生化检验第五章酶课件

第第 五五 章章 诊断酶学诊断酶学第一节第一节 概述概述第二节第二节 酶测定技术酶测定技术第三节第三节 常用酶及同工酶测定的临床应用常用酶及同工酶测定的临床应用 教学目的教学目的 掌握掌握临床诊断中常用的血清酶及其同工酶临床诊断中常用的血清酶及其同工酶 掌握掌握酶、工具酶、同工酶等定义；酶、工具酶、同工酶等定义；酶活性测定方法及注意事项。酶活性测定方法及注意事项。熟悉熟悉血清酶基本知识血清酶基本知识 掌握掌握急性心肌梗塞、肝胆疾病的酶的种类、急性心肌梗塞、肝胆疾病的酶的种类、酶学诊断标准、及其评价酶学诊断标准、及其评价了解了解 酶的概念、特征等。酶的概念、特征等。第一节第一节概述概述Brief introduction 一、酶的概念与特征一、酶的概念与特征（一）酶的组成、结构和功能（一）酶的组成、结构和功能1.1.酶的本质和特性酶的本质和特性 酶是由活细胞产生的，具有催化功能的生物大分子物质，其酶是由活细胞产生的，具有催化功能的生物大分子物质，其化学本质绝大部分为化学本质绝大部分为蛋白质蛋白质，少数为，少数为核酸（核酶、脱氧核酶）核酸（核酶、脱氧核酶）酶的催化特性：酶的催化特性：极高的催化效率极高的催化效率;高度的特异性高度的特异性;催化作用催化作用的可调节性。的可调节性。酶促反应：酶催化的反应；酶促反应：酶催化的反应；酶活性酶活性(activity)(activity)：酶催化反应的能力；酶催化反应的能力；底物底物(substrate(substrate，S)S)：酶所作用的物质；：酶所作用的物质；产物产物(product(product，P)P)：酶促反应的生成物；酶促反应的生成物；酶的激活剂酶的激活剂(activator(activator）：加速酶促反应的物质；）：加速酶促反应的物质；酶的抑制剂酶的抑制剂(inhibitor(inhibitor）：减慢或终止酶促反应的物质）：减慢或终止酶促反应的物质本质：绝大部分是本质：绝大部分是蛋白质蛋白质，少部分酶，少部分酶蛋白复合物与核酶蛋白复合物与核酶.决定反应的性决定反应的性质和反应类型质和反应类型 决定反应的特异性及其催化机制决定反应的特异性及其催化机制 蛋白质部分：酶蛋白蛋白质部分：酶蛋白 (apoenzyme)辅助因子辅助因子 (cofactor)金属离子金属离子小分子有机化合物小分子有机化合物结合酶（全酶结合酶（全酶)(holoenzyme)2.酶的结构与功能酶的结构与功能 n n结合酶结合酶结合酶结合酶 (conjugated enzyme)(conjugated enzyme)n n单纯酶单纯酶单纯酶单纯酶 (simple enzyme)辅助因子分类辅助因子分类（按其与酶蛋白结合的紧密程度与作用特点）（按其与酶蛋白结合的紧密程度与作用特点）辅酶辅酶(coenzyme):与酶蛋白结合与酶蛋白结合疏松，可用疏松，可用透析或超滤的透析或超滤的方法除去。方法除去。（小分子有机化合物小分子有机化合物）辅基辅基(prosthetic group):与酶蛋白结合与酶蛋白结合紧密，不能用紧密，不能用透析或超透析或超滤的方法除去滤的方法除去。（。（金属离子金属离子）金属离子是最多见的辅助因子金属离子是最多见的辅助因子概念：酶的活性中心是指酶分子结构中，能与底概念：酶的活性中心是指酶分子结构中，能与底物结合，并使底物转化为产物的具有特定空间结物结合，并使底物转化为产物的具有特定空间结构的区域。构的区域。酶活性中心酶活性中心是酶分子中具有三维结构的区域，或是酶分子中具有三维结构的区域，或为裂缝，或为凹陷，深入到酶分子内部，常为氨为裂缝，或为凹陷，深入到酶分子内部，常为氨基酸残基的疏水基团组成的。基酸残基的疏水基团组成的。（二）（二）酶的催化作用机制酶的催化作用机制1.酶的活性中心酶的活性中心:一般催化剂一般催化剂一般催化剂一般催化剂反应活化能反应活化能反应活化能反应活化能反应总能量变化反应总能量变化反应总能量变化反应总能量变化酶促反应活化能酶促反应活化能酶促反应活化能酶促反应活化能非催化反应活化能非催化反应活化能非催化反应活化能非催化反应活化能初初初初 态态态态终终终终 态态态态能能 量量 改改 变变活活 化化 过过 程程酶促反应降低活化能酶促反应降低活化能过渡态过渡态酶促反应总结：1、为何具有高度催化效率降低反应活化能2、如何降低活化能形成中间产物3、如何形成中间产物诱导契合作用1.习惯命名法习惯命名法推荐名称，推荐名称，由发现者命名，常以底物由发现者命名，常以底物 名、反应性质以及酶的来源命名；名、反应性质以及酶的来源命名；2.系统命名法系统命名法系统名称，系统名称，（1961年国际酶学委员会年国际酶学委员会确确 定）每一个酶由下列三种表示：定）每一个酶由下列三种表示：1）、系统名称：底物名）、系统名称：底物名+反应性质反应性质 2）、分类编号：）、分类编号：E.C.+四个数字四个数字 3）、推荐名：选一个习惯名（实用、简单）、推荐名：选一个习惯名（实用、简单）（三）（三）酶的命名酶的命名1、氧化还原酶（、氧化还原酶（1）AH2BABH22、转移酶、转移酶（2）ABCABC3、水解酶、水解酶（3）ABH2OAOHBH4、裂合酶（、裂合酶（4）ABAB 5、异构酶、异构酶（5）AB 6、连接酶或合成酶（、连接酶或合成酶（6）ABATPABADPPi 或或 ABATPABAMPPPi六大类编号依次为六大类编号依次为 1.2.3.4.5.6亚类编号依次为亚类编号依次为 1.2.3.4.5.6.亚亚类编号依次为亚亚类编号依次为 1.2.3.4.5.6.酶的分类酶的分类（四）（四）酶的分类与编号酶的分类与编号 同工酶同工酶 是同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多肽链是同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化功能，但其分子组成、单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化功能，但其分子组成、空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细胞内定位不空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细胞内定位不同的一类酶。