鼠疫病原学检验的实验室质量控制课件

演示文档演示文档演示文档演示文档路漫漫其悠远路漫漫其悠远少壮不努力，老大徒悲伤少壮不努力，老大徒悲伤鼠疫病原学检验的实验室质量控制鼠疫病原学检验的实验室质量控制1鼠疫病原学检验的实验室质量控制鼠疫病原学检验的实验室质量控制质量控制的定义质量控制的定义质量控制的定义质量控制的定义鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验方法鼠疫病原学检验方法鼠疫病原学检验方法鼠疫病原学检验方法动物间鼠疫疫情的实验室复判动物间鼠疫疫情的实验室复判动物间鼠疫疫情的实验室复判动物间鼠疫疫情的实验室复判鼠疫病原学检验的实验室质量控制质量控制的定义2实验室质量控制的定义实验室质量控制的定义实验室质量控制的定义3实验室质量控制的定义实验室质量控制的定义质量控制质量控制质量控制质量控制(QualityContro,l Q.C)(QualityContro,l Q.C)(QualityContro,l Q.C)(QualityContro,l Q.C)是监视全过程是监视全过程,排除误差排除误差,防防止变化止变化,维持标准化现状的一个管理过程。维持标准化现状的一个管理过程。鉴于鼠疫细菌学检验的重要性鉴于鼠疫细菌学检验的重要性鉴于鼠疫细菌学检验的重要性鉴于鼠疫细菌学检验的重要性,有必要对其进行规范化管理。有必要对其进行规范化管理。有必要对其进行规范化管理。有必要对其进行规范化管理。鼠疫细菌学检验质控鼠疫细菌学检验质控鼠疫细菌学检验质控鼠疫细菌学检验质控(Quality Control of testYersinia(Quality Control of testYersinia(Quality Control of testYersinia(Quality Control of testYersinia Pestis)Pestis)Pestis)Pestis)是鼠疫微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地是鼠疫微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。反映客观存在而建立的操作程序体系。实验室质量控制的定义质量控制(QualityContro,l4鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法5室内质控室内质控室内质控室内质控(Internal Quality Control IQC)(Internal Quality Control IQC)是指一个实验室内部对所有是指一个实验室内部对所有是指一个实验室内部对所有是指一个实验室内部对所有影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保证的核心和基础。目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后证的核心和基础。目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后证的核心和基础。目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后证的核心和基础。目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。的一致性。的一致性。的一致性。室间质控室间质控室间质控室间质控(External Quality Assessment(External Quality Assessment简称简称简称简称EQA)EQA)简称室间质评。简称室间质评。简称室间质评。简称室间质评。室间质控由上级业务单位采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试室间质控由上级业务单位采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试室间质控由上级业务单位采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试室间质控由上级业务单位采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性，这种评价是一种回顾性评价。并帮助校正，使具有可比性，这种评价是一种回顾性评价。并帮助校正，使具有可比性，这种评价是一种回顾性评价。并帮助校正，使具有可比性，这种评价是一种回顾性评价。室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质控主要控制实验结果的准室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质控主要控制实验结果的准室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质控主要控制实验结果的准室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质控主要控制实验结果的准确度，不互相替代，参与室间质控的试验室应先做好室内质控。