真菌学总论专题知识讲座培训课件

文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌学概述真菌学概述n n真菌（fungus），也称Eumycota，来源于拉 丁文的fungus，即蘑菇。真菌属于真核细胞 型微生物，与原核细胞型微生物有很多区别n n真菌细胞壁含有甲壳质（chitin）和-葡聚糖n n营养方式为吸收，无吞噬作用，营腐生、寄 生、共生和超寄生生活。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较 原核细胞型微生物原核细胞型微生物原核细胞型微生物原核细胞型微生物 真核细胞型微生物真核细胞型微生物真核细胞型微生物真核细胞型微生物 细胞核结构细胞核结构细胞核结构细胞核结构核膜无核膜无核膜无核膜无 有有有有核仁无核仁无核仁无核仁无 有有有有分裂方式分裂方式分裂方式分裂方式 主要以二分裂有丝分裂，减数分裂主要以二分裂有丝分裂，减数分裂主要以二分裂有丝分裂，减数分裂主要以二分裂有丝分裂，减数分裂细胞质结构细胞质结构细胞质结构细胞质结构质膜质膜质膜质膜 常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇 内膜内膜内膜内膜较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体核糖体核糖体核糖体核糖体70S80S70S80S呼吸系统呼吸系统呼吸系统呼吸系统质膜或中介体线粒体质膜或中介体线粒体质膜或中介体线粒体质膜或中介体线粒体 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌分类 我国普遍采用的是Ainsworth等分类法，与医学有关的真菌为真菌门中的四个亚门:接合亚门（接合亚门（zygomycotinazygomycotina）子囊菌亚门（子囊菌亚门（AscomycotinaAscomycotina）担子菌亚门（担子菌亚门（BasidiomycotinaBasidiomycotina）半知菌亚门（半知菌亚门（DeutermycotinaDeutermycotina）文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。n n假丝酵母菌属（Candida）n n隐球菌属（Cryptococcus）n n表皮癣菌属（Epidermophton）n n球孢子菌属（Coccidioides）n n组织胞浆菌属（Histoplastoma）文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌生物学性状真菌生物学性状n n真核细胞型微生物，属于真菌界（Kingdom Myceteae）。它具有典型的细胞核，不含叶绿素，以腐生或寄生方式摄取营养，细胞壁含几丁质（Chitin）和（或）纤维素，有完善细胞器，能进行有性生殖和（或）无性繁殖。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌生物学性状真菌生物学性状n n多数对人有益，仅少数导致人类疾病n n对人致病的真菌分为四类：病原性真菌、条件致病性真菌、产毒真菌及致癌真菌。n n目前大多数真菌的鉴定，形态学（包括真 菌形态、菌落形态）检查仍有重要意义。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。单细胞真菌单细胞真菌酵母菌：孢子，无菌丝酵母菌：孢子，无菌丝类酵母菌：芽生孢子，假菌丝类酵母菌：芽生孢子，假菌丝多细胞真菌多细胞真菌 丝状菌丝状菌（霉菌）：孢子和菌丝（霉菌）：孢子和菌丝真菌形态特征文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。n n二相型真菌二相型真菌机体内寄生机体内寄生37单细胞型：单细胞型：多细胞型：多细胞型：含动物蛋白含动物蛋白培养基培养基酵母菌酵母菌沙保氏培养基沙保氏培养基2525普通培养基普通培养基2525丝状菌丝状菌文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。二相性真菌二相性真菌 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌的基本形态结构真菌的基本形态结构菌丝菌丝孢孢子子适宜温适宜温/湿度湿度芽管芽管延长呈丝状延长呈丝状菌丝菌丝营养、气生、生殖菌丝营养、气生、生殖菌丝分支交织成团分支交织成团菌丝体菌丝体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。菌丝多形态菌丝多形态菌种鉴定菌种鉴定文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。1、真菌、真菌繁殖结构繁殖结构，一条菌丝可生成一条菌丝可生成多个孢子多个孢子真菌的基本形态结构孢子孢孢子子芽芽胞胞作用作用真菌繁殖结构真菌繁殖结构细细菌菌休休眠眠结结构构，抵御不良环境抵御不良环境低抗力低抗力 不强，加热不强，加热6070短时间即可死亡短时间即可死亡强强，有有 的的 可可 耐耐100数小时数小时文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。