病毒性疾病标本采集保存与检测课件

Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC病毒性疾病标本采集、保存与检测病毒性疾病标本采集、保存与检测中国疾控中心病毒病所中国疾控中心病毒病所王世文王世文病毒性疾病标本采集、保存与检测中国疾控中心病毒病Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC2采采样前准前准备l包括各种采包括各种采样现场需要的器械、耗材，无菌需要的器械、耗材，无菌标本容器，采本容器，采样后后处理理试剂，低温保存，低温保存设备和个和个人防人防护装装备，以及各种采，以及各种采样表格等表格等采样前准备Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC3明确采明确采样要求要求l针对不同事件的不同事件的处置，采置，采样目的、目的、对象、象、标本本种种类各不相同，采各不相同，采样人人员需要根据事件需要根据事件或疫情或疫情的特点，制定出的特点，制定出详细的、有的、有针对性的采性的采样工作工作程序。内容主要包括：采程序。内容主要包括：采样目的、目的、对象、象、时间、部位、部位、标本量、无菌要求本量、无菌要求（一般不需要一般不需要）、标本保存与运本保存与运输条件等，并需根据条件等，并需根据现场实际情况情况进行必要的行必要的调整整明确采样要求Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC4现场采样现场采样标本采集本采集应严格按照相关生物安全格按照相关生物安全规定定进行行l保保护医医务和疾控人和疾控人员现场采样标本采集应严格按照相关生物安全规定进行Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC5现场采样现场采样血血标本本-血清血清l需采集多份血清需采集多份血清标本本l至少至少u急性期（急性期（发病病7d内或内或发现时）u恢复期（恢复期（与急性期与急性期间隔隔2-3周周）l分分别采集外周静脉血各采集外周静脉血各5ml6ml，分离后的血，分离后的血清分装于清分装于3个个塑料螺口血清管塑料螺口血清管中中u一份一份0.5ml左右，用于即将开始的左右，用于即将开始的检测u一份一份检测备份份u一份留存一份留存监测病种现场采样血标本-血清监测病种Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC6现场采样现场采样呼吸道呼吸道标本本l上呼吸道上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、痰液物、咽漱液、痰液l下呼吸道下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、胸水、肺液、胸水、肺组织活活检标本本消化道消化道标本本l患者的患者的粪便和肛拭子便和肛拭子要求：要求：发病早期即开始采集，根据病程决定病早期即开始采集，根据病程决定采集的采集的频次，采好的次，采好的标本分装于本分装于3个螺口塑料个螺口塑料试管中管中现场采样呼吸道标本Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC现场采样培训现场采样培训现场采样培训Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC8现场采样现场采样其它人体其它人体标本本l包括包括脑脊液、疱疹液、淋巴脊液、疱疹液、淋巴结穿刺液等穿刺液等l采集好的采集好的标本分装于本分装于3个螺口塑料个螺口塑料试管中管中现场采样其它人体标本Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC9尸体解剖尸体解剖l不明原因疾病的死亡病例不明原因疾病的死亡病例l尽可能采集死亡病例的所有尽可能采集死亡病例的所有组织器官器官l应根据疾病的根据疾病的临床表床表现，采集与疾病有关的重点，采集与疾病有关的重点组织器官器官标本（如肺、肝穿刺）本（如肺、肝穿刺）l做病原学研究的做病原学研究的组织标本采集得越早越好，疑似病毒性疾病本采集得越早越好，疑似病毒性疾病的的标本采集本采集时间最好不超最好不超过死后死后6hl病理病理检查的的标本不超本不超过24hl同种同种组织每一部位至少采集每一部位至少采集3份份标本，本，1份用于病原学研究份用于病原学研究（无菌采集），（无菌采集），1份用于病理学研究（固定于福份用于病理学研究（固定于福尔马林中），林中），1份用于份用于电镜检查（固定于（固定于电镜标本保存液中）本保存液中）l重要的重要的组织器官器官应多部位同多部位同时采集采集标本本现场采样现场采样尸体解剖现场采样Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC10媒介和媒介和动物物标本本l疑似疑似虫媒虫媒传染病或染病或动物源性物源性传染病染病现场采样现场采样媒介和动物标本现场采样Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC11现场采样现场采样做好做好样品品标记l样品品标记非