv3、基因工程抗体又称重组抗体、基因工程抗体又称重组抗体 v 是指应用是指应用NDA重组及蛋白工程技术对编重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。3、基因工程抗体又称重组抗体 抗体的类型技术应用类型：1、特异性抗体（一级抗体）2、抗抗体 （二级抗体）3、标记抗体抗体的类型技术应用类型：抗体的购置及注意事项抗体的购置及注意事项 1.1.抗体的购置抗体的购置 目前商品化抗体已有目前商品化抗体已有上千种，一种抗体可以有数家公司生产，上千种，一种抗体可以有数家公司生产，其质量的好坏也存在很大差异，首先应选其质量的好坏也存在很大差异，首先应选择一家好的生产公司，根据文献提供的信择一家好的生产公司，根据文献提供的信息，选择所需试剂的型号。息，选择所需试剂的型号。抗体的购置及注意事项 1.抗体的购置 目前2.2.购置抗体的注意事项购置抗体的注意事项 (1)(1)种属：单克隆抗体，多克隆抗体种属：单克隆抗体，多克隆抗体 (2)(2)能否用于石蜡切片能否用于石蜡切片 (3)(3)稀释度稀释度 (4)(4)特异性，交叉反应特异性，交叉反应 (5)(5)用何种组织前处理形式用何种组织前处理形式 (6)(6)包装单位，价格包装单位，价格2.购置抗体的注意事项 (1)种属：单克隆抗体，多克隆抗第三节第三节 抗原抗体反应抗原抗体反应 抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。第三节 抗原抗体反应 抗原与相应抗体之间的特异性结合基本原理基本原理抗原抗体反应原理抗原抗体反应原理 AgAg决定簇和决定簇和AbAb分子超变区相互分子超变区相互 作用作用(具有互补性与亲和性具有互补性与亲和性)分子表面特异的可逆的弱结合力分子表面特异的可逆的弱结合力在极短距离内才能发生在极短距离内才能发生基本条件：基本条件：结合力结合力亲和性亲和性亲水胶体转亲水胶体转化为疏水胶体化为疏水胶体基本原理抗原抗体反应原理 Ag决定簇和Ab分子超变区相互基本抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合不形成牢固的共价键，通过非共价键结合不形成牢固的共价键，通过非共价键结合这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力 一、抗原抗体结合力一、抗原抗体结合力*1*1静电引力静电引力 *2*2范德华引力范德华引力 *3*3氢键结合力氢键结合力 *4*4疏水作用力疏水作用力抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合 一、抗原抗体结合力 抗原抗体结合力示意图抗原抗体结合力示意图抗原抗原抗体抗体氢键结合力氢键结合力 O ON NO ON NH HH H静电引力静电引力-+范得华力范得华力-+-+-+疏水作用力疏水作用力排斥的水排斥的水 抗原抗体结合力示意图抗原抗体氢键结合力 抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点*1.*1.特异性特异性 *2.*2.比例性比例性 *3.*3.可逆性可逆性 抗原抗体反应的特点*1.特异性 *2.比例性 *特异性特异性（specificityspecificity）*概念：某种概念：某种抗原分子，只能与由它刺激所产生抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗体结合而起反应的专一性能。的抗体结合而起反应的专一性能。*决定因素：决定因素：由抗原决定簇和抗体分子超变区之由抗原决定簇和抗体分子超变区之 间空间结构的互补性决定的。间空间结构的互补性决定的。*交叉反应交叉反应(cross reaction)(cross reaction)两种不同的抗原两种不同的抗原 物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇，物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇，则可与彼此相应的抗体反应。则可与彼此相应的抗体反应。特异性（specificity）*概念：某种抗 特异性示意图特异性示意图 特异性示意图 *最适比最适比(optimal ratio)(optimal ratio)或等价点或等价点(equivzlence(equivzlence point)point)最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度 比或量比。