孢孢子子的的分分类类有性孢子：有性孢子：同一同一/不同菌体上两细胞不同菌体上两细胞融合减数分裂而成融合减数分裂而成无性孢子：无性孢子：菌丝上细胞分化生成，不菌丝上细胞分化生成，不发生细胞融合发生细胞融合。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。无性孢子无性孢子分生孢子分生孢子叶状孢子叶状孢子孢子囊孢子孢子囊孢子芽生孢子芽生孢子厚膜孢子厚膜孢子关节孢子关节孢子大分生孢子大分生孢子小分生孢子小分生孢子大多真菌行有性大多真菌行有性/无性生殖，病原性真无性生殖，病原性真菌多以无性生殖为主。菌多以无性生殖为主。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成；也可从菌丝侧面出芽形成大分生孢子的形态大分生孢子的形态文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。芽生孢子芽生孢子文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。厚膜孢子厚膜孢子文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。关节孢子关节孢子文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。孢子囊孢子文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌的生长特性营养要求不高，常用沙保氏培养基基本成分：葡萄糖、蛋白胨、琼脂生长条件：pH4.06.0 温度2228（深部 真菌37）较高的湿度、O2文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。菌菌 落落 类类 型型（1）酵母型/类酵母型（单细胞真菌菌落形式）A、湿润、柔软而致密，形态似一般细菌菌落B、镜下：酵母型 类酵母型卵圆孢子、芽生孢子芽生孢子、假菌丝文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。菌菌 落落 类类 型型（2）丝状菌落（多细胞真菌菌落形式）A、棉絮状、绒毛状、粉末状（气生菌丝体）菌落正背面呈不同颜色（可为鉴定依据）B、玻片小培养乳酚棉蓝镜下孢子、菌丝及完整菌丝体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。临床标本的采集种类（1）皮肤的角质性物质：毛发、指（趾）甲、皮屑等。（2）各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。（3）血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑 脊液、淋巴穿刺液等。（4）脓汁及渗出物。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。采集标本注意事项（1）采集的标本要适宜 不同真菌感染应采取不同的临床标 本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真菌感染应取血液、脑脊液、痰、脓汁等。（2）在用药前采集标本一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。采集标本注意事项（3 3）采集的标本量要足）采集的标本量要足 血液和脑脊液标本血液和脑脊液标本5ml5ml，胸，胸腔液腔液20ml20ml，皮屑标本两块，活体组织两份（一份，皮屑标本两块，活体组织两份（一份送病理科检查，一份作镜检和培养）。送病理科检查，一份作镜检和培养）。（4 4）严格无菌操作在采集标本时严格无菌操作，）严格无菌操作在采集标本时严格无菌操作，并进行消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标并进行消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要避免污染杂菌。本时，要避免污染杂菌。（5 5）采集的标本立即送检对采集的标本应立即送）采集的标本立即送检对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本采集后最长不超过检，特别是深部真菌标本采集后最长不超过2h2h。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌的检验方法1.镜检真菌形态2.真菌抗原检测3.真菌分离培养与鉴定4.真菌核酸检测5.真菌毒素检测 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌标本直接检查1.直接镜检：方法简便，快速10%KOH微加热低倍/高倍镜检查有无菌丝/孢子角质标本（皮肤癣菌）直接观察直接观察/染色后观察染色后观察2.