常关非常关键，是所有，是所有标本辨本辨识的唯一的唯一标志，志，绝对不能出不能出现任何任何错误l标本采集本采集过程中，程中，应保保证采采样记录表登表登记、采、采样日志日志记录与与样品品标记同同时进行，并确保行，并确保编号号一一一一对应l样品品编号需要在号需要在标本容器表面与容器盖本容器表面与容器盖顶上同上同时进行行标记，避免容器与盖子，避免容器与盖子错配，造成配，造成标本本的交叉的交叉污染染现场采样做好样品标记Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC12发热伴血小板减少综合征监测发热伴血小板减少综合征监测采集采集标本本l血清血清l血凝血凝块l血血浆l白白细胞胞发热伴血小板减少综合征监测采集标本Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC13背景背景2004年以来，浙江、安徽、江年以来，浙江、安徽、江苏、山、山东、河南、河南、湖北等省相湖北等省相继报告一些以告一些以发热伴血小板减少伴血小板减少为主要主要表表现的感染性疾病病例，其中少数重症患者可因多的感染性疾病病例，其中少数重症患者可因多脏器衰竭器衰竭损害，救治无效死亡害，救治无效死亡l2004年，浙江、安徽等省局部地区年，浙江、安徽等省局部地区发现发热、血小板减、血小板减少散少散发病例，病例，实际发病数不病数不详，病因不明，病因不明l2005年年5月，江月，江苏报告告发热、血小板减少散、血小板减少散发病例，病例，实际发病数不病数不详，病因不明，病因不明l2005年年9月，湖北省咸宁市月，湖北省咸宁市报告告6例聚集性不明原因例聚集性不明原因发热病例，首病例，首发病例死亡，病例死亡，5为续发病例病例为首首发病例的病例的亲属，属，发病前均有在病前均有在护理首理首发病例病例过程中接触首程中接触首发病例呕病例呕出血液史。出血液史。该起疫情也未能明确病原起疫情也未能明确病原背景2004年以来，浙江、安徽、江苏、山东、河南、湖北等省相Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC14背景背景l2006年年11月，安徽省广德月，安徽省广德县报告告10例聚集性例聚集性发热伴血小板减少的病例，首伴血小板减少的病例，首发病例死亡，病例死亡，诊断断为“疑似流行性出血疑似流行性出血热”在其诊疗和护理的医务人员和家属接触者中出现在其诊疗和护理的医务人员和家属接触者中出现9例病例，其中医务人员例病例，其中医务人员4例，家属例，家属5例。续发病例。续发病例具有首发患者呕出血液和其他分泌物暴露史例具有首发患者呕出血液和其他分泌物暴露史背景2006年11月，安徽省广德县报告10例聚集性发热伴血小Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC15l经检测确确诊为嗜吞噬嗜吞噬细胞无形体病。胞无形体病。这是我国是我国首次确首次确认人粒人粒细胞无形体病胞无形体病l此后山此后山东、安徽、河南等省也相、安徽、河南等省也相继有疑似无形有疑似无形体病体病报告告Zhang Lijuan,et al.JAMA 2008,300(19):2263-2270经检测确诊为嗜吞噬细胞无形体病。这是我国首次确认人粒细胞无形Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC16背景背景l2007年年3-9月，河南省信阳市及其周月，河南省信阳市及其周边地区共地区共报告告79例疑似无形体病病例，死亡例疑似无形体病病例，死亡10例。例。针对该起疫情的病原学起疫情的病原学检测未能做出明确未能做出明确结论l2009年年3-10月，湖北随州、黄月，湖北随州、黄冈等等6个市共个市共报告告疑似无形体病病例疑似无形体病病例93例，例，6例死亡（其中随州例死亡（其中随州58例、黄例、黄冈18例）。例）。经实验室室检测，嗜吞噬，嗜吞噬细胞胞无形体均无形体均为阴性，阴性，1例病例例病例查菲埃里克体阳性菲埃里克体阳性背景2007年3-9月，河南省信阳市及其周边地区共报告79例Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC17背景背景疾病特点疾病特点l多多为急性起病，多数患者伴有乏力、急性起病，多数患者伴有乏力、纳差、差、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，部分患者出心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，部分患者出现黑便、牙黑便、牙龈出血、皮肤瘀点或瘀斑、眼出血、皮肤瘀点或瘀斑、眼结膜充膜充血等出血症状。血等出血症状。绝大多数患者白血病不高或降大多数患者白血病不高或降低、血小板减少，部分患者谷丙低、血小板减少，部分患者谷丙/谷草谷草转氨氨酶升升高、尿蛋白阳性。高、尿蛋白阳性。l病例均病例均发生在丘陵地区，生在丘陵地区，发病病时间集中在集中在5-10月。男性多于女性，且多月。男性多于女性，且多为农民。民。20岁以下及以下及80岁以上人群未以上人群未见发病。病。