同的一类酶。二、同工酶的概念与特征二、同工酶的概念与特征二、同工酶的概念与特征二、同工酶的概念与特征 心肌梗死和肝病病人心肌梗死和肝病病人 血清血清LDHLDH同工酶谱的变化同工酶谱的变化1 1 1 1酶酶活活性性心肌梗死酶谱心肌梗死酶谱正常酶谱正常酶谱肝病酶谱肝病酶谱2 2 2 23 3 3 34 4 4 45 5 5 5*生理及临床意义生理及临床意义在代谢调节上起着在代谢调节上起着重要的作用；重要的作用；用于解释发育过程用于解释发育过程中阶段特有的代谢中阶段特有的代谢特征；特征；同工酶谱的改变有同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断；助于对疾病的诊断；同工酶可以作为遗同工酶可以作为遗传标志，用于遗传传标志，用于遗传分析研究。分析研究。肌酸激酶肌酸激酶 乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶 碱性磷酸酶碱性磷酸酶 酸性磷酸酶酸性磷酸酶-谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶 -淀粉酶淀粉酶 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶果糖二磷酸醛缩酶果糖二磷酸醛缩酶-N-乙酰乙酰(基基)-D氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶概念：概念：在酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或在酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶称为工具酶。酶活性的酶称为工具酶。三、工具酶三、工具酶三、工具酶三、工具酶 缩写符号写符号名称名称缩写符号写符号名称名称HDLHDL乳酸脱乳酸脱氢酶酶HKHK已糖激已糖激酶酶MDHMDH苹果酸脱苹果酸脱氢酶酶CKCK肌酸激肌酸激酶酶G-6-PDG-6-PD6-6-磷酸葡萄糖脱磷酸葡萄糖脱氢酶酶PKPK丙丙酮酸激酸激酶酶GLDHGLDH谷氨酸脱谷氨酸脱氢酶酶GKGK甘油激甘油激酶酶GODGOD葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶酶LPLLPL脂蛋白脂肪脂蛋白脂肪酶酶CODCOD胆固醇氧化胆固醇氧化酶酶CECE胆固醇胆固醇酯酶酶GPDGPD磷酸甘油氧化磷酸甘油氧化酶酶PODPOD过氧化物氧化物酶酶 常用工具酶的名称及其缩写符号常用工具酶的名称及其缩写符号uu一一一一类类类类是是是是氧氧氧氧化化化化酶酶酶酶系系系系统统统统，利利利利用用用用氧氧氧氧化化化化酶酶酶酶产产产产生生生生过过过过氧氧氧氧化化化化氢氢氢氢（H H H H2 2 2 2O O O O2 2 2 2），再再再再加上氧化发色剂进行比色，如常用的加上氧化发色剂进行比色，如常用的加上氧化发色剂进行比色，如常用的加上氧化发色剂进行比色，如常用的TinderTinderTinderTinder反应反应反应反应。uu另另另另一一一一类类类类是是是是脱脱脱脱氢氢氢氢酶酶酶酶系系系系统统统统，利利利利用用用用氧氧氧氧化化化化-还还还还原原原原酶酶酶酶反反反反应应应应使使使使其其其其连连连连接接接接到到到到NAD(P)-NAD(P)HNAD(P)-NAD(P)HNAD(P)-NAD(P)HNAD(P)-NAD(P)H的的的的正正正正/逆逆逆逆反反反反应应应应后后后后，通通通通过过过过分分分分光光光光光光光光度度度度法法法法或或或或其其其其他他他他方方方方法直接测定法直接测定法直接测定法直接测定NAD(P)HNAD(P)HNAD(P)HNAD(P)H的变化量。的变化量。的变化量。的变化量。（一）工具酶参与的指示反应（一）工具酶参与的指示反应（共通反应途径）（共通反应途径）葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法：准确度和精密度都能达到临床要求，操作简便，适用准确度和精密度都能达到临床要求，操作简便，适用于常规检验。此反应称于常规检验。此反应称TrinderTrinder反应，本法为国内推荐方反应，本法为国内推荐方法。法。葡萄糖葡萄糖+2H2O+O2葡糖酸内酯葡糖酸内酯+2H2O24-AA+酚酚+H2O2红色醌类化合物红色醌类化合物+H2OPODGOD常见的脱氢酶指示反应(二）酶循环法（二）酶循环法（enzymatic cycling enzymatic cycling methodsmethods）uu采用两种工具酶进行循环催化反应，采用两种工具酶进行循环催化反应，使被测物放大扩增，从而提高测定的使被测物放大扩增，从而提高测定的灵敏度。灵敏度。(三）代谢物浓度的酶法测定技术三）代谢物浓度的酶法测定技术 由于酶作用的特异性，成分复杂的血清等体液由于酶作用的特异性，成分复杂的血清等体液样品往往不需要进行预处理，通过温和的酶促反样品往往不需要进行预处理，通过温和的酶促反应条件，简单的实验程序，即可对各种代谢物浓应条件，简单的实验程序，即可对各种代谢物浓度进行定量分析。度进行定量分析。终点法终点法动力学法动力学法 KKmm值值值值 :K Kmm等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底 物浓度。物浓度。物浓度。物浓度。a)a)KKmm是酶的特征性常数之一；是酶的特征性常数之一；是酶的特征性常数之一；是酶的特征性常数之一；b)b)KKmm可近似表示酶对底物的亲和力；可近似表示酶对底物的亲和力；可近似表示酶对底物的亲和力；可近似表示酶对底物的亲和力；Km值大表值大表示亲和程度小，酶的催化活性低示亲和程度小，酶的催化活性低;Km值小表值小表示亲和程度大示亲和程度大,酶的催化活性高酶的催化活性高c)c)同一酶对于不同底物有不同的同一酶对于不同底物有不同的同一酶对于不同底物有不同的同一酶对于不同底物有不同的KmKm值值值值。