水产动物营养和饲料实验培训课件

河南师范大学水水产动物物营养和养和饲料料实验河南师范大学河南师范大学水产动物营养与饲料学水产动物营养与饲料学实验内容：实验内容：模块三模块三 饲料微量成分分析饲料微量成分分析模块二模块二 饲料营养价值评定饲料营养价值评定 模块一模块一 饲料配制及加工工艺饲料配制及加工工艺2水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验：水产饲料配方设计与制作实验：水产饲料配方设计与制作一、实验目的：一、实验目的：1 1、掌握鱼虾饲料的设计方法；、掌握鱼虾饲料的设计方法；2 2、掌握鱼虾饲料配方设计的原理；、掌握鱼虾饲料配方设计的原理；3 3、能够独立设计饲料配方。、能够独立设计饲料配方。3水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验：水产饲料配方设计与制作实验：水产饲料配方设计与制作二二 、原理：、原理：由于设计商品用配合饲料，需采用多种饲料原料，由于设计商品用配合饲料，需采用多种饲料原料，同时要考虑每种饲料原料的多项营养成分，根据养殖同时要考虑每种饲料原料的多项营养成分，根据养殖对象的营养指标，设计出营养成分合理、价格最低的对象的营养指标，设计出营养成分合理、价格最低的配合饲料配方。配合饲料配方。4水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学三、实验原则：三、实验原则：1 1、能量与蛋白质的平衡、能量与蛋白质的平衡2 2、蛋白质与氨基酸的平衡、蛋白质与氨基酸的平衡3 3、钙磷需要量及比例、钙磷需要量及比例4 4、微量元素与维生素、微量元素与维生素5 5、粗纤维含量以及限度、粗纤维含量以及限度6 6、动物性饲料与植物性饲料的平衡、动物性饲料与植物性饲料的平衡7 7、日粮中其他营养物质、日粮中其他营养物质实验：水产饲料配方设计与制作实验：水产饲料配方设计与制作5水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学四、四、基本方法基本方法1)1)交叉法（交叉法（cross methodcross method）又称四角法、方形法、对角线法或图解法。在饲又称四角法、方形法、对角线法或图解法。在饲料种类不多及营养指标少的情况下，采用此法。料种类不多及营养指标少的情况下，采用此法。2)2)代数法代数法3)3)软件法软件法4)EXCEL4)EXCEL法法实验：水产饲料配方设计与制作实验：水产饲料配方设计与制作6水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验：水产饲料配方设计与制作实验：水产饲料配方设计与制作五、涉及步骤五、涉及步骤1 1、查找动物的饲养标准及营养需要；、查找动物的饲养标准及营养需要；2 2、根据就地取材，原料广泛、易得的原则，选择、根据就地取材，原料广泛、易得的原则，选择饲料原料，实测或从中国饲料数据库查出所选饲料饲料原料，实测或从中国饲料数据库查出所选饲料原料的成分及营养价值。原料的成分及营养价值。3 3、设计基本的饲料配方、设计基本的饲料配方4 4、检查饲料配方的合理性、经济性、推广性。、检查饲料配方的合理性、经济性、推广性。7水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验：水产饲料配方设计与制作实验：水产饲料配方设计与制作几种鱼的营养需要几种鱼的营养需要鱼 粗蛋白粗脂肪粗纤维粗灰分含硫氨基酸赖氨酸总磷总能MJ/kg草鱼（鱼种）304-78130.91.5 1.015.6草鱼（成鱼）254-712120.71.25 0.9 15.2 罗非鱼 308.8-10.7.883.225.120.916.6鲤鱼（成鱼）3512 1180.91.50.915.68水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学草鱼鱼种饲料配方草鱼鱼种饲料配方 草鱼成鱼饲料配方草鱼成鱼饲料配方原料组成（原料组成（%）用量用量鱼粉鱼粉7 7豆粕豆粕2424菜籽粕菜籽粕2020棉籽粕棉籽粕8 8次粉次粉2020麦麸麦麸1818豆油豆油0.50.5鱼油鱼油0.50.5磷酸氢钙磷酸氢钙1 1矿物质饲料矿物质饲料0.250.25维生素饲料维生素饲料0.250.25氯化胆碱氯化胆碱0.50.5总计总计100100原料组成（原料组成（%）用量用量鱼粉鱼粉5 5豆粕豆粕2626菜籽粕菜籽粕2020棉籽粕棉籽粕8 8次粉次粉2020麦麸麦麸1818豆油豆油0.50.5鱼油鱼油0.50.5磷酸氢钙磷酸氢钙1 1矿物质饲料矿物质饲料0.250.25维生素饲料维生素饲料0.250.25氯化胆碱氯化胆碱0.50.5总计总计1001009水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学罗非鱼饲料配方罗非鱼饲料配方 鲤鱼鱼种饲料配方鲤鱼鱼种饲料配方原料组成（原料组成（%）用量用量鱼粉鱼粉1010豆粕豆粕2222菜籽粕菜籽粕2020棉籽粕棉籽粕7 7次粉次粉2020麦麸麦麸1818豆油豆油0.50.5鱼油鱼油0.50.5磷酸氢钙磷酸氢钙1 1矿物质饲料矿物质饲料0.250.25维生素饲料维生素饲料0.250.25氯化胆碱氯化胆碱0.50.5总计总计100100原料组成（原料组成（%）用量用量鱼粉鱼粉9 9豆粕豆粕2222菜籽粕菜籽粕2020棉籽粕棉籽粕8 8次粉次粉2020麦麸麦麸1818豆油豆油0.50.5鱼油鱼油0.50.5磷酸氢钙磷酸氢钙1 1矿物质饲料矿物质饲料0.250.25维生素饲料维生素饲料0.250.25氯化胆碱氯化胆碱0.50.5总计总计10010010水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验：饲料原料的混合实验：饲料原料的混合1 1、掌握饲料原料主体成分的计量；、掌握饲料原料主体成分的计量；2 2、掌握饲料添加剂的预混合方法、掌握饲料添加剂的预混合方法3 3、掌握主体饲料原料与预混料的混合方法、掌握主体饲料原料与预混料的混合方法 一、实验目的：一、实验目的：11水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验：饲料原料的混合实验：饲料原料的混合二、实验原理：二、实验原理：为保证水产动物每餐都能采食到包含有各种营养成分为保证水产动物每餐都能采食到包含有各种营养成分的饲粮。就必须保证各组分物料在整批饲料中均匀分布，的饲粮。就必须保证各组分物料在整批饲料中均匀分布，尤其是一些添加量极少而对动物生长又影响很大的尤其是一些添加量极少而对动物生长又影响很大的“活活性成分性成分”，如维生素、微量元素、药剂及其他微量成分，如维生素、微量元素、药剂及其他微量成分等，更要求分布均匀。因此将各种饲料原料经计量配料等，更要求分布均匀。