确度，不互相替代，参与室间质控的试验室应先做好室内质控。确度，不互相替代，参与室间质控的试验室应先做好室内质控。确度，不互相替代，参与室间质控的试验室应先做好室内质控。鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法室内质控(Internal Quality Control 6鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法人员与组织管理仪器设备的质控疑似鼠疫材料的采取、保疑似鼠疫材料的采取、保存和运输存和运输培养基、染色液、试剂盒等的质量控制培养基、染色液、试剂盒等的质量控制鼠疫细菌检验程序及鼠疫细菌检验程序及鼠疫细菌检验程序及鼠疫细菌检验程序及结果判定结果判定结果判定结果判定报告卡的书写、疫情上报及交换室内质控室内质控室内质控室内质控鼠疫病原学检验的质量控制方法人员与组织管理仪器设备的质控疑似7室内质控室内质控室内质控室内质控扎实的基础教育和专业知识扎实的基础教育和专业知识职业道德和高度的责任心职业道德和高度的责任心质量管理体系质量管理体系各实验室制定各实验室制定SOPSOP专业化的技能培训专业化的技能培训继续教育继续教育人员与组织管理人员与组织管理人员与组织管理人员与组织管理室内质控扎实的基础教育和专业知识职业道德和高度的责任心质量管8室内质控室内质控室内质控室内质控性能试验性能试验正确贮存正确贮存无菌试验无菌试验诊断试剂盒诊断试剂盒(噬菌体等噬菌体等)培养基量培养基量pHpH值值试剂的质量控制试剂的质量控制试剂的质量控制试剂的质量控制室内质控性能试验正确贮存无菌试验诊断试剂盒(噬菌体等)培养9室内质控室内质控室内质控室内质控生物安全柜生物安全柜显微镜显微镜高压锅高压锅离心机离心机 培养箱培养箱冰箱冰箱仪器设备仪器设备仪器设备仪器设备室内质控生物安全柜显微镜高压锅离心机 培养箱冰箱仪器设备10鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法设立参比实验室发质控物进行检查评价定期举办各级培训班 派观察员到实验室进行检查指导室间质控方法室间质控方法室间质控方法室间质控方法鼠疫病原学检验的质量控制方法设立参比实验室发质控物进行检查评11室间质控的一般检查项目室间质控的一般检查项目实验室的布局SOP制订及执行情况实验室安全防护和污染物处理室内质控执行情况及各种纪录发放模拟标本(菌种)，规定时间内反馈至上级业务单位 以pH值、软硬度、鼠疫菌生长数量(活菌数)等为综合指标对培养基进行质控和用已知菌对噬菌体进行质控盲点试验，模拟标本混入监测标本常规测定对结果进行评价，分析错误原因室间质控的一般检查项目实验室的布局12鼠疫病原学检验方法鼠疫病原学检验方法鼠疫病原学检验方法13鼠疫病原学检验方法鼠疫病原学检验方法p染色镜检染色镜检p培养特性培养特性p噬菌体裂解噬菌体裂解p动物实验动物实验p基因检测基因检测鼠疫病原学检验方法染色镜检14鼠疫病原学检验方法鼠疫病原学检验方法鼠疫病原体鼠疫病原体鼠疫病原体鼠疫病原体p发现：1894年，在香港，日本学者北里柴三郎和法国学者亚力山大耶尔森二氏。p分类位置：肠杆菌科耶尔森菌属。p生物学特性p分子生物学特性：6MD、45MD、65MD三种质粒；目前已知IS100、IS285、IS1541、IS1661四种插入序列，分布于鼠疫菌质粒的染色体基因组中。p毒力决定因子:F1抗原，VWa抗原，Pstl，Pgmp分型:古典、中世纪、东方、田鼠变种四个生物变种；5个群（A、B、C、D、E群），21个生态型。鼠疫病原学检验方法鼠疫病原体15 染色镜检染色镜检p革兰氏染色革兰氏染色p美兰染色美兰染色典型的鼠疫菌是短而粗、两端钝圆、两极浓染的椭圆形小杆菌，革兰氏染色阴性。典型的鼠疫菌是短而粗、两端钝圆、两极浓染的椭圆形小杆菌，革兰氏染色阴性。染色镜检革兰氏染色典型的鼠疫菌16细菌培养细菌培养细菌培养17 病原学在普通培养基上在普通培养基上2830经经24h，肉眼可见形成薄薄一层淡灰色小菌落，肉眼可见形成薄薄一层淡灰色小菌落,圆圆形，有光泽，中心稍突起。透过光线呈灰白色或淡青色，菌落较干燥，镜下：形，有光泽，中心稍突起。透过光线呈灰白色或淡青色，菌落较干燥，镜下：中央隆起中心发暗，有粗糙颗粒（黄褐色）周围有薄而透明的花边，呈锯齿中央隆起中心发暗，有粗糙颗粒（黄褐色）周围有薄而透明的花边，呈锯齿状。状。培养特性培养特性 病原学在普通培养基上2830经18Y.PEVY.E耶尔森菌属三个致病菌形态比较Y.PEVY.E耶尔森菌属三个致病菌形态比较19噬菌体裂解实验噬菌体裂解实验2830 24h噬菌带明显噬菌带明显噬菌体裂解实验2830 24h噬菌带明显20观察观察1-9天，可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性。