第二节第二节 酶测定技术酶测定技术 n n正常人血中大部分酶一般在正常人血中大部分酶一般在pg-pg-ngng水平，直接测水平，直接测定酶蛋白是十分困难的定酶蛋白是十分困难的 n n常用酶学测定方法利用酶有加速化学反应的特常用酶学测定方法利用酶有加速化学反应的特性，通过测定被加速反应的反应速率，根据酶性，通过测定被加速反应的反应速率，根据酶促反应的底物减少量或产物增加量，来计算促反应的底物减少量或产物增加量，来计算酶酶活性浓度活性浓度的高低的高低 n n酶活性浓度的测定方法有量气法、酶活性浓度的测定方法有量气法、分光光度法、分光光度法、荧光法、电极法、放射性核素法荧光法、电极法、放射性核素法n n酶活性浓度测定酶活性浓度测定酶活性浓度测定酶活性浓度测定就是要使酶促反应的就是要使酶促反应的就是要使酶促反应的就是要使酶促反应的初速度初速度初速度初速度（v v v v）达到达到达到达到最大速度最大速度最大速度最大速度VmaxVmaxVmaxVmax，即在，即在，即在，即在过量底物过量底物过量底物过量底物存在存在存在存在下的下的下的下的零级反应期零级反应期零级反应期零级反应期的速度，此时的速度，此时的速度，此时的速度，此时反应速度与酶浓反应速度与酶浓反应速度与酶浓反应速度与酶浓度度度度EEEE之间之间之间之间存在存在存在存在线性线性线性线性关系。关系。关系。关系。n n按照酶促反应时间的不同可将酶活性浓度测定按照酶促反应时间的不同可将酶活性浓度测定按照酶促反应时间的不同可将酶活性浓度测定按照酶促反应时间的不同可将酶活性浓度测定方法分为两大类方法分为两大类方法分为两大类方法分为两大类:uu定时法（定时法（定时法（定时法（fixed time assayfixed time assayfixed time assayfixed time assay）uu 连续监测法（连续监测法（连续监测法（连续监测法（continuous monitoring continuous monitoring continuous monitoring continuous monitoring assayassayassayassay）。）。）。）。一、酶活性测定一、酶活性测定(一一)定定时时法法（fixed time assay）（两点法）（两点法）测测定定酶酶与与底底物物作作用用反反应应一一定定时时间间后后底底物物或或产产物物变变化化的的总总量量，计计算酶促反应平均速度算酶促反应平均速度。优优点点：比比较较简简单单，所所用用仪仪器器无无需需恒恒温温装装置置，显显色色剂剂的的选选择择也也可可不不考考虑虑对对酶酶活活性性的的影影响。响。缺缺点点：无无法法知知道道是否处于线性期。是否处于线性期。n n利用该法测定酶活性浓度，应先作预试验，了利用该法测定酶活性浓度，应先作预试验，了利用该法测定酶活性浓度，应先作预试验，了利用该法测定酶活性浓度，应先作预试验，了解解解解线性反应期线性反应期线性反应期线性反应期所在的时间段。所在的时间段。所在的时间段。所在的时间段。n n在这段时间内进行测定，在这段时间内进行测定，在这段时间内进行测定，在这段时间内进行测定，作用时间作用时间作用时间作用时间要非常要非常要非常要非常精确精确精确精确，否则会引起较大误差。否则会引起较大误差。否则会引起较大误差。否则会引起较大误差。n n精确精确精确精确 uu作用时间在线性反应期内作用时间在线性反应期内作用时间在线性反应期内作用时间在线性反应期内 uu每次测定的作用时间应相等每次测定的作用时间应相等每次测定的作用时间应相等每次测定的作用时间应相等 uuV=V=A AT T(二二)连续监测法连续监测法continuous monitoring assay又又又又称称称称速速速速率率率率法法法法或或或或动动动动力力力力学学学学法法法法，指指指指在在在在酶酶酶酶促促促促反反反反应应应应过过过过程程程程中中中中用用用用仪仪仪仪器器器器监监监监测测测测某某某某一一一一反反反反应应应应产产产产物物物物或或或或底底底底物物物物的的的的浓浓浓浓度度度度随随随随时时时时间间间间的的的的变变变变化化化化量量量量，求求求求出出出出酶酶酶酶反反反反应应应应初初初初速速速速度，间接计算酶活性浓度的方法。度，间接计算酶活性浓度的方法。度，间接计算酶活性浓度的方法。度，间接计算酶活性浓度的方法。优优优优点点点点：无无无无须须须须终终终终止止止止酶酶酶酶促促促促反反反反应应应应，不不不不需需需需添添添添加加加加其其其其它它它它成成成成色色色色试试试试剂剂剂剂，就就就就能能能能将将将将反反反反应应应应物物物物变变变变化化化化的的的的多多多多点点点点测测测测定定定定结结结结果果果果连连连连接接接接成成成成线线线线，观观观观察察察察到到到到整整整整个个个个反反反反应应应应过过过过程程程程，选选选选择择择择线线线线性性性性反反反反应应应应期期期期来来来来计计计计算算算算酶酶酶酶活活活活性性性性，结结结结果果果果准准准准确可靠。确可靠。确可靠。确可靠。要求检测仪器具有恒温装置及自要求检测仪器具有恒温装置及自要求检测仪器具有恒温装置及自要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能，自动生化分析仪都能达到动检测功能，自动生化分析仪都能达到动检测功能，自动生化分析仪都能达到动检测功能，自动生化分析仪都能达到这些要求。这些要求。这些要求。这些要求。连续监测法的时间进连续监测法的时间进程曲线程曲线连续监测法的种类连续监测法的种类 直接法直接法 是是指指待待测测酶酶酶酶促促反反应应的的底底物物或或产产物物有有特特征征性性的的理理化化性质，然后通过特殊的仪器直接检测。性质，然后通过特殊的仪器直接检测。间接法间接法 是是指指酶酶促促反反应应底底物物和和产产物物之之间间没没有有特特征征性性的的理理化化性性质质，需需通通过过另另一一个个化化学学反反应应或或生生化化反反应应，将将底底物物或或产产物物转化为有明显特征理化性质的另一个化合物。转化为有明显特征理化性质的另一个化合物。