比或量比。比例性比例性（proportionalityproportionality）等价带等价带(zone of equivalence)(zone of equivalence)抗原与抗体分子抗原与抗体分子比例合适的范围。比例合适的范围。带现象：带现象：AgAg与与AbAb比例不适而不出现可见反应。比例不适而不出现可见反应。*前带前带(prezone)(prezone)抗体过量时。抗体过量时。*后带后带(postzone)(postzone)抗原过量时。抗原过量时。*最适比(optimal ratio)或等价点(equivz 比例性示意图比例性示意图抗体过量抗体过量比例合适比例合适抗原的量抗原的量抗原过量抗原过量免疫复合物沉淀的量免疫复合物沉淀的量前带前带等价带等价带后带后带 比例性示意图抗体过量比例合适抗原的免疫组织化学技术课件ppt可逆性（可逆性（reversibility)reversibility)概念：概念：是指抗原与抗体结合成复合物后，在是指抗原与抗体结合成复合物后，在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。后抗原抗体仍保持原有特性。后抗原抗体仍保持原有特性。解离条件：低解离条件：低pHpH、高浓度盐等。、高浓度盐等。常用于解离抗原抗体复合物的物质有：常用于解离抗原抗体复合物的物质有：3mol/L3mol/L硫氰化钾、硫氰化钾、pH2.4 0.1mol/LpH2.4 0.1mol/L甘氨酸、甘氨酸、7mol/L7mol/L尿素等。尿素等。可逆性（reversibility)概念：是指抗原与抗体结合抗原抗体反应影响因素抗原抗体反应影响因素一、反应物自身因素一、反应物自身因素 *抗原：抗原：1.1.理化特性理化特性 2.Ag2.Ag决定簇数量决定簇数量 3.Ag3.Ag决定簇种类决定簇种类 *抗体：抗体：1.1.来源来源 2.2.特异性与亲和力特异性与亲和力 3.3.浓度浓度二、环境条件：二、环境条件：*电解质：电解质：0.85%NaCl0.85%NaCl*酸碱度：酸碱度：pH6pH69 9*温度：温度：15154040抗原抗体反应影响因素一、反应物自身因素 二、环境条件：v受体受体(receptor)v受体在细胞生物学中是一个很泛的概念,意指任何能够同激素、神经递质、药物或细胞内的信号分子结合并能引起细胞功能变化的生物大分子,存在于细胞膜、胞浆或细胞核内。v 不同的受体有特异的结构和构型。受体(receptor)v 受体与配体结合的特异性是受体的最基本特点，保证了信号传导的正确性。v 配体和受体的结合是一种分子识别过程，它依靠氢键、离子键与范德华力的作用使两者结合，配体和受体分子空间结构的互补性是特异性结合的主要因素。受体与配体结合的特异性是受体的最基本特点，保证考查题：考查题：v 根据课题写出应用免疫组化技术部分实根据课题写出应用免疫组化技术部分实验计划（验计划（20002000字）。字）。考查题：根据课题写出应用免疫组化技术部分实验计划（v具体内容包括：具体内容包括：1-51-5部分部分v1 1、题目：、题目：应突出实验目的和对象（应突出实验目的和对象（2020字）。字）。v2 2、前言、前言：简要介绍研究的背景资料，提出需要：简要介绍研究的背景资料，提出需要解决的问题，说明实验目的和技术路线，在宏观解决的问题，说明实验目的和技术路线，在宏观上阐述免疫组化技术部分的设计方案。上阐述免疫组化技术部分的设计方案。免疫组织化学技术课件pptv3 3、材料与方法：、材料与方法：重点说明实验对象，标本来源，重点说明实验对象，标本来源，选用何种免疫染色方法，抗体及标记物的类型，选用何种免疫染色方法，抗体及标记物的类型，对照的设计等。对照的设计等。v4 4、结果和讨论：、结果和讨论：对实验可能出现的结果进行预对实验可能出现的结果进行预测并进行相关分析和讨论，阐述需要解决的关测并进行相关分析和讨论，阐述需要解决的关键问题等。键问题等。v5 5、参考文献：、参考文献：具体列出文中引用的文献，包括具体列出文中引用的文献，包括作者、题目及出处。作者、题目及出处。3、材料与方法：重点说明实验对象，标本来源，选用何种免疫染色v要求：要求：v重点说明免疫组化技术部分的设计方重点说明免疫组化技术部分的设计方案和技术流程，包括一抗的类型、来源、案和技术流程，包括一抗的类型、来源、标记物的类型、选择哪一种免疫染色方法，标记物的类型、选择哪一种免疫染色方法，采取何种对照等。采取何种对照等。v 阐述需要解决的关键问题和可能出现阐述需要解决的关键问题和可能出现的结果，并对实验的可行性进行分析。的结果，并对实验的可行性进行分析。免疫组织化学技术课件ppt