背景疾病特点Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC18背景背景病毒病毒细菌菌立克次体立克次体埃里克体埃里克体无形体无形体背景病毒Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC19发热伴血小板减少综合征监测发热伴血小板减少综合征监测采集采集标本本l血清血清l血凝血凝块l血血浆l白白细胞胞发热伴血小板减少综合征监测采集标本Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC20标本保存标本保存血清可在血清可在4存放存放3d、-20以下以下长期保存。期保存。用于病毒等病原分离和核酸用于病毒等病原分离和核酸检测的的标本本应尽尽快快进行行检测24h内能内能检测的的标本可置于本可置于4保存，保存，24h内内无法无法检测的的标本本则应置于置于-70或以下保存或以下保存标本保存血清可在4存放3d、-20以下长期保存。用于病毒Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC21标本运送标本运送要要严格做到生物安全格做到生物安全依据病因分析的病原体分依据病因分析的病原体分类，如果，如果为高致病高致病性病原微生物，性病原微生物，应严格按照病原微生物格按照病原微生物实验室生物安全管理条例（国室生物安全管理条例（国务院院424号令）号令）和可感染人和可感染人类的高致病性病原微生物菌的高致病性病原微生物菌（毒）种或（毒）种或样本运本运输管理管理规定（中定（中华人民人民共和国共和国卫生部第生部第45号令）号令）、人人间传染的病染的病原微生物名原微生物名录等有关等有关规定定执行行标本运送要严格做到生物安全Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC22标本检测标本检测与解释与解释标本的本的预处理理l血清血清灭活活病毒性疾病的病毒性疾病的实验室室检测方法可分方法可分为三三类，即直接，即直接检测、间接接检测和血清学和血清学检测标本检测与解释标本的预处理Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC23标本检测标本检测与解释与解释直接直接检测l直接直接检测临床床标本中病毒本中病毒颗粒、病毒抗原或病毒粒、病毒抗原或病毒核酸核酸l方法方法u电镜/免疫免疫电镜检测、组织中包涵体中包涵体检查、IFA/ELISA检测抗原、病毒核酸抗原、病毒核酸/基因基因组检测等等l特点特点u一般在一般在标本采集、送达的当天或次日就可得到本采集、送达的当天或次日就可得到结果，果，这对于需要根据于需要根据实验室室检测结果果进行行临床床处置和尽早置和尽早采取防控措施极采取防控措施极为重要，但重要，但对标本的要求也本的要求也较高，病高，病变部位部位标本的阳性本的阳性结果比其它部位的阳性果比其它部位的阳性结果果诊断意断意义大得多大得多标本检测与解释直接检测Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC24标本检测标本检测与解释与解释标本检测与解释Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC25标本检测标本检测与解释与解释抗原抗原检测常用方法常用方法l免疫免疫荧光光试验（IF）、双抗体）、双抗体夹心心ELISA法等法等lIFu优点点：快速、易于操作快速、易于操作u缺点缺点：敏感性和特异性敏感性和特异性较低低uIF试验对标本本质量的要求量的要求较高高u由于在由于在结果判定果判定时有一定主有一定主观性，需要性，需要检测人人员具具有有较丰富的丰富的经验l双抗体双抗体夹心心ELISA法法u比比IF复复杂，但敏感性和特异性，但敏感性和特异性较高高标本检测与解释抗原检测Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC26标本检测标本检测与解释与解释核酸核酸检测已已经成成为病毒性疾病病毒性疾病实验室室诊断中断中最常用的方法，最常用的方法，发挥着越来越重要的作用，着越来越重要的作用，核酸核酸检测的方法多种多的方法多种多样，主要主要包括两包括两类l不不进行病毒核酸行病毒核酸扩增的探增的探针杂交法交法l核酸核酸扩增的方法增的方法：PCR/RT-PCR/Real-time PCR）、基于核酸序列的）、基于核酸序列的扩增（如增（如NASBA）标本检测与解释核酸检测已经成为病毒性疾病实验室诊断中最常用的Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC27标本检测标本检测与解释与解释特点特点l敏感性极高、敏感性极高、简便、快速，便、快速，Real-time