L-乳酸乳酸+NAD+丙酮酸丙酮酸+NADH+H+LD 在反应过程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同时使在反应过程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同时使NAD+还还原为原为NADH，NADH 在在340nm 处有吸收峰，因此反应会处有吸收峰，因此反应会引起引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中活性呈正比关系。中活性呈正比关系。直接法测定乳酸脱氢酶的活性直接法测定乳酸脱氢酶的活性 化学法化学法化学法化学法 在反应体系中加入一种试剂，该试剂只与酶反应物作用，产在反应体系中加入一种试剂，该试剂只与酶反应物作用，产在反应体系中加入一种试剂，该试剂只与酶反应物作用，产在反应体系中加入一种试剂，该试剂只与酶反应物作用，产生可被测量的物质变化，该试剂不和酶反应，也不影响酶的活性。生可被测量的物质变化，该试剂不和酶反应，也不影响酶的活性。生可被测量的物质变化，该试剂不和酶反应，也不影响酶的活性。生可被测量的物质变化，该试剂不和酶反应，也不影响酶的活性。酶偶联法酶偶联法酶偶联法酶偶联法 在原反应体系中加入一个或多个反应体系，与被测定的酶反在原反应体系中加入一个或多个反应体系，与被测定的酶反在原反应体系中加入一个或多个反应体系，与被测定的酶反在原反应体系中加入一个或多个反应体系，与被测定的酶反应偶联起来应偶联起来应偶联起来应偶联起来 Ex Ex 为待测酶为待测酶，A A为底物，为底物，B B为中间产物。为中间产物。A A、B B二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二个酶二个酶EiEi(为指示酶为指示酶)，其底物为，其底物为B B，反应产物反应产物为为C C可直接测定。可直接测定。酶偶联反应酶偶联反应 最简单的模式为：最简单的模式为：CBAEiEx 辅辅助助反反应应 如如果果一一些些酶酶促促反反应应找找不不到到合合适适的的指指示示酶酶与与其其直直接接偶偶联联，此此时时还还可可在在始始发发反反应应和和指指示示反反应应之之间间加加入入另另一一种种酶酶，将将二二者者连连在在一一起起，此此反反应称为辅助反应。模式为：应称为辅助反应。模式为：其中，其中，B B、C C均为中间产物，均为中间产物，EaEa、EiEi都为都为工具工具酶酶。最后一个酶称。最后一个酶称指示酶指示酶EiEi，其他外加的其他外加的酶都为辅助酶（酶都为辅助酶（EaEa）。）。DCBAEiEaEx酶偶联反应原理酶偶联反应原理当用酶偶联法测定时，在偶联反应中存在几个时期：预孵当用酶偶联法测定时，在偶联反应中存在几个时期：预孵当用酶偶联法测定时，在偶联反应中存在几个时期：预孵当用酶偶联法测定时，在偶联反应中存在几个时期：预孵育期、延滞期、恒态期、非恒态期。育期、延滞期、恒态期、非恒态期。育期、延滞期、恒态期、非恒态期。育期、延滞期、恒态期、非恒态期。延滞期是酶偶联反应与一般酶反应的一个重要区别。从酶延滞期是酶偶联反应与一般酶反应的一个重要区别。从酶延滞期是酶偶联反应与一般酶反应的一个重要区别。从酶延滞期是酶偶联反应与一般酶反应的一个重要区别。从酶反应开始至稳态期间，指示酶反应较慢且不稳定，称为延反应开始至稳态期间，指示酶反应较慢且不稳定，称为延反应开始至稳态期间，指示酶反应较慢且不稳定，称为延反应开始至稳态期间，指示酶反应较慢且不稳定，称为延滞期。在这期间指示酶反应速度不能代表测定酶量多少。滞期。在这期间指示酶反应速度不能代表测定酶量多少。滞期。在这期间指示酶反应速度不能代表测定酶量多少。滞期。在这期间指示酶反应速度不能代表测定酶量多少。设计和选择酶偶联测定方法时，延滞期越短越好，测定时设计和选择酶偶联测定方法时，延滞期越短越好，测定时设计和选择酶偶联测定方法时，延滞期越短越好，测定时设计和选择酶偶联测定方法时，延滞期越短越好，测定时间要避开此期。间要避开此期。间要避开此期。间要避开此期。对酶偶联反应的要求对酶偶联反应的要求n n待测酶待测酶待测酶待测酶反应必须是反应必须是反应必须是反应必须是零级反应零级反应零级反应零级反应，指示酶指示酶指示酶指示酶反应必须是反应必须是反应必须是反应必须是一级反应一级反应一级反应一级反应 n n指示酶反应速度与指示酶底物浓度指示酶反应速度与指示酶底物浓度指示酶反应速度与指示酶底物浓度指示酶反应速度与指示酶底物浓度(待测酶的产物待测酶的产物待测酶的产物待测酶的产物)成正比成正比成正比成正比 n n指示酶反应速率指示酶反应速率指示酶反应速率指示酶反应速率与与与与待测酶活性浓度待测酶活性浓度待测酶活性浓度待测酶活性浓度成正比成正比成正比成正比 n n待测酶的最适待测酶的最适待测酶的最适待测酶的最适pHpHpHpH与工具酶的最适与工具酶的最适与工具酶的最适与工具酶的最适pHpHpHpH接近接近接近接近 n n在一系列工具酶反应中，主要在一系列工具酶反应中，主要在一系列工具酶反应中，主要在一系列工具酶反应中，主要限速因子限速因子限速因子限速因子应该是应该是应该是应该是待待待待测酶测酶测酶测酶和和和和待测化合物待测化合物待测化合物待测化合物 方方法法条条件件的的选选择择 尽尽可可能能采采用用连连续续监监测测法法；减减少步骤少步骤,化学试剂有一定纯度化学试剂有一定纯度,双蒸水双蒸水,使用双试剂。使用双试剂。测测定定参参数数的的设设置置 方方法法类类型型、波波长长、样样品品量量与与试试剂剂量量、稀稀释释水水量量、试试剂剂吸吸光光度度上上下下限限、空空白白速速率率、反反应应孵孵育育时时间间、延延迟迟,监监测测时时间间、底底物物耗耗尽尽限限额额、线性范围及计算因子线性范围及计算因子F F值。值。标本的采集、运输与保存标本的采集、运输与保存 影响因素：溶血、抗凝剂、温度等。影响因素：溶血、抗凝剂、温度等。干扰因素的控制干扰因素的控制 反应干扰；污染；底物自行反应干扰；污染；底物自行发生反应。发生反应。(四四四四)血清酶活性浓度测定条件的选择血清酶活性浓度测定条件的选择血清酶活性浓度测定条件的选择血清酶活性浓度测定条件的选择 标本的采集、运输与保存标本的采集、运输与保存溶血：细胞内酶而言，细胞内外浓度差异大；所以应溶血：细胞内酶而言，细胞内外浓度差异大；所以应及时进行分离，及时进行分离，静脉采血后应在静脉采血后应在1 12h2h内分离血清内分离血清。