因此将各种饲料原料经计量配料后，在外力作用下各种物料组分互相掺合，使其均匀分后，在外力作用下各种物料组分互相掺合，使其均匀分布。布。12水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学三、实验材料与仪器：三、实验材料与仪器：台秤，托盘天平，铁锹，塑料大盆，花塑料布。台秤，托盘天平，铁锹，塑料大盆，花塑料布。实验：饲料原料的混合实验：饲料原料的混合13水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学四、实验步骤：四、实验步骤：1 1、用计量称将主体饲料按饲料配方比例称重、用计量称将主体饲料按饲料配方比例称重2 2、将预混料按逐级扩大的方法混合，如需特殊处、将预混料按逐级扩大的方法混合，如需特殊处理的添加剂，先做预处理。理的添加剂，先做预处理。3 3、先将主体饲料的、先将主体饲料的80%80%称好，加入预混料，之后把称好，加入预混料，之后把剩下剩下20%20%的主体饲料加到最上面进行混合，用铁锹的主体饲料加到最上面进行混合，用铁锹翻倒混合翻倒混合7-87-8次。次。实验：饲料原料的混合实验：饲料原料的混合14水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学配合饲料混合后的变异系数配合饲料混合后的变异系数10%10%预混合饲料混合后的变异系数预混合饲料混合后的变异系数5%5%五、注意：五、注意：实验：饲料原料的混合实验：饲料原料的混合15水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学水产动物饲料制粒实验一、实验目的一、实验目的1 1、学习饲料制粒机械的使用方法、学习饲料制粒机械的使用方法2 2、掌握饲料制粒加工工艺、掌握饲料制粒加工工艺 16水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学二、实验原理：二、实验原理：水产动物饲料制粒实验 通过机械作用将单一原料或配合混合料压实通过机械作用将单一原料或配合混合料压实并挤压出模孔形成的颗粒状饲料称为制粒。制粒的并挤压出模孔形成的颗粒状饲料称为制粒。制粒的目的是将细碎的、易扬尘的、适口性差的和难于装目的是将细碎的、易扬尘的、适口性差的和难于装运的饲料，利用制粒加工过程中的热、水分和压力运的饲料，利用制粒加工过程中的热、水分和压力的作用制成颗粒料的作用制成颗粒料 。17水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学三、实验材料三、实验材料 环模饲料颗粒机（附带混合机）环模饲料颗粒机（附带混合机）食用大豆油食用大豆油 水水 水产动物饲料制粒实验18水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 四、制粒步骤四、制粒步骤 1.1.将混合好的饲料加入混合机中，加入自来水进行调制，将混合好的饲料加入混合机中，加入自来水进行调制，使物料的水分达到使物料的水分达到15%15%19%19%，温度，温度808090 90。2.2.调整制粒机环模和压辊的间隙（调整制粒机环模和压辊的间隙（0.05-0.3mm0.05-0.3mm）,目测压目测压模与压辊正好接触。模与压辊正好接触。3.3.调整切刀，切成长度适宜的颗粒。调整切刀，切成长度适宜的颗粒。4.4.调整制粒机加料量，使其正好。调整制粒机加料量，使其正好。水产动物饲料制粒实验19水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料水分的测定饲料水分的测定 （GB/T6435-2006）重点及难点重点及难点:对恒重的理解对恒重的理解20水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 本标准适用于测定配合饲料和单一饲料本标准适用于测定配合饲料和单一饲料中水分含量中水分含量一、适用范围一、适用范围饲料水分的测定饲料水分的测定 21水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学二、原理二、原理 饲料样品在饲料样品在10521052烘箱内在大气压下烘干，直烘箱内在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分。至恒重，逸失的重量为水分。饲料水分的测定饲料水分的测定 22水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学三、仪器设备三、仪器设备 粉碎机、分析天平、烘箱、粉碎机、分析天平、烘箱、称样器、称样器、干燥器。干燥器。饲料水分的测定 23水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学四、测定步骤四、测定步骤 洁洁净净称称样样皿皿，在在10521052烘烘箱箱中中烘烘1h1h（以以温温度度到到105105开开始始计计时时），取取出出，盖盖好好称称样样皿皿盖盖，在在干干燥燥器器中中冷冷却却3030minmin称重。称重。再同样烘干再同样烘干1h1h，冷却称重，直至两次称重之重量差小，冷却称重，直至两次称重之重量差小于于0.002g0.002g。饲料水分的测定 24水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 称称取取2 2克克饲饲料料，在在10521052烘烘箱箱中中烘烘2h2h取取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却3030minmin称重。称重。再同样烘干再同样烘干1h1h，冷却称重，直至两次称重，冷却称重，直至两次称重之重量差小于之重量差小于0.002g0.002g。饲料水分的测定饲料水分的测定 25水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学vm1m1105105烘干前试样及称样皿质量烘干前试样及称样皿质量vm2m2105105烘干后试样及称样皿质量烘干后试样及称样皿质量vm0m0已衡重的称样皿质量已衡重的称样皿质量水分（）=饲料水分的测定 26水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定重点及难点重点及难点:1 1、试样的消煮、试样的消煮 2 2、NHNH3 3的蒸馏的蒸馏 3 3、滴定、滴定（GB/T6432-2006）27水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定 本标准适用于配合饲料，浓缩饲料和本标准适用于配合饲料，浓缩饲料和单一饲料。单一饲料。