抗原检测:采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫测定法。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。常用的染色方法n n常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。n n对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞氏染色或姬氏染色后镜检。氏染色或姬氏染色后镜检。n n检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。直接镜检意义阳性结果意义1.有诊断意义，如浅部真菌病、隐球菌病、皮肤粘膜假丝酵母菌病等2.代表组织相，直接镜检看到的真菌形态就是该真菌的组织形态，如假丝酵母的菌丝、浅部真菌的厚膜孢子等；确定某些致病性真菌属或种，如皮肤癣菌、曲霉等3.判断某些真菌种的致病性等 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。直接镜检意义直接镜检局限性1.阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养敏感，其敏感性随标本类型、数量、采集时间和质量等而有所不同 2.有假阳性结果，如溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新生隐球菌；脂肪微滴也可与出芽酵母细胞混淆 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。分 离 培 养n n真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。n n培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培养基的选择、培养温度与时间等有关。n n大多数真菌培养的温度为28，但深部真菌为37。对二相性真菌培养时,28培养真菌呈菌丝相（霉菌型），37培养为组织相（酵母型）。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌培养方法n n平皿培养:表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。n n大试管培养:水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。n n玻片培养(微量培养、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。观察菌落形态时注意1.1.菌落性质，是酵母菌还是霉菌。菌落性质，是酵母菌还是霉菌。2.2.菌落大小菌落大小,一般病原性真菌菌落小，而条件致病性一般病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大。真菌菌落大。3.3.菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。色深。4.4.致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉;致致病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起培养基开裂。起培养基开裂。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真 菌 鉴 定n n菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴远远不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要时将菌种送有关单位鉴定。定，必要时将菌种送有关单位鉴定。n n检验真菌常用的生化反应有糖检验真菌常用的生化反应有糖(醇醇)类发酵试验、类发酵试验、同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。试验方法同细菌试验，主试验和脲酶试验等。试验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。菌等。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。3.其他类如氟胞嘧啶。抗真菌药物分类-化学结构分类文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。1.1.作用于真菌细胞膜：两性霉素作用于真菌细胞膜：两性霉素B B、制霉菌素、氟康、制霉菌素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑及克霉唑等。唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑及克霉唑等。2.2.