抗凝剂：利用草酸盐、枸橼酸盐、抗凝剂：利用草酸盐、枸橼酸盐、EDTAEDTA抗凝的血浆抗凝的血浆一般不用作酶活性测定；肝素对一般不用作酶活性测定；肝素对ALTALT、ASTAST、CKCK、LDLD、ACPACP检测均无影响，可用于急诊；临床多用检测均无影响，可用于急诊；临床多用血清血清为首为首选测定标本。选测定标本。温度：大部分酶在低温中比较稳定，一般在血清分离温度：大部分酶在低温中比较稳定，一般在血清分离当天测定，否则应放冰箱冷藏；当天测定，否则应放冰箱冷藏；通常在通常在0 04 4 C C下使用、下使用、处理及保存处理及保存，除了一些冷变性的酶；液氮可作为酶学，除了一些冷变性的酶；液氮可作为酶学测定时血清标本及质控长期保存的方法。测定时血清标本及质控长期保存的方法。惯用单位惯用单位 惯用单位是酶活性测定方法的建立者所规惯用单位是酶活性测定方法的建立者所规定的单位。由于单位定义不同，参考范围差别很大，定的单位。由于单位定义不同，参考范围差别很大，难以进行比较。难以进行比较。国际单位（国际单位（IUIU）在特定的条件下，每分钟转化在特定的条件下，每分钟转化1 1 molmol底物的酶量为一个国际单位。底物的酶量为一个国际单位。以以IUIU表示，表示，1IU=11IU=1 mol/minmol/min。KatalKatal单单位位 在在规规定定条条件件下下，每每秒秒钟钟转转化化1mol1mol底底物物的的酶酶量量为为1kat1kat，1kat=1mol/s1kat=1mol/s。常常用用单单位位为为 katalkatal或或 nkatalnkatal。KatKat与与IUIU的换算关系为：的换算关系为：1IU=11IU=1 mol/min=16.67nmol/s=16.67nkatalmol/min=16.67nmol/s=16.67nkatal（六）酶活性浓度的单位（六）酶活性浓度的单位（六）酶活性浓度的单位（六）酶活性浓度的单位 1.1.酶活性单位酶活性单位2.2.酶活性浓度单位酶活性浓度单位 临临床床上上酶酶活活性性浓浓度度采采用用每每单单位位体体积积（升升）所所含含的的酶酶活性单位数表示。活性单位数表示。U/LU/L 酶活性浓度单位的计算酶活性浓度单位的计算 连连续续监监测测法法根根据据摩摩尔尔吸吸光光系系数数进进行行酶酶活活性性浓浓度度的的计计算。算。公式如下：公式如下：式中式中式中式中 ：V V为反应总体积为反应总体积为反应总体积为反应总体积 ;v v 为样本体积为样本体积为样本体积为样本体积 ;为摩尔吸光系数为摩尔吸光系数为摩尔吸光系数为摩尔吸光系数 ;L;L为比色杯光径为比色杯光径为比色杯光径为比色杯光径(cm)(cm)上述公式可简化为：上述公式可简化为：上述公式可简化为：上述公式可简化为：如如如如LDLD活活活活性性性性浓浓浓浓度度度度，已已已已知知知知NADHNADH的的的的 为为为为6.226.22 10103 3cmcm2 2.mol.mol-1-1，血血血血清量为清量为清量为清量为5050 l l，底物液为，底物液为，底物液为，底物液为1ml1ml，比色杯光径为，比色杯光径为，比色杯光径为，比色杯光径为1cm1cm，则，则，则，则 K=1.05K=1.05 10106 6/6.22/6.22 10 103 3 0.050.05 1=33761=3376。K KK K(七)、系数K值的计算及应用系数系数K K值的种类值的种类理论理论理论理论K K K K值值值值 实测实测实测实测K K K K值值值值 n n理论K值uuK值根据下式计算，适用于仪器处于良好工作状态的情形，波长、温度、光径、加样均没有不可接受的误差K Kn n实测K值uu当仪器不理想的工作状态，波长、温度、当仪器不理想的工作状态，波长、温度、光径、加样等有不可接受的误差时，使用光径、加样等有不可接受的误差时，使用高纯度的底物或产物作为校正物，测定实高纯度的底物或产物作为校正物，测定实际工作状态下的克分子消光系数（际工作状态下的克分子消光系数（）,然然后根据下面公式计算后根据下面公式计算KK KK 二、酶的质量测定二、酶的质量测定利用酶蛋白分子具有抗原性的特点，可以利用酶蛋白分子具有抗原性的特点，可以通过抗原抗体反应的原理直接测定酶的质通过抗原抗体反应的原理直接测定酶的质量，报告方式用质量浓度单位。量，报告方式用质量浓度单位。如用免疫学方法测定如用免疫学方法测定CK-MBCK-MB质量质量，结果用，结果用ngng/ml/ml 或或 ugug/L/L报告。报告。1.1.酶的免疫化学测定方法酶的免疫化学测定方法酶的免疫化学测定方法酶的免疫化学测定方法：放放放放射射射射免免免免疫疫疫疫测测测测定定定定（RIARIA）、免免免免疫疫疫疫抑抑抑抑制制制制法法法法、化化化化学学学学发发发发光光光光免免免免疫疫疫疫测测测测定定定定（CLIACLIA）、酶酶酶酶免疫测定（免疫测定（免疫测定（免疫测定（EIAEIA）、荧光酶免疫测定（）、荧光酶免疫测定（）、荧光酶免疫测定（）、荧光酶免疫测定（FEIAFEIA）。）。）。）。2.2.免疫化学法的结果报告方式免疫化学法的结果报告方式免疫化学法的结果报告方式免疫化学法的结果报告方式：（1 1）用酶活性浓度单位，结果以）用酶活性浓度单位，结果以）用酶活性浓度单位，结果以）用酶活性浓度单位，结果以U/LU/L表示。表示。表示。表示。（2 2）用质量浓度单位，结果直接用）用质量浓度单位，结果直接用）用质量浓度单位，结果直接用）用质量浓度单位，结果直接用ngng/ml/ml或或或或 g/Lg/L表示。表示。表示。表示。3.3.免疫化学测定法的优点免疫化学测定法的优点免疫化学测定法的优点免疫化学测定法的优点：灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶；灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶；灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶；灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶；特异性高，不受体液中其他物质的影响；特异性高，不受体液中其他物质的影响；特异性高，不受体液中其他物质的影响；特异性高，不受体液中其他物质的影响；能测定一些不表现酶活性的酶蛋白；能测定一些不表现酶活性的酶蛋白；能测定一些不表现酶活性的酶蛋白；能测定一些不表现酶活性的酶蛋白；特别适用于测定同工酶。