PCR还可以定量可以定量检测l高通量、多病原快速高通量、多病原快速检测标本检测与解释特点Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC28标本检测标本检测与解释与解释间接接检测病毒分离病毒分离l细胞培养胞培养u原代原代细胞培养胞培养u传代代细胞培养胞培养l鸡胚接种胚接种u尿囊腔尿囊腔u卵黄囊卵黄囊u.l动物接种物接种标本检测与解释间接检测病毒分离Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC29标本检测标本检测与解释与解释血清学血清学检测l在病毒学在病毒学实验室中使用最室中使用最为普遍，如急性期血清中特异性普遍，如急性期血清中特异性IgM、IgA、IgG检测等等l血清学血清学检测的方法多种多的方法多种多样，多数病毒性感染通常都可以，多数病毒性感染通常都可以采用血清学采用血清学检测的方法加以的方法加以诊断断u双抗原双抗原夹心心ELISA法、法、间接接ELISA、单扩溶血溶血试验（SRH）、中和）、中和试验（NT）、）、IgM抗体捕捉抗体捕捉ELISA法、免法、免疫疫层析法等析法等标本检测与解释血清学检测Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC30标本检测标本检测与解释与解释uIgM抗体捕捉抗体捕捉ELISA法和免疫法和免疫层析法主要用于血清中析法主要用于血清中IgM的的检测uIFA、双抗原双抗原夹心心ELISA法法、间接接ELISA和和单扩溶血溶血试验（SRH）用于）用于检测血清中全抗体血清中全抗体/IgG/中和抗体中和抗体（四倍及（四倍及四倍以上增高）四倍以上增高）标本检测与解释IgM抗体捕捉ELISA法和免疫层析法主要用于Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC31标本检测标本检测与解释与解释NT在一些病毒在一些病毒难于分离的病毒性疾病于分离的病毒性疾病实验室室检测中，成中，成为实验室确室确诊的的“金金标准准”标本检测与解释NT在一些病毒难于分离的病毒性疾病实验室检测中Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC32标本检测标本检测与解释与解释病毒性疾病的病毒性疾病的实验室室检测绝非通非通过一种一种检测方法就能方法就能够解决，一般都是通解决，一般都是通过两种或两种两种或两种以上以上检测共同完成的共同完成的质控控lSOP先先进方法与方法与传统方法方法l传统方法的改良方法的改良标本检测与解释病毒性疾病的实验室检测绝非通过一种检测方法就能Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC平阴县人民平阴县人民医院医院(Pingyin Peoples Hospital)平阴县中医院平阴县中医院(Pingyin Traditional Chinese Medicine Hospital)文登市妇幼保健院文登市妇幼保健院(Wendeng Maternity and Child Care Service Center)文登市中心医院文登市中心医院(Wendeng Central Hospital)文登开发区医院文登开发区医院(Wendeng Development zone Hospital)唾液样品质量控制SalivaSampleQualityControl对855份唾液样品进行RNasePPCR检测，占已检测样品总数的25.08%（855/3409），其中阴性5份，占0.58%（5/855)，有效样本达到99.42%（850/855)平阴县人民医院 平阴县中医院文登市妇幼保健院文登市中Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDCDBS样品质量控制DBSSampleQualityControl对724份DBS样品进行RNasePPCR检测，占已检测样品总数的22.04%（724/3285），其中阴性1份，占0.14%（1/724)，有效样本达到99.86%（723/724)平阴县人民平阴县人民医院医院(Pingyin Peoples Hospital)平阴县中医院平阴县中医院(Pingyin Traditional Chinese Medicine Hospital)文登市妇幼保健院文登市妇幼保健院(Wendeng Maternity and Child Care Service Center)文登市中心医院文登市中心医院(Wendeng Central Hospital)文登开发区医院文登开发区医院(Wendeng Development zone Hospital)DBS样品质量控制 DBS Sample Quality CInstitute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC35标本检测标本检测与解释与解释病毒性疾病的病毒性疾病的实验室室检测绝非通非通过一种一种检测方法就能方法就能够解决，一般都是通解决，一般都是通过两种或两种两种或两种以上以上检测共同完成的共同完成的质控控lSOP先先进方法与方法与传统方法方法l传统方法的改良方法的改良标本检测与解释病毒性疾病的实验室检测绝非通过一种检测方法就能Institute for Viral Disease Control and Prevention(IVDC),China CDC Thank you for Thank you for your attention your attention Thank you for your attention