一、适用范围一、适用范围28水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定粗蛋白粗蛋白:在测定结果中蛋白质外在测定结果中蛋白质外,还有氨基还有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等故叫做粗蛋白质等故叫做粗蛋白质.29水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定 凯氏法测定试样中的含凯氏法测定试样中的含N N量，即在催化剂作用下，用量，即在催化剂作用下，用H H2 2SOSO4 4破坏有机物，使含破坏有机物，使含N N物转化成（物转化成（NHNH4 4）2 2SOSO4 4，加入，加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出测出N N含量，将结果乘以换算系数含量，将结果乘以换算系数6.256.25，计算出，计算出CPCP含量。含量。二二 原理原理30水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定其主要化学反应如下：其主要化学反应如下：1 1、2NH2NH2 2(CH(CH2 2)2 2COOH+HCOOH+H2 2SOSO4 4(NH(NH4 4)2 2SOSO4 4+6CO+6CO2 2+12SO+12SO2 2+16H+16H2 22 2、(NH(NH4 4)2 2SOSO4 4+2NaOH2NH+2NaOH2NH3 3+3H+3H2 2O+2NaO+2Na2 2SOSO4 43 3、NHNH3 3+4H+4H3 3BOBO3 3NHNH4 4HBHB4 4O O7 7+5H+5H2 2O O4 4、NHNH4 4HBHB4 4O O7 7+HCL+5H+HCL+5H2 2ONHONH4 4CL+4HCL+4H3 3BOBO3 331水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定1 1、H H2 2SOSO4 4 2 2、混合催化剂、混合催化剂(CuSO(CuSO4 4和和K K2 2SOSO4 4)3 3、NaOH (40%)NaOH (40%)4 4、硼酸吸收液、硼酸吸收液(2%)(2%)5 5、混合指示剂、混合指示剂 甲基红甲基红溴甲酚绿溴甲酚绿6 6、HClHCl标准液标准液 (0.05mol/L)(0.05mol/L)7 7、蔗糖、蔗糖 三、试剂三、试剂32水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学1 1、粉碎机、粉碎机 2 2、分样筛、分样筛 (孔径孔径0.45m m0.45m m，4040目目)3 3、分析天平（感量、分析天平（感量0.0001 g0.0001 g）4 4、消煮炉、消煮炉5 5、酸式滴定管、酸式滴定管25ml 25ml 6 6、半微量凯式定氮仪、半微量凯式定氮仪7 7、锥形瓶、锥形瓶 8 8、容量瓶、容量瓶(100ml)9(100ml)9、消煮管、消煮管 饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定四、仪器设备四、仪器设备33水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定五、测定步骤五、测定步骤1 1、试样的消煮试样的消煮 称取称取0.3g0.3g试样准确至试样准确至0.0002g0.0002g，无损的放，无损的放入消煮管中，加入硫酸铜和无水硫酸钾入消煮管中，加入硫酸铜和无水硫酸钾3g3g，与试样混合，与试样混合均匀，再加硫酸均匀，再加硫酸20ml20ml，在消煮炉上小心加热，待样品焦，在消煮炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力（化，泡沫消失，再加强火力（360-410360-410）直至溶液澄清）直至溶液澄清后，再加热消化后，再加热消化15 min 15 min。34水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学浓H H2 2SOSO4 420ml20ml 样本0.3g混合催化剂2-3g饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定35水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定2、定容定容 将消煮管中的试样消煮液冷却，加蒸馏将消煮管中的试样消煮液冷却，加蒸馏水水20ml20ml转入转入100ml100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液摇匀，为试样分解液.100ml容量瓶容量瓶36水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实饲料中粗蛋白的测定实饲料中粗蛋白的测定3、NHNH3 3的蒸馏的蒸馏 (半半微量水蒸气蒸馏法微量水蒸气蒸馏法)37水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定38水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验实验 二二 饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定39水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中粗蛋白的测定饲料中粗蛋白的测定4 4、滴定、滴定 用硼酸吸收氨后，立即用用硼酸吸收氨后，立即用0.05 mol/l0.05 mol/l的的HCLHCL标准标准液滴定，仍以混合指示剂为指示剂。溶液呈砖红色为滴液滴定，仍以混合指示剂为指示剂。溶液呈砖红色为滴定终点定终点.40水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 每每mlml的的1 mol/lHCL1 mol/lHCL标准液相当于标准液相当于0.0140 g0.0140 g的的N N。因此，。