特别适用于测定同工酶。特别适用于测定同工酶。特别适用于测定同工酶。4.4.免疫化学测定的局限性免疫化学测定的局限性免疫化学测定的局限性免疫化学测定的局限性：制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且工作量大；制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且工作量大；制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且工作量大；制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且工作量大；测定步骤多，操作繁琐；测定步骤多，操作繁琐；测定步骤多，操作繁琐；测定步骤多，操作繁琐；测定成本高。测定成本高。测定成本高。测定成本高。方法方法同工酶同工酶(或亚型或亚型)的性质的性质差异差异同工酶、亚型同工酶、亚型电泳法电泳法电荷不同电荷不同所有同工酶、亚型所有同工酶、亚型层析法层析法(离子交换层析、亲和离子交换层析、亲和层析层析)电荷不同电荷不同CKCK，LDLD，ALPALP免疫分析法免疫分析法免疫抑制法免疫抑制法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CKCK、LDLD、ACPACP免疫化学测定免疫化学测定法法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CKCK、LDLD、ACPACP、ALPALP、AMYAMY动力学分析法动力学分析法 底物特异性分析法底物特异性分析法底物底物KmKm、亲和力不同、亲和力不同ACP ACP、CKCK、LDLD（-羟羟丁丁酸）酸）抑制剂分析法抑制剂分析法对小分子量的抑制剂的对小分子量的抑制剂的特异性抑制不同特异性抑制不同LDLD（草草酸酸）、ACPACP（L-L-酒酒石石酸酸）、ALPALP（L-L-苯苯丙丙氨氨酸）酸）pHpH分析法分析法最适最适pHpH不同不同ASTAST热失活分析法热失活分析法热稳定性不同热稳定性不同ALPALP蛋白酶水解法蛋白酶水解法对蛋白水解酶敏感度不对蛋白水解酶敏感度不同同LDLD、ASTAST三、同工酶检测三、同工酶检测（一）（一）电电 泳泳 法法1.1.1.1.电电电电泳泳泳泳材材材材料料料料：醋醋醋醋酸酸酸酸纤纤纤纤维维维维素素素素薄薄薄薄膜膜膜膜、琼琼琼琼脂脂脂脂糖糖糖糖凝凝凝凝胶胶胶胶、聚聚聚聚丙丙丙丙烯烯烯烯酰酰酰酰胺凝胶、等电聚焦及毛细管电泳等。胺凝胶、等电聚焦及毛细管电泳等。胺凝胶、等电聚焦及毛细管电泳等。胺凝胶、等电聚焦及毛细管电泳等。2.2.2.2.区区区区带带带带显显显显色色色色：各各各各同同同同工工工工酶酶酶酶区区区区带带带带进进进进行行行行酶酶酶酶促促促促反反反反应应应应，利利利利用用用用底底底底物物物物、产产产产物物物物及及及及衍衍衍衍生生生生物物物物等等等等的的的的颜颜颜颜色色色色变变变变化化化化或或或或他他他他们们们们与与与与染染染染料料料料结结结结合合合合后后后后的的的的颜颜颜颜色色色色变变变变化化化化进进进进行行行行检检检检测测测测，采采采采用用用用光光光光密密密密度度度度计计计计或或或或荧荧荧荧光光光光计计计计扫扫扫扫描描描描定定定定量量量量，而颜色的深浅与同工酶活性成正比。而颜色的深浅与同工酶活性成正比。而颜色的深浅与同工酶活性成正比。而颜色的深浅与同工酶活性成正比。3.3.3.3.巨分子酶产生的原因：巨分子酶产生的原因：巨分子酶产生的原因：巨分子酶产生的原因：酶与免疫球蛋白形成复合物，如酶与免疫球蛋白形成复合物，如酶与免疫球蛋白形成复合物，如酶与免疫球蛋白形成复合物，如CK-BB-CK-BB-CK-BB-CK-BB-IgGIgGIgGIgG、CK-CK-CK-CK-MM-MM-MM-MM-IgAIgAIgAIgA、LD-LD-LD-LD-IgAIgAIgAIgA等；等；等；等；酶与其他蛋白质形成复合物，如酶与其他蛋白质形成复合物，如酶与其他蛋白质形成复合物，如酶与其他蛋白质形成复合物，如LD-LD-LD-LD-脂蛋白等；脂蛋白等；脂蛋白等；脂蛋白等；酶亚基或酶分子之间形成聚合物，如酶亚基或酶分子之间形成聚合物，如酶亚基或酶分子之间形成聚合物，如酶亚基或酶分子之间形成聚合物，如CK-MtCK-MtCK-MtCK-Mt聚合物、聚合物、聚合物、聚合物、LDLDLDLD亚基自身聚合等。亚基自身聚合等。亚基自身聚合等。亚基自身聚合等。（二）层析法（二）层析法1.1.1.1.层层层层析析析析法法法法：利利利利用用用用同同同同工工工工酶酶酶酶分分分分子子子子量量量量大大大大小小小小、所所所所带带带带电电电电荷荷荷荷多多多多少少少少的的的的不不不不同同同同，以以以以及及及及受受受受某某某某些些些些离离离离子子子子交交交交换换换换剂剂剂剂吸吸吸吸附附附附的的的的强强强强弱弱弱弱程程程程度度度度不不不不同同同同来来来来进进进进行行行行分分分分离离离离鉴鉴鉴鉴定定定定的方法。的方法。的方法。的方法。2.2.2.2.常用的是柱层析，如离子交换层析和亲和层析。常用的是柱层析，如离子交换层析和亲和层析。常用的是柱层析，如离子交换层析和亲和层析。常用的是柱层析，如离子交换层析和亲和层析。3.3.3.3.因因因因操操操操作作作作方方方方法法法法费费费费时时时时繁繁繁繁琐琐琐琐，一一一一般般般般不不不不用用用用于于于于临临临临床床床床同同同同工工工工酶酶酶酶常常常常规检测，而主要用于同工酶的分离、制备、纯化。规检测，而主要用于同工酶的分离、制备、纯化。规检测，而主要用于同工酶的分离、制备、纯化。规检测，而主要用于同工酶的分离、制备、纯化。