肿瘤靶向治疗分子标靶应用进展课件

肿瘤靶向治瘤靶向治疗分子分子标靶靶应用用进展展肿瘤靶向治疗分子标靶应用进展肿瘤靶向治疗分子标靶应用进展肿瘤背景资料背景资料20世纪世纪70年代前年代前:v肿瘤生物学研究：细胞和亚细胞水平肿瘤生物学研究：细胞和亚细胞水平 肿瘤细胞生长失控而处在不断的周期性分肿瘤细胞生长失控而处在不断的周期性分裂中裂中,导致肿瘤细胞分裂速度加快。导致肿瘤细胞分裂速度加快。v传统化疗药：针对阻断有丝分裂中微管蛋白传统化疗药：针对阻断有丝分裂中微管蛋白形成的细胞毒性药物和破坏形成的细胞毒性药物和破坏DNA合成的抗代合成的抗代谢药物谢药物 抗瘤谱较广，选择性不强，效果差别很大抗瘤谱较广，选择性不强，效果差别很大同时损害正常细胞，有严重不良反应同时损害正常细胞，有严重不良反应2020/11/32背景资料20世纪70年代前:2020/11/3220世纪世纪70年代后年代后:v肿瘤生物学研究：分子水平肿瘤生物学研究：分子水平 肿瘤中癌基因扩增而激活，抑癌基因突变失肿瘤中癌基因扩增而激活，抑癌基因突变失活或丢失，基因转录和蛋白产物异常，信号转活或丢失，基因转录和蛋白产物异常，信号转导通路异常活化，细胞周期调节失控，导致肿导通路异常活化，细胞周期调节失控，导致肿瘤细胞不受控制地增殖，细胞凋亡抑制，肿瘤瘤细胞不受控制地增殖，细胞凋亡抑制，肿瘤新生血管形成。新生血管形成。v肿瘤分子生物学研究阐明了肿瘤发生发展中的肿瘤分子生物学研究阐明了肿瘤发生发展中的分子机制，为肿瘤药物治疗提供了一种新的模分子机制，为肿瘤药物治疗提供了一种新的模式。式。2020/11/3320世纪70年代后:2020/11/33肿瘤的靶向治疗肿瘤的靶向治疗targeted therapy2020/11/34肿瘤的靶向治疗targeted therapy2020/1v依据已知肿瘤发生发展中涉及的异常依据已知肿瘤发生发展中涉及的异常分子和基因，设计和研制针对这些已分子和基因，设计和研制针对这些已知的特定分子和基因靶点的药物，选知的特定分子和基因靶点的药物，选择性杀伤肿瘤细胞的治疗方法。择性杀伤肿瘤细胞的治疗方法。v靶向药物只作用于特定靶点的肿瘤，靶向药物只作用于特定靶点的肿瘤，特异性强，能选择性杀伤肿瘤细胞。特异性强，能选择性杀伤肿瘤细胞。2020/11/35依据已知肿瘤发生发展中涉及的异常分子和基因，设计和研制针对这肿瘤靶向药物肿瘤靶向药物分类和特性分类和特性2020/11/36肿瘤靶向药物分类和特性2020/11/36v单克隆抗体药物单克隆抗体药物 非结合型单抗非结合型单抗 结合型单抗结合型单抗v小分子化合物小分子化合物 酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂 血管生成抑制剂血管生成抑制剂 蛋白酶体抑制剂蛋白酶体抑制剂 环氧化酶抑制剂环氧化酶抑制剂 雌激素受体抑制剂雌激素受体抑制剂 其它小分子化合物其它小分子化合物 凋亡诱导剂凋亡诱导剂 周期蛋白酶抑制剂周期蛋白酶抑制剂 端粒酶抑制剂端粒酶抑制剂2020/11/37单克隆抗体药物2020/11/37一、单克隆抗体药物一、单克隆抗体药物v某些表面抗原主要存在于恶性细胞而某些表面抗原主要存在于恶性细胞而不存在于周围正常细胞上，这些肿瘤不存在于周围正常细胞上，这些肿瘤相关抗原可成为特异性抗体结合的靶相关抗原可成为特异性抗体结合的靶点。能结合到肿瘤细胞上引发特异性点。能结合到肿瘤细胞上引发特异性免疫反应而导致细胞死亡的单抗，称免疫反应而导致细胞死亡的单抗，称为抗肿瘤单抗药物。为抗肿瘤单抗药物。2020/11/38一、单克隆抗体药物某些表面抗原主要存在于恶性细胞而不存在于周1.非结合型单抗非结合型单抗v这类药物能直接结合到肿瘤细胞上，这类药物能直接结合到肿瘤细胞上，触发宿主免疫反应，导致细胞死亡；触发宿主免疫反应，导致细胞死亡；或通过抗原抗体结合后，阻断或中或通过抗原抗体结合后，阻断或中和靶分子的生物学活性，干扰细胞和靶分子的生物学活性，干扰细胞间信号转导而发挥抗肿瘤作用。间信号转导而发挥抗肿瘤作用。2020/11/391.