因此，粗蛋白质（粗蛋白质（%）=（v v2 2-v-v1 1）c0.0146.25 v 100c0.0146.25 v 100 m v m v/试样：试样：v v2 2试样滴定时所需酸标准溶液的体积（试样滴定时所需酸标准溶液的体积（mlml）v v1 1空白滴定时所需酸标准溶液的体积（空白滴定时所需酸标准溶液的体积（mlml）c c盐酸标准溶液的浓度盐酸标准溶液的浓度mol/lmol/l m m试样的质量（试样的质量（g g）v v试样分解液总体积（试样分解液总体积（mlml）v v/试样分解液蒸馏用体积（试样分解液蒸馏用体积（mlml）0.0140.014每每mlml盐酸标准溶液相当于盐酸标准溶液相当于N N的的g g数数 6.256.25氮换算成蛋白质的平均系数氮换算成蛋白质的平均系数五、结果计算41水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定重点及难点重点及难点:1 1、滤纸包的包法滤纸包的包法2 2、抽提完全的判断抽提完全的判断（GB/T6433-2006)42水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学一、原理一、原理 索氏脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取索氏脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取物的重量，除脂肪外还有有机酸，磷脂、脂溶性物的重量，除脂肪外还有有机酸，磷脂、脂溶性VitVit，叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚，叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。提取物。饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定43水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学无水乙醚无水乙醚二、试剂二、试剂饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定44水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学三、仪器设备三、仪器设备1 1、粉碎机、粉碎机 2 2、分样筛、分样筛 3 3、分析天平、分析天平 4 4、电热恒温水浴锅、电热恒温水浴锅 5 5、恒温烘箱、恒温烘箱 6 6、索氏脂肪提取器、索氏脂肪提取器 7 7、索氏脂肪提取仪、索氏脂肪提取仪 8 8、滤纸、滤纸 9 9、干燥器、干燥器 实验三实验三 饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定45水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学实验三实验三 饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定46水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学1 1、抽提瓶的恒重、抽提瓶的恒重在在 10521052烘箱中烘干烘箱中烘干60min60min，干燥器中冷，干燥器中冷却却30min30min，称重再烘干，称重再烘干30min30min，同样冷却称重两，同样冷却称重两次重量之差小于次重量之差小于0.0008g0.0008g为恒重。为恒重。实验三实验三 饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定四、分析步骤四、分析步骤47水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学(1)制做滤纸包(2)试样预处理(3)试样脂肪的提取2、试样的测定饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定48水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学3、脂肪和抽提瓶的恒重饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定49水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学五、结果计算五、结果计算1、计算 粗脂肪（粗脂肪（%）=式中：式中：m m风干试样重量风干试样重量 m m1 1已衡重的抽提瓶重量已衡重的抽提瓶重量 m m2 2已衡重的盛有脂肪的抽提瓶重量已衡重的盛有脂肪的抽提瓶重量 饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定50水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学2 2、重复性、重复性每试样取两个平行样进行测定每试样取两个平行样进行测定粗脂肪含量在粗脂肪含量在10%10%以上时，允许相对偏差为以上时，允许相对偏差为3%3%。粗脂肪含量在粗脂肪含量在10%10%以下时，允许相对偏差为以下时，允许相对偏差为5%5%。饲料粗脂肪的测定饲料粗脂肪的测定51水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料粗灰分的测定饲料粗灰分的测定一、适用范围一、适用范围本标准适用于配合饲料，浓缩饲料及各本标准适用于配合饲料，浓缩饲料及各种单一饲料中粗灰分测定。种单一饲料中粗灰分测定。52水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料粗灰分的测定饲料粗灰分的测定二、原理二、原理 试样在试样在550550灼烧后所得残渣，用质量百分灼烧后所得残渣，用质量百分率来表示，残渣中主要是氯化物、无机盐类等率来表示，残渣中主要是氯化物、无机盐类等矿物质也包括混入饲料中的砂石、土等、故称矿物质也包括混入饲料中的砂石、土等、故称粗灰分粗灰分。53水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料粗灰分的测定饲料粗灰分的测定三、仪器与设备三、仪器与设备1 1、分析天平、分析天平(感量感量 0.00001)0.00001)2 2、茂福炉、茂福炉 (马福炉马福炉)3 3、坩锅、坩锅 4 4、干燥器、干燥器 54水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学四、测定步骤四、测定步骤1.1.坩锅的恒重坩锅的恒重 将干净坩锅放入高温炉，在将干净坩锅放入高温炉，在5502055020下灼烧下灼烧30min30min取取出，在空气中冷却约出，在空气中冷却约 1min1min，放入干燥器中冷却，放入干燥器中冷却30min30min称重，称重，再重复灼热，冷却、称重，直至两次重量之差小于再重复灼热，冷却、称重，直至两次重量之差小于0.0005g0.0005g为恒重。为恒重。饲料粗灰分的测定55水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 2.2.试样炭化试样炭化 在已恒重的坩锅中称取在已恒重的坩锅中称取2g2g试样，准确至试样，准确至0.0002g0.0002g，在电炉上小心炭化，在炭化过程中，应将饲料在较低温在电炉上小心炭化，在炭化过程中，应将饲料在较低温状态加热灼烧至无烟。状态加热灼烧至无烟。