（三）免疫分析法（三）免疫分析法 1 1 1 1免免免免疫疫疫疫抑抑抑抑制制制制法法法法 根根根根据据据据同同同同工工工工酶酶酶酶的的的的某某某某一一一一种种种种亚亚亚亚基基基基与与与与相相相相应应应应的的的的抗抗抗抗体体体体结结结结合合合合后后后后，酶酶酶酶活活活活性性性性受受受受到到到到抑抑抑抑制制制制，而而而而不不不不含含含含这这这这种种种种亚亚亚亚基基基基的的的的同同同同工工工工酶酶酶酶则则则则不不不不受受受受影影影影响响响响，测测测测定定定定加加加加与与与与不不不不加加加加抗抗抗抗体体体体前前前前后后后后样样样样品品品品中中中中酶酶酶酶活活活活性性性性的的的的变变变变化化化化，即即即即可可可可算算算算出出出出该该该该型型型型同同同同工工工工酶酶酶酶的活性。的活性。的活性。的活性。2 2 2 2免免免免疫疫疫疫沉沉沉沉淀淀淀淀法法法法 该该该该法法法法利利利利用用用用分分分分离离离离提提提提纯纯纯纯的的的的同同同同工工工工酶酶酶酶作作作作为为为为抗抗抗抗原原原原制制制制备备备备的的的的抗抗抗抗体体体体与与与与含含含含该该该该型型型型同同同同工工工工酶酶酶酶的的的的待待待待测测测测样样样样品品品品混混混混合合合合，在在在在一一一一定定定定条条条条件件件件下下下下形形形形成成成成抗抗抗抗原原原原抗抗抗抗体体体体复复复复合合合合物物物物沉沉沉沉淀淀淀淀，离离离离心心心心后后后后测测测测定定定定上上上上清清清清液液液液中中中中其其其其他他他他型型型型别别别别的的的的酶酶酶酶活活活活性性性性。利利利利用用用用加加加加入入入入抗抗抗抗体体体体前前前前测测测测得得得得的的的的总总总总酶酶酶酶活活活活性性性性减减减减去去去去上上上上清清清清液液液液中中中中的的的的酶酶酶酶活活活活性性性性，即即即即可可可可算算算算出出出出被沉淀的同工酶的活性。被沉淀的同工酶的活性。被沉淀的同工酶的活性。被沉淀的同工酶的活性。3 3 3 3其其其其他他他他免免免免疫疫疫疫学学学学方方方方法法法法测测测测定定定定酶酶酶酶蛋蛋蛋蛋白白白白 利利利利用用用用酶酶酶酶是是是是蛋蛋蛋蛋白白白白类类类类抗抗抗抗原原原原但但但但含含含含量量量量极极极极微微微微的的的的特特特特点点点点，可可可可应应应应用用用用灵灵灵灵敏敏敏敏度度度度较较较较高高高高的的的的免免免免疫疫疫疫电电电电泳泳泳泳、RIARIARIARIA、EIAEIAEIAEIA等等等等方方方方法法法法。这这这这类方法的最大特点就是与酶活性无关，而是测定酶的质量。类方法的最大特点就是与酶活性无关，而是测定酶的质量。类方法的最大特点就是与酶活性无关，而是测定酶的质量。类方法的最大特点就是与酶活性无关，而是测定酶的质量。（四）同工酶的其他分析方法（四）同工酶的其他分析方法1 1 1 1底底底底物物物物特特特特异异异异性性性性分分分分析析析析法法法法 利利利利用用用用不不不不同同同同的的的的同同同同工工工工酶酶酶酶对对对对底底底底物物物物的的的的KmKmKmKm及及及及亲亲亲亲和和和和力力力力的的的的差差差差异异异异即即即即可可可可进进进进行行行行分分分分析析析析。如如如如人人人人的的的的LDLDLDLD1 1 1 1对对对对 -羟羟羟羟丁丁丁丁酸酸酸酸的的的的亲亲亲亲和和和和力力力力较较较较大大大大KmKmKmKm为为为为0.84mmol/L0.84mmol/L0.84mmol/L0.84mmol/L，而而而而LDLDLDLD5 5 5 5对对对对 -羟羟羟羟丁丁丁丁酸酸酸酸的的的的亲亲亲亲和和和和力力力力较较较较小小小小KmKmKmKm为为为为10mmol/L10mmol/L10mmol/L10mmol/L。2 2 2 2抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂分分分分析析析析法法法法 利利利利用用用用同同同同工工工工酶酶酶酶之之之之间间间间结结结结构构构构的的的的不不不不同同同同而而而而对对对对同同同同一一一一种抑制剂有不同的亲和性和反应性来进行分析。种抑制剂有不同的亲和性和反应性来进行分析。种抑制剂有不同的亲和性和反应性来进行分析。种抑制剂有不同的亲和性和反应性来进行分析。3 3 3 3pHpHpHpH分分分分析析析析法法法法 利利利利用用用用不不不不同同同同的的的的同同同同工工工工酶酶酶酶可可可可有有有有不不不不同同同同的的的的最最最最适适适适pHpHpHpH进进进进行行行行分分分分 析析析析。如如如如 ASTASTASTAST的的的的 最最最最 适适适适 pHpHpHpH为为为为 7.47.47.47.4，当当当当 pHpHpHpH降降降降 为为为为 6.56.56.56.5时时时时，血血血血 浆浆浆浆ASTASTASTAST（ASTsASTsASTsASTs）活活活活性性性性明明明明显显显显降降降降低低低低，而而而而线线线线粒粒粒粒体体体体ASTASTASTAST（ASTmASTmASTmASTm）则则则则仍仍仍仍保保保保持活性。持活性。持活性。持活性。4 4 4 4热失活分析法热失活分析法热失活分析法热失活分析法 利用不同同工酶的耐热性不同来进行分利用不同同工酶的耐热性不同来进行分利用不同同工酶的耐热性不同来进行分利用不同同工酶的耐热性不同来进行分析与鉴定。如析与鉴定。如析与鉴定。如析与鉴定。如ALPALPALPALP同工酶对热的反应差异很大，胎盘同工酶对热的反应差异很大，胎盘同工酶对热的反应差异很大，胎盘同工酶对热的反应差异很大，胎盘ALPALPALPALP在在在在70707070高温下酶活性也无变化，而骨高温下酶活性也无变化，而骨高温下酶活性也无变化，而骨高温下酶活性也无变化，而骨ALPALPALPALP在在在在5510min5510min5510min5510min活性则活性则活性则活性则丧失过半。丧失过半。丧失过半。丧失过半。第三节第三节 常用酶及同工酶测定的临床应用常用酶及同工酶测定的临床应用 “血清酶血清酶”是指存在于血清中的酶，是指存在于血清中的酶，而非血清特定产生的。而非血清特定产生的。