非结合型单抗这类药物能直接结合到肿瘤细胞上，触发宿主免CD20-利妥昔单抗利妥昔单抗(rituxmab)v商品名商品名:美罗华美罗华v1997年真正意义上第一个肿瘤靶向药物年真正意义上第一个肿瘤靶向药物v抗抗CD20的人鼠嵌合抗体的人鼠嵌合抗体v主要治疗复发性或难治性低度恶性主要治疗复发性或难治性低度恶性B细细胞淋巴瘤；现也用于中、高度恶性胞淋巴瘤；现也用于中、高度恶性B细细胞淋巴瘤。胞淋巴瘤。2020/11/310CD20-利妥昔单抗(rituxmab)商品名:美罗华202CD52-阿仑单抗阿仑单抗(alemtuzumab)v抗抗CD52的人源化单抗的人源化单抗v用于治疗苯丙酸氮芥和氟达拉滨治疗用于治疗苯丙酸氮芥和氟达拉滨治疗失败的失败的B淋巴细胞性白血病，某些淋巴细胞性白血病，某些T细细胞淋巴瘤如蕈样霉菌病和胞淋巴瘤如蕈样霉菌病和Sezary综合综合征。征。2020/11/311CD52-阿仑单抗(alemtuzumab)抗CD52的人源HER2-曲妥珠单抗曲妥珠单抗(trastuzumab)v商品名商品名:赫赛汀赫赛汀(herceptin)v抗抗EGFR 2(Her2)的人源化单抗的人源化单抗v用于治疗用于治疗Her2高表达的乳腺癌和其它恶高表达的乳腺癌和其它恶性肿瘤性肿瘤(胃癌、卵巢癌等胃癌、卵巢癌等)。2020/11/312HER2-曲妥珠单抗(trastuzumab)商品名:赫赛汀EGFR-西妥昔单抗西妥昔单抗(cetuximab)v抗抗EGFR(Her1)的人鼠嵌合抗体的人鼠嵌合抗体v用于治疗标准化方案无效，且用于治疗标准化方案无效，且EGFR阳阳性的转移性结直肠癌。性的转移性结直肠癌。v人源化的单克隆抗体帕尼单抗人源化的单克隆抗体帕尼单抗（Panitumumab）2020/11/313EGFR-西妥昔单抗(cetuximab)抗EGFR(HVEGF-贝伐单抗贝伐单抗(bevacizumab)v抗抗VEGF的重组人源化单抗的重组人源化单抗v抗肿瘤内新生血管形成的作用抗肿瘤内新生血管形成的作用v用于治疗进展期或转移性结直肠癌，用于治疗进展期或转移性结直肠癌，与标准化方案联合应用，能显著提与标准化方案联合应用，能显著提高疗效并延长生存。高疗效并延长生存。2020/11/314VEGF-贝伐单抗(bevacizumab)抗VEGF的重组2.结合型单抗结合型单抗v由能特异性识别肿瘤抗原的单抗由能特异性识别肿瘤抗原的单抗偶联到放射性核素或细胞毒素上，偶联到放射性核素或细胞毒素上，以提高对肿瘤细胞的杀伤力。以提高对肿瘤细胞的杀伤力。2020/11/3152.结合型单抗由能特异性识别肿瘤抗原的单抗偶联到放射性核素替伊莫单抗替伊莫单抗(britumomab)v第一个得到美国第一个得到美国FDA批准的单抗批准的单抗放射性放射性核素偶联物核素偶联物v商品名：商品名：Zevalinv由由90Y(钇钇)通过连接螯合剂通过连接螯合剂tiuxetan偶联到鼠偶联到鼠抗抗CD20抗体上的抗肿瘤单抗偶联物。抗体上的抗肿瘤单抗偶联物。v用于利妥昔单抗治疗无效或复发的低度恶用于利妥昔单抗治疗无效或复发的低度恶性性B细胞淋巴瘤。细胞淋巴瘤。2020/11/316替伊莫单抗(britumomab)第一个得到美国FDA批准的托西莫单抗托西莫单抗(tositumomab)v另一种单抗另一种单抗放射性核素偶联物放射性核素偶联物v由由131I(碘碘)偶联偶联(bexxan)到鼠抗到鼠抗CD20抗体抗体v用于标准化疗方案治疗无效的低度恶性用于标准化疗方案治疗无效的低度恶性B细胞淋巴瘤。细胞淋巴瘤。2020/11/317托西莫单抗(tositumomab)另一种单抗放射性核素偶吉姆单抗吉姆单抗(gemtuzumab)v商品名商品名:Mylotargv第一个得到美国第一个得到美国FDA批准的单抗批准的单抗细胞毒素细胞毒素偶联物偶联物v由抗由抗CD33重组人源化单抗与细胞毒类抗肿瘤重组人源化单抗与细胞毒类抗肿瘤抗生素刺孢霉素抗生素刺孢霉素(calicheamicin)偶联而成。偶联而成。v用于治疗标准化方案初治失败，用于治疗标准化方案初治失败，CD33阳性急阳性急性髓性白血病性髓性白血病(AML)的的60岁以上的中老年患岁以上的中老年患者，现也可与标准化疗方案联合治疗者，现也可与标准化疗方案联合治疗AML。