饲料粗灰分的测定56水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 3.3.试样的灰化试样的灰化 放入高温炉于放入高温炉于5502055020灼烧灼烧3h3h，取出在空气，取出在空气中冷却约中冷却约1min1min，放入干燥器中冷却至，放入干燥器中冷却至30min30min，称重，称重，再同样灼烧再同样灼烧1h1h，冷却称重，冷却称重,直至两次质量之差直至两次质量之差小于小于0.001g0.001g为恒重。为恒重。饲料粗灰分的测定饲料粗灰分的测定57水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学六、结果计算六、结果计算 式中：式中：m m0 0 已衡重坩埚质量（已衡重坩埚质量（g g）m m1 1 坩埚加试样质量（坩埚加试样质量（g g）m m2 2 灰化后坩埚加灰分质量（灰化后坩埚加灰分质量（g g）1 1、计算、计算饲料粗灰分的测定饲料粗灰分的测定58水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学每试样取两个平行样进行测定每试样取两个平行样进行测定灰分质量在灰分质量在5%5%以上时，允许相对偏差为以上时，允许相对偏差为1%1%；粗灰分量在粗灰分量在5%5%以下时，允许相对偏差为以下时，允许相对偏差为5%5%2.重复性重复性饲料粗灰分的测定饲料粗灰分的测定59水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学本标准规定了饲料中本标准规定了饲料中CaCa的测定方法的测定方法本标准适用于配合饲料，单一饲料和浓缩饲料。本标准适用于配合饲料，单一饲料和浓缩饲料。饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 一、主题内容与适用范围一、主题内容与适用范围60水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学二、原理二、原理 将试样中有机物破坏，将试样中有机物破坏，CaCa变成溶于水的离子，用变成溶于水的离子，用草酸铵定量沉淀，用高锰酸钾法间接测定草酸铵定量沉淀，用高锰酸钾法间接测定CaCa含量。含量。饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 61水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学1 1、HCl 1:3 6HCl 1:3 6、KMnOKMnO4 4标准溶液标准溶液 (0.05mol/L)(0.05mol/L)2 2、硫酸、硫酸 1:3 71:3 7、甲基红指示剂、甲基红指示剂3 3、浓硝酸、浓硝酸 8 8、氨水、氨水 1:501:504 4、氨水、氨水 1:11:15 5、草酸铵水溶液、草酸铵水溶液4.2%4.2%三、试剂三、试剂 饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 62水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学四、仪器和设备四、仪器和设备1 1、分析天平、分析天平 6 6、玻璃漏斗、玻璃漏斗 2 2、高温炉、高温炉 7 7、定量滤纸、定量滤纸 3 3、坩锅、坩锅 8 8、移液管、移液管 4 4、容量瓶、容量瓶 9 9、烧杯、烧杯5 5、滴定管、滴定管 饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 63水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学1 1、试样的分解试样的分解 2 2、试样的测定试样的测定3 3、用滤纸过滤、用滤纸过滤五、测定步骤五、测定步骤 饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 64水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学干法：称取试样干法：称取试样2 g2 g于坩埚中，在电炉上小心炭化，于坩埚中，在电炉上小心炭化，再放入高温炉于再放入高温炉于550550下灼烧下灼烧3 3小时。在盛灰坩埚小时。在盛灰坩埚中加入盐酸溶液中加入盐酸溶液10 ml10 ml和浓硝酸数滴，小心煮沸。和浓硝酸数滴，小心煮沸。将此溶液转入将此溶液转入100 ml100 ml容量瓶，冷却至室温，用蒸容量瓶，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀为试样分解液。馏水稀释至刻度，摇匀为试样分解液。1、试样的分解、试样的分解 饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 65水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学2 2、试样的沉淀、试样的沉淀 a a 准确取试样分解液准确取试样分解液10ml10ml于烧杯中，加蒸馏水于烧杯中，加蒸馏水100 ml100 ml，甲基红指示剂甲基红指示剂2 2滴。滴。b b 滴家氨水溶液使溶液呈橙色，再加盐酸溶液使溶液恰变滴家氨水溶液使溶液呈橙色，再加盐酸溶液使溶液恰变成红色（成红色（pHpH为为2.5-3.02.5-3.0）小心著沸，漫漫滴加热草酸氨溶液）小心著沸，漫漫滴加热草酸氨溶液10 10 mlml，并不断搅拌。，并不断搅拌。C C 如溶液变橙色，应补滴盐酸溶液至红色。煮沸数分钟，如溶液变橙色，应补滴盐酸溶液至红色。煮沸数分钟，放置过夜使沉淀陈化。放置过夜使沉淀陈化。饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 66水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学a.a.1 1：5050氨水溶液洗沉淀氨水溶液洗沉淀6-86-8次，至无草酸根离子（接滤液次，至无草酸根离子（接滤液数毫升，加硫酸液数滴，加热至数毫升，加硫酸液数滴，加热至3030，再加高锰酸钾溶液，再加高锰酸钾溶液2 2滴，呈微红色，滴，呈微红色，3030秒不褪色）。秒不褪色）。b.b.将沉淀和滤纸转入原烧杯中，加入硫酸溶液将沉淀和滤纸转入原烧杯中，加入硫酸溶液10 ml,10 ml,蒸馏蒸馏水水50 ml50 ml，加热至，加热至75758585，用，用0.05 mol/l0.05 mol/l高锰酸钾标准溶高锰酸钾标准溶液滴定，溶液呈粉红色半分钟不褪色为终点。液滴定，溶液呈粉红色半分钟不褪色为终点。3.3.