一、血清酶一、血清酶（一）血清酶的来源和去路（一）血清酶的来源和去路 名称名称 血浆特异酶血浆特异酶 非非血浆特异酶血浆特异酶 外分泌酶外分泌酶细胞酶细胞酶一般代谢酶一般代谢酶组织专一酶组织专一酶来源来源肝肝消化腺或其它消化腺或其它外分泌腺外分泌腺 各组织器官各组织器官 （无器官专（无器官专一性）一性）肝肝 （有器官（有器官专一性）专一性）种类种类凝血酶原、凝血酶原、因因子、子、因子、纤因子、纤溶酶原、溶酶原、ChEChE、CERCER、LCATLCAT、脂蛋脂蛋白脂肪酶等白脂肪酶等 胰淀粉酶、胰胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋脂肪酶、胰蛋白酶、白酶、ACPACP、ALPALP等等LDHLDH、ASTAST、ALTALT、CKCK等等 OCTOCT等等 1.1.1.1.血清酶的来源血清酶的来源血清酶的来源血清酶的来源 2.2.血清酶的去路血清酶的去路 (1(1）血清酶的半寿期）血清酶的半寿期 酶失活至原来活性一半时所需时间称为酶失活至原来活性一半时所需时间称为酶的半寿期酶的半寿期。一般。一般以半寿期来代表酶从血中清除的快慢。以半寿期来代表酶从血中清除的快慢。血清酶甚至同工酶之间半寿期差别很大。这些有助于了解同血清酶甚至同工酶之间半寿期差别很大。这些有助于了解同一疾病不同酶升高持续时间的差异，半寿期长的酶，在血清中一疾病不同酶升高持续时间的差异，半寿期长的酶，在血清中持续时间长。持续时间长。1 1性别性别:多数血清酶的男女性别差异不大，但少数酶如多数血清酶的男女性别差异不大，但少数酶如CK、ALP及及-GT等有性别差异，男性高于女性。等有性别差异，男性高于女性。2 2年龄年龄:血清中有些酶的活性常随年龄而变化。最明显的一个血清中有些酶的活性常随年龄而变化。最明显的一个 例子是例子是ALP 3 3进食进食:血清中大多数酶不受进食的影响，故测定酶活性不一血清中大多数酶不受进食的影响，故测定酶活性不一 定需要空腹采血。高脂、高糖饮食后血清定需要空腹采血。高脂、高糖饮食后血清ALP活性升高。活性升高。4 4运动运动:激烈的肌肉运动可使血清中多种酶，如激烈的肌肉运动可使血清中多种酶，如CK等活性升高。等活性升高。5 5妊娠妊娠:妊娠胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热妊娠胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、LD等，引起血清中这些酶升高等，引起血清中这些酶升高。6 6其他其他:血清中有些酶与同工酶有种族差异血清中有些酶与同工酶有种族差异.(二二二二)、血清酶的生理差异、血清酶的生理差异、血清酶的生理差异、血清酶的生理差异 血清酶的失活和排泄血清酶的失活和排泄 研究表明酶主要是在血管内失活或分解的，酶的清研究表明酶主要是在血管内失活或分解的，酶的清除与血浆蛋白的清除途径并不完全相同。血清酶经除与血浆蛋白的清除途径并不完全相同。血清酶经蛋白蛋白酶酶水解而产生的低分子多肽或氨基酸可经水解而产生的低分子多肽或氨基酸可经小肠粘膜小肠粘膜排至排至肠腔肠腔，再彻底分解成氨基酸后重吸收，其中大部分氨基，再彻底分解成氨基酸后重吸收，其中大部分氨基酸可被组织利用，不能利用的氨基酸可经尿排出体外。酸可被组织利用，不能利用的氨基酸可经尿排出体外。(三三)、血清酶变化的病理机制、血清酶变化的病理机制 正常情况下血清酶活性相对恒定。但在一些正常情况下血清酶活性相对恒定。但在一些病理情况下，如病理情况下，如细胞膜通透性增加或细胞坏死；细胞膜通透性增加或细胞坏死；细胞内酶合成增加；酶排泄障碍；恶性肿瘤异位细胞内酶合成增加；酶排泄障碍；恶性肿瘤异位分泌；酶合成障碍；中毒及遗传缺陷等，常导致分泌；酶合成障碍；中毒及遗传缺陷等，常导致血清中酶活性的改变。血清中酶活性的改变。(1)(1)酶合成异常酶合成异常 1 1合成减少合成减少 肝损害时肝损害时合成酶的能力受损合成酶的能力受损，血清中相应酶减少，慢性，血清中相应酶减少，慢性肝病时更为显著。肝病时更为显著。如肝病时因如肝病时因ChEChE、LCATLCAT合成的减少而使血合成的减少而使血清中酶活性浓度降低；清中酶活性浓度降低；酶基因变异酶基因变异，也可引起酶合成减少，如肝豆状核变性，也可引起酶合成减少，如肝豆状核变性 (Wilson(Wilson病病)患者，血中铜氧化酶可明显下降。患者，血中铜氧化酶可明显下降。2.合成增多合成增多 细胞对血清酶的合成增加或酶的诱导作用是血清酶细胞对血清酶的合成增加或酶的诱导作用是血清酶活性升高的重要原因。活性升高的重要原因。增生性疾病如增生性疾病如骨骼疾病骨骼疾病时，可因成骨细胞增生，合成时，可因成骨细胞增生，合成分泌更多的分泌更多的ALPALP而使血清中此酶升高。一部分恶性肿瘤患而使血清中此酶升高。一部分恶性肿瘤患者血中酶升高有可能与肿瘤细胞中酶的合成增加有关，如者血中酶升高有可能与肿瘤细胞中酶的合成增加有关，如前列腺癌细胞前列腺癌细胞可产生大量可产生大量ACPACP。(2)(2)酶释放增加酶释放增加 酶从病变酶从病变(或损伤或损伤)细胞中释放增加是疾病时大多数血清酶增细胞中释放增加是疾病时大多数血清酶增高的主要机制高的主要机制。研究表明，炎症、缺血缺氧、能源供应缺乏、。研究表明，炎症、缺血缺氧、能源供应缺乏、坏死和创伤等是细胞释放大分子酶蛋白的重要原因。细胞酶的释坏死和创伤等是细胞释放大分子酶蛋白的重要原因。细胞酶的释放量还受下述一些因素影响：放量还受下述一些因素影响：1 1细胞内外酶浓度的差异细胞内外酶浓度的差异 2 2酶的相对分子量酶的相对分子量 3 3酶的组织分布酶的组织分布 4 4酶在细胞内的定位和存在形式酶在细胞内的定位和存在形式(3)(3)酶排出异常酶排出异常 约有约有2424的血清的血清AMYAMY由由肾脏肾脏排出，肾功能减退时，血清排出，肾功能减退时，血清AMYAMY活性升高，可能因酶排泄障碍而在血液中滞留所致。活性升高，可能因酶排泄障碍而在血液中滞留所致。胆道胆道梗阻时，血清梗阻时，血清ALPALP升高的原因是梗阻区升高的原因是梗阻区ALPALP合成加强，合成加强，ALPALP排泄受阻而逆流人血。排泄受阻而逆流人血。（三）血清酶的临床应用（三）血清酶的临床应用n n临床上根据血清中酶浓度的改变可对疾病进行辅助性诊断。临床上根据血清中酶浓度的改变可对疾病进行辅助性诊断。临床上根据血清中酶浓度的改变可对疾病进行辅助性诊断。临床上根据血清中酶浓度的改变可对疾病进行辅助性诊断。uu血清中酶浓度的改变常提示