作用于真菌细胞壁：尼可霉素作用于真菌细胞壁：尼可霉素Z Z、卡泊芬净及普拉、卡泊芬净及普拉米星（米星（pradimicinpradimicin）等。）等。3.3.作用于真菌核酸：干扰真菌作用于真菌核酸：干扰真菌DNADNA合成，合成，5 5氟尿嘧氟尿嘧啶（啶（5 5FCFC）等。）等。4.4.其他：大蒜新素（其他：大蒜新素（allitridumallitridum）及冰醋酸（）及冰醋酸（glaciale glaciale acetic acidacetic acid）等。）等。抗真菌药物分类-作用机理分类文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。1两性霉素B 两性霉素对大多数深部致病真菌具有活性，如念珠菌、新型隐球菌、曲菌、组织胞浆菌、双向真菌等均有较强的抑制作用。但对皮肤和毛发癣菌大多耐药。2酮康唑(ketoconazole)对念珠菌、着色真菌 属、球孢子菌属等有抗菌活性，对毛发癣菌亦具抗菌活性。临床常用抗真菌药物 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。3氟康唑(fluconazole)对念珠菌、隐球菌 具有较高抗菌活性。4氟胞嘧啶 为窄谱抗生素，对念珠菌、新型隐球菌和球拟酵母有较高抗菌活性，对其他真菌抗菌作用差，易产生耐药性，故常和两性霉素B联合使用。临床常用抗真菌药物 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。5伊曲康唑(itraconazole)伊曲康唑体外有广谱抗真菌活性。对念珠菌、隐球菌、曲霉菌、组织胞浆菌、马内非青霉均有效。6伏立康唑（Voriconazole）伏立康唑适用于侵袭性曲霉病及严重真菌感染不能耐受其他药物或经其他药物治疗无效者，如足放线病菌属、镰刀菌属等感染。临床常用抗真菌药物临床常用抗真菌药物文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。抗真菌药物药敏试验原则1.提供两种以上有相当活性的抗真菌药物的可信测量方法2.和体内的活性具有相关性，可预测治疗的效果3.可用来监控敏感群体菌株的耐药性发生4.可预期研究新药的潜在治疗效能。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌药物敏感试验过程n n方法:肉汤稀释法，包括常量稀释法和微量稀释法。n n培养基:含谷氨酰胺和pH指示剂，不含碳酸氢钠RPMI 1640培养基。n n程序:药物原液配制 接种菌液制备 药液稀释 常量稀法 微量稀释法 结果判断 质量控制 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。真菌非培养检测技术n n动物试验:分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病性、研究药物对真菌的作用等。n n核酸检测:操作简便、省时省工、敏感性和特异性高的优点，但要一定的实验条件，并大多仍处于实验研究阶段，故目前不可能完全替代常规鉴定方法。n n真菌毒素的检测:生物学方法、薄层层析法、高效液相色谱法和间接竞争ELISA法等。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。常见深部真菌病动物试验鉴别要点常见深部真菌病动物试验鉴别要点常见深部真菌病动物试验鉴别要点常见深部真菌病动物试验鉴别要点 取材取材 接种动物接种途径潜伏期接种动物接种途径潜伏期 动物病变动物病变白假丝白假丝 痰、尿痰、尿 家兔、耳静脉、家兔、耳静脉、35d 35d肾脏明显肿胀，肾肾脏明显肿胀，肾酵母菌病酵母菌病 便、血便、血 小白兔腹腔小白兔腹腔 皮质部位有白色脓疡皮质部位有白色脓疡新生隐球新生隐球 脑脊液、脑脊液、小白鼠颅内、小白鼠颅内、28 28周周 死亡。取标本涂片、死亡。取标本涂片、菌病菌病 脓、痰、脓、痰、腹腔腹腔 墨汁负染色见带荚膜墨汁负染色见带荚膜 尿尿 的菌体的菌体孢子丝孢子丝 脓汁、痰液脓汁、痰液 大、小腹腔、大、小腹腔、13 13周周 肠系膜、腹膜有肉芽肠系膜、腹膜有肉芽菌病菌病 活体组织、白鼠睾丸活体组织、白鼠睾丸 组织形成，睾丸肿大组织形成，睾丸肿大 （涂片见（涂片见G+G+圆形、卵圆圆形、卵圆形形“雪茄烟雪茄烟“状小体）状小体）着色真脓汁、培养物大白鼠着色真脓汁、培养物大白鼠 腹腔、腹腔、肺、肾、腹腔呈肉芽肺、肾、腹腔呈肉芽菌病、活体组织小白鼠菌病、活体组织小白鼠 睾丸、睾丸、数周数周 肿损害肿损害 静脉静脉组织胞血、骨髓、大白鼠组织胞血、骨髓、大白鼠 腹腔、腹腔、死亡、肝、脾、肾淋死亡、肝、脾、肾淋浆菌病痰、皮肤小白鼠浆菌病痰、皮肤小白鼠 颅内颅内 12 12周周 巴结呈肉芽肿损害。巴结呈肉芽肿损害。涂片，于巨噬细胞和涂片，于巨噬细胞和大单核细胞内可查到本菌大单核细胞内可查到本菌球孢子球孢子 血液、骨髓、小白鼠、腹腔、血液、骨髓、小白鼠、腹腔、12 12周周 死亡。可从肝、脾、死亡。可从肝、脾、菌病痰、皮肤豚鼠菌病痰、皮肤豚鼠 睾丸肺等器官及腹膜找到本菌。睾丸肺等器官及腹膜找到本菌。睾丸脓肿可见典型的球孢子菌睾丸脓肿可见典型的球孢子菌