试样的过滤试样的过滤饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 67水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学（V-V0）C40/2六、结果计算六、结果计算式中：式中：V V 0.05 mol/l 0.05 mol/l高锰酸钾标准溶液滴定用体积（高锰酸钾标准溶液滴定用体积（mlml）V V0 0 测定空白时，测定空白时，0.05 mol/l0.05 mol/l高锰酸钾标准溶液滴定用体积（高锰酸钾标准溶液滴定用体积（mlml）C C 高锰酸钾标准溶液浓度（高锰酸钾标准溶液浓度（mol/lmol/l）M M 试样质量（试样质量（g g）V V/滴定时移取试样分解液体积（滴定时移取试样分解液体积（mlml）40/240/2 钙的钙的molmol数数MV/100Ca（%）=100/1000=（V-V0）C200MV/饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定 68水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 每个试样平行样进行测定，以其算术平均值为结果。每个试样平行样进行测定，以其算术平均值为结果。含钙量在含钙量在5%5%以上，允许相对偏差以上，允许相对偏差3%3%；含钙量含钙量5%5%1%1%时，允许相对偏差时，允许相对偏差5%5%；含钙量含钙量1%1%以下时，允许相对偏差以下时，允许相对偏差10%10%。重复性重复性饲料中饲料中CaCa含量的测定含量的测定69水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定 本标准规定了用钼黄显色光度法测定饲料本标准规定了用钼黄显色光度法测定饲料中总中总P P量的方法量的方法.本标准适用于配合饲料，浓缩饲料，预混本标准适用于配合饲料，浓缩饲料，预混合饲料和单一饲料合饲料和单一饲料.一、主题内容与适用范围一、主题内容与适用范围70水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 将试样中的有机物破坏、使将试样中的有机物破坏、使P P游离出来，在酸游离出来，在酸性溶液中，用钼酸铵处理，生成黄色的性溶液中，用钼酸铵处理，生成黄色的(NH(NH4 4)3 3POPO4 4NHNH4 4VOVO3 316M16M0 0O O3 3,在波长在波长420nm420nm下进行比色测下进行比色测定。定。二、原理二、原理饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定71水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学1、HCl 1:32 HNO3 3、钒钼酸铵显色剂三、试剂三、试剂饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定72水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学四、仪器和设备四、仪器和设备1 1、粉碎机、粉碎机 2 2、分样筛、分样筛 3 3、分析天平、分析天平 4 4、分光光度计、分光光度计 5 5、比色管、比色管饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定73水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学五、测定五、测定1 1、标准曲线的制作、标准曲线的制作 在在50ml50ml比色管中依次加比色管中依次加0 0、1 1、2 2、3 3、4 4、5 5（mlml）的标）的标准磷酸液，定容，静置半小时准磷酸液，定容，静置半小时.以以0 0号为空白溶液，在分光光度计上比色（光波为号为空白溶液，在分光光度计上比色（光波为420nm420nm）测定光密度。在方格纸上，以光密度为横轴，以浓度为纵轴，测定光密度。在方格纸上，以光密度为横轴，以浓度为纵轴，做标准曲线。做标准曲线。饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定74水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 移取试样分解液移取试样分解液5ml5ml于于50ml50ml容量瓶中，加入钒容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂钼酸铵显色剂10ml10ml，在，在722722分光光度计比色测定，分光光度计比色测定，测得试样分解液的吸光度，用标准曲线查得试样分测得试样分解液的吸光度，用标准曲线查得试样分解液的含解液的含P P量。量。2 2、试样的测定、试样的测定饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定75水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学样本中磷含量(%)=a/Wv1/v2100/10001/1000六、结果计算饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定1.1.计算计算76水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学含磷量在含磷量在0.5%0.5%以上时以上时,允许相对偏差为允许相对偏差为3%;3%;含磷量在含磷量在0.5%0.5%以下时以下时,允许相对偏差为允许相对偏差为10%10%2.2.重复性重复性饲料中总磷量的测定饲料中总磷量的测定77水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学78水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-2008 本标准规定了动物性蛋白饲料胃蛋白酶消化率的测本标准规定了动物性蛋白饲料胃蛋白酶消化率的测定方法。定方法。本标准适用于所有动物性蛋白饲料胃蛋白酶消化率本标准适用于所有动物性蛋白饲料胃蛋白酶消化率的测定，其值同体内消化率没有直接关系。的测定，其值同体内消化率没有直接关系。一一 范围范围79水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-2008 二二 原理原理:已脱过脂的试样用温热的胃蛋白酶液（酶液浓度和用量与酶解试已脱过脂的试样用温热的胃蛋白酶液（酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定），在恒温，持续不断地振摇或搅拌下消化样质量恒定），在恒温，持续不断地振摇或搅拌下消化16h16h，过滤分，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的粗蛋白质含量，同时测定离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的粗蛋白质含量，同时测定脱脂未酶解试样的蛋白质含量。