天，可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性。动物实验动物实验观察1-9天，可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性。动物实验21鼠疫菌的基因检测鼠疫菌的基因检测病病原原学学的的检检测测鼠疫菌的基因检测病22DNADNA提取提取提取提取水煮法提取可疑鼠疫菌水煮法提取可疑鼠疫菌水煮法提取可疑鼠疫菌水煮法提取可疑鼠疫菌DNADNA 对于脏器标本，在强毒实验室以无菌手续取动物的各种脏器对于脏器标本，在强毒实验室以无菌手续取动物的各种脏器对于脏器标本，在强毒实验室以无菌手续取动物的各种脏器对于脏器标本，在强毒实验室以无菌手续取动物的各种脏器(心、肝、心、肝、心、肝、心、肝、脾、肺脾、肺脾、肺脾、肺)约约约约1g1g，加入到等量生理盐水中，研碎，加入到等量生理盐水中，研碎，加入到等量生理盐水中，研碎，加入到等量生理盐水中，研碎，100100水浴中煮沸水浴中煮沸水浴中煮沸水浴中煮沸10min10min，离心，取上清直接用作，离心，取上清直接用作，离心，取上清直接用作，离心，取上清直接用作PCRPCR模板模板模板模板 对于培养可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有对于培养可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有对于培养可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有对于培养可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有500ul500ul蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水（生理盐水）的（生理盐水）的（生理盐水）的（生理盐水）的1.5ml1.5ml离心管中，于沸水浴中煮离心管中，于沸水浴中煮离心管中，于沸水浴中煮离心管中，于沸水浴中煮10min10min，离心上清液中含，离心上清液中含，离心上清液中含，离心上清液中含有可疑鼠疫菌有可疑鼠疫菌有可疑鼠疫菌有可疑鼠疫菌DNADNA作为作为作为作为PCRPCR模板。模板。模板。模板。细菌基因组细菌基因组细菌基因组细菌基因组DNADNA提取试剂盒提取鼠疫菌基因组提取试剂盒提取鼠疫菌基因组提取试剂盒提取鼠疫菌基因组提取试剂盒提取鼠疫菌基因组DNADNA 操作方法可根据试剂盒说明书进行操作。操作方法可根据试剂盒说明书进行操作。操作方法可根据试剂盒说明书进行操作。操作方法可根据试剂盒说明书进行操作。鼠疫菌的基因检测鼠疫菌的基因检测DNA提取鼠疫菌的基因检测23体系配制体系配制体系配制体系配制PCR-bufferdNTP引物（2对各1ul）Taq DNA聚合酶模板纯水总体积25ul2.5ul2ul4ul1ul（2.5U)1ul14.5ul鼠疫菌的基因检测鼠疫菌的基因检测体系配制PCR-bufferdNTP引物（2对各1ul）T24PCRPCR扩扩扩扩增增增增93 5min90 1min60 1min72 1min30 cycle72 10min4 保存鼠疫菌的基因检测鼠疫菌的基因检测PCR扩增93 5min90 1min60 25琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶鼠疫菌的基因检测鼠疫菌的基因检测琼脂糖凝胶鼠疫菌的基因检测26拍照拍照拍照拍照鼠疫菌的基因检测鼠疫菌的基因检测拍照鼠疫菌的基因检测27脏器悬液基因检测：脏器悬液基因检测：脏器悬液基因检测：脏器悬液基因检测：FIFI特异性片特异性片特异性片特异性片249bp249bp，PlaPla特异性片特异性片特异性片特异性片456bp456bp脏器悬液基因检测：FI特异性片249bp，Pla特异性片4528菌悬液基因检测：菌悬液基因检测：菌悬液基因检测：菌悬液基因检测：FIFI特特特特异性片异性片异性片异性片249bp249bp，PlaPla特特特特异性片异性片异性片异性片456bp456bp菌悬液基因检测：FI特异性片249bp，Pla特异性片45629PCRPCR操作操作p鼠疫菌株的复苏、培养、传代、核酸提取均在BSL-2实验室操作p其余PCR过程在普通实验室操作PCR操作鼠疫菌株的复苏、培养、传代、核酸提取均在BSL-230动物间鼠疫疫情的实验室复判动物间鼠疫疫情的实验室复判动物间鼠疫疫情的实验室复判31动物间鼠疫疫情的实验室复判动物间鼠疫疫情的实验室复判复判流程复判流程日常监测胶体金抗体阳性胶体金抗体阳性间接血凝（抑制）阳性间接血凝（抑制）阳性自毙鼠自毙鼠培养鉴定为阳性培养鉴定为阳性胶体金抗原阳性胶体金抗原阳性反向血凝（抑制）阳性反向血凝（抑制）阳性培养鉴定为阳性培养鉴定为阳性报自治区疾控中心复判动物间鼠疫疫情的实验室复判复判流程日常监测胶体金抗体阳性间接32鼠疫病原学检验的实验室质量控制课件33