脱脂未酶解试样的蛋白质含量。80水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学河南师范大学河南师范大学动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-2008恒温式平转摇床：温控范围恒温式平转摇床：温控范围20-5020-50，水浴式，水浴式或空气浴式均可，转速可调（或空气浴式均可，转速可调（15r/min-300r/min15r/min-300r/min）.实验室用样品粉碎机实验室用样品粉碎机索氏抽提器、脱脂设备索氏抽提器、脱脂设备定氮仪器、设备定氮仪器、设备实验室常用仪器设备实验室常用仪器设备四四 仪器与设备仪器与设备82水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学v五五 测定步骤测定步骤 1 1 脱脂脱脂 称取称取3-43-4克试样用乙醚脱脂（含脂肪小于克试样用乙醚脱脂（含脂肪小于1%1%可不脱脂，可不脱脂，含脂肪含脂肪1%-10%1%-10%建议脱脂，含脂肪大于建议脱脂，含脂肪大于10%10%则应脱脂）。脱则应脱脂）。脱脂方法可参照脂方法可参照GB/T6433GB/T6433中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后样品需在室温风干，去掉乙醚。样品需在室温风干，去掉乙醚。动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200883水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学2 2 胃蛋白酶消化胃蛋白酶消化 称取已脱脂风干后的试样称取已脱脂风干后的试样1.000g1.000g（精确至（精确至0.0010g0.0010g）250ml250ml带盖磨口瓶中，加带盖磨口瓶中，加150ml150ml新配制的并已新配制的并已预热至预热至42-4542-45的胃蛋白酶夜，应确保样品完全被胃蛋的胃蛋白酶夜，应确保样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将瓶夹于恒温摇床上，于白酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将瓶夹于恒温摇床上，于4545恒定速度搅动恒定速度搅动16h16h进行保温酶解消化。进行保温酶解消化。动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200884水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 从搅动器上取下磨口瓶，呈从搅动器上取下磨口瓶，呈4545度角放置，让残渣沉淀度角放置，让残渣沉淀15min15min以上，随后在铺有快速滤纸的布氏滤纸上抽滤，先以上，随后在铺有快速滤纸的布氏滤纸上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸，再将磨口瓶保持沉用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液体滤过滤纸的速度应与倾入的速度相同。体滤过滤纸的速度应与倾入的速度相同。3 3 消化残渣的处理消化残渣的处理动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200885水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入15ml15ml丙酮，用拇丙酮，用拇指盖住瓶盖剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸指盖住瓶盖剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和残渣流到滤纸上。上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份再用一份15ml15ml的丙酮进行洗涤。照上法振摇和倒出。检查的丙酮进行洗涤。照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。从布氏漏瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损地移入凯氏烧瓶中，斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损地移入凯氏烧瓶中，并将凯氏烧瓶置于并将凯氏烧瓶置于105105烘箱内烘干。烘箱内烘干。动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200886水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 4 4 粗蛋白质的测定粗蛋白质的测定 将上述已烘干的残渣按将上述已烘干的残渣按GB/T6432GB/T6432中方法测定粗蛋白质中方法测定粗蛋白质的质量分数的质量分数(w2)(w2)，测定残渣粗蛋白质时应从每个样品残渣，测定残渣粗蛋白质时应从每个样品残渣粗蛋白质中减去酶液的空白值。同时称取脱脂风干样品若粗蛋白质中减去酶液的空白值。同时称取脱脂风干样品若干克（精确至干克（精确至0.0002g0.0002g）直接按）直接按GB/T6432GB/T6432测定脱脂未酶解测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（的样品中粗蛋白质的质量分数（w1w1）。）。动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200887水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学六 分析结果的表述：1 1 试样胃蛋白酶消化率试样胃蛋白酶消化率X,X,以质量分数计，数值以以质量分数计，数值以%表示，按表示，按式（式（1 1）计算：）计算：X=W1W1-W2100.(1)动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200888水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学式中式中：w1-w1-脱脂未酶解的样品中粗蛋白的脱脂未酶解的样品中粗蛋白的 质量分数，质量分数，%W2-W2-脱脂酶解后残渣中蛋白质的质量分数，脱脂酶解后残渣中蛋白质的质量分数，%动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200889水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学2 2 注意：注意：每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白的质量分数，以其算术平均值平行测定残渣粗蛋白的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果相对为测定结果（保留三位有效数字），测定结果相对偏差偏差6%6%。每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结定粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果相对偏差应符果（保留三位有效数字），测定结果相对偏差应符合合GB/T6432GB/T6432中规定的相对偏差允许范围。中规定的相对偏差允许范围。每个试样胃蛋白酶消化率测定结果保留三位每个试样胃蛋白酶消化率测定结果保留三位有效数字。有效数字。动物性蛋白质饲料动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定胃蛋白酶消化率的测定（过滤法）（过滤法）GB/T17811-2008GB/T17811-200890水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）用分光光度法测定饲料添加剂中木聚用分光光度法测定饲料添加剂中木聚糖酶的活力。糖酶的活力。一 范围91水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学二 原理 木聚糖酶能将木聚糖降解为寡糖和单糖，还原性寡糖木聚糖酶能将木聚糖降解为寡糖和单糖，还原性寡糖和单糖在沸水浴下和和单糖在沸水浴下和3,5-3,5-二硝基水杨酸（二硝基水杨酸（DNSDNS）发生显色）发生显色反应，反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，反应，反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液木聚糖酶的活力。应液木聚糖酶的活力。木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）92水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 三三 试剂与仪器试剂与仪器木聚糖木聚糖木糖标准液木糖标准液3,5-3,5-二硝基水杨酸（二硝基水杨酸（DNSDNS）木聚糖酶液木聚糖酶液电炉子电炉子可见分光光度计可见分光光度计恒温水浴锅恒温水浴锅漩涡振荡器漩涡振荡器移液器（移液器（200200l l，10001000l l）25ml25ml比色管比色管25 ml25 ml试管试管木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）93水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学 四四 测定步骤测定步骤 1 1 绘制标准曲线绘制标准曲线 按照下表进行标准曲线制作：按照下表进行标准曲线制作：按下表操作后，将试按下表操作后，将试管于沸水浴中沸腾管于沸水浴中沸腾5 5分钟（样品放入重新沸腾时算起），分钟（样品放入重新沸腾时算起），取出后冷却定容后，在分光光度计取出后冷却定容后，在分光光度计540nm540nm比色，以所得的比色，以所得的光密度光密度ODOD值为纵座标，以对应的标准木糖液浓度（即：值为纵座标，以对应的标准木糖液浓度（即：200200，300300，400400，500500，600600，700700，此为每管中木糖的，此为每管中木糖的g g数）数）为横座标，绘制标准曲线。以为横座标，绘制标准曲线。以0 0管调零，标线不设管调零，标线不设0 0点。点。木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）94水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学序号木糖标准液1mg/ml(ml)双蒸水(ml)DNS(ml)对应木糖含量（g）002.03.03.0010.21.820020.41.640030.61.460040.81.280051.01.01000木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）95水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学2.2.酶活力测定酶活力测定 在试验管加入在试验管加入1.8ml1.8ml底物，底物，5050水浴中预热水浴中预热5min5min后，后，加入加入200l200l适当稀释的酶液（使适当稀释的酶液（使ODOD值在值在0.1-0.70.1-0.7之间），之间），混匀。精确反应混匀。精确反应5min5min后迅速冷却（置于冰浴中），加入后迅速冷却（置于冰浴中），加入3.0ml DNS3.0ml DNS试剂，混匀。沸水浴试剂，混匀。沸水浴5min5min取出试管，加入取出试管，加入10ml10ml蒸馏水，冷却至室温，然后在蒸馏水，冷却至室温，然后在540nm540nm处测定样品中的木糖处测定样品中的木糖含量；含量；木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）96水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学按照下式计算样品的木聚糖酶的活力：按照下式计算样品的木聚糖酶的活力：木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）97水产动物营养和饲料实验河南师范大学河南师范大学UU木聚糖酶活力，木聚糖酶活力，u/gu/g；XX根据吸光度在标准曲线上查得（或从回归方程计算出）的还原根据吸光度在标准曲线上查得（或从回归方程计算出）的还原糖生成量，糖生成量，gg；VV样品提取时加入水的量（样品提取时加入水的量（mlml）；）；NN样品二次稀释时的稀释倍数；样品二次稀释时的稀释倍数；0.20.2参与反应的酶量（参与反应的酶量（mlml）；）；WW样品重量（样品重量（g g）；）；55反应时间（反应时间（minmin）。）。v注：每个样品同时做的三支平行试管，其相对误差注：每个样品同时做的三支平行试管，其相对误差=10%=10%，超过此范，超过此范围，试验应重做。围，试验应重做。式中：木聚糖酶活力的测定（木聚糖酶活力的测定（DNS法）法）98水产动物营养和饲料实验