2020/11/318吉姆单抗(gemtuzumab)商品名:Mylotarg20二、小分子化合物二、小分子化合物v某些非细胞毒性小分子化合物具有明确某些非细胞毒性小分子化合物具有明确的作用靶点，通过阻断治疗中异常活化的作用靶点，通过阻断治疗中异常活化的的激酶、生长因子和信号转导通路激酶、生长因子和信号转导通路等途等途径来抑制肿瘤的生长，从而达到治疗的径来抑制肿瘤的生长，从而达到治疗的目的。这些小分子化合物称为小分子肿目的。这些小分子化合物称为小分子肿瘤靶向治疗药物。瘤靶向治疗药物。2020/11/319二、小分子化合物某些非细胞毒性小分子化合物具有明确的作用靶点1.酪氨酸激酶抑制剂（酪氨酸激酶抑制剂（TKI）2020/11/3201.酪氨酸激酶抑制剂（TKI）2020/11/320吉非替尼吉非替尼(gefitinib)v商品名：易瑞沙商品名：易瑞沙(iressa)v是一种针对表皮生长因子受体是一种针对表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶的口服小分子抑制剂酪氨酸激酶的口服小分子抑制剂v用于治疗不能手术或复发的用于治疗不能手术或复发的NSCLC。2020/11/321吉非替尼(gefitinib)商品名：易瑞沙(iressa)埃罗替尼埃罗替尼(erlotinib)v一种新的、选择性一种新的、选择性EGFR受体酪氨酸激受体酪氨酸激酶抑制剂酶抑制剂v可用于治疗对化疗耐药的可用于治疗对化疗耐药的NSCLC、卵巢、卵巢癌和头颈部癌等。癌和头颈部癌等。v拉帕替尼（拉帕替尼（Lapatinib）是一种能同时抑）是一种能同时抑制制EGFR和和HER-2，用于，用于Herceptin耐药耐药的乳腺癌。的乳腺癌。2020/11/322埃罗替尼(erlotinib)一种新的、选择性EGFR受体酪2020/11/3232020/11/323KIT阳性和可能阳性肿瘤阳性和可能阳性肿瘤vGISTv精原细胞瘤精原细胞瘤v肥大细胞瘤肥大细胞瘤v黑色素瘤黑色素瘤/透明细胞肉瘤透明细胞肉瘤vES/PNETvKaposi肉瘤肉瘤/血管肉瘤血管肉瘤v孤立性纤维瘤孤立性纤维瘤v隆突性皮肤纤维肉瘤隆突性皮肤纤维肉瘤v肌纤维母细胞瘤肌纤维母细胞瘤/纤维瘤病纤维瘤病v分化良好脂肪肉瘤分化良好脂肪肉瘤v转移性小细胞癌转移性小细胞癌2020/11/324KIT阳性和可能阳性肿瘤GIST2020/11/324甲磺酸伊马替尼甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)v商品名商品名:格列卫格列卫(gleevec)v能抑制能抑制BCR-ABL酪氨酸激酶及其下游信号酪氨酸激酶及其下游信号转导通路，转导通路，2001年年FDA批准用于治疗慢粒批准用于治疗慢粒（CML）；）；v能抑制能抑制C-Kit和和PEGFR酪氨酸激酶活性，酪氨酸激酶活性，2002年被批准用于治疗年被批准用于治疗C-kit(CD117)或或PDGFRa阳性的、不能手术或转移性胃肠阳性的、不能手术或转移性胃肠间质瘤（间质瘤（GIST）。）。2020/11/325甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)商品名:VEGFR酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂2020/11/326VEGFR酪氨酸激酶抑制剂2020/11/326VEGFR酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂vSU668、SU11248、ZD6474、PTK787/ZK222584等小分子等小分子化合物化合物v口服或腹腔注射口服或腹腔注射v抑制抑制VEGFR酪氨酸激酶的活酪氨酸激酶的活性，从而抑制血管内皮细胞性，从而抑制血管内皮细胞生长。生长。2020/11/327VEGFR酪氨酸激酶抑制剂SU668、SU11248、ZD6其它信号转导通路抑制剂其它信号转导通路抑制剂v法尼基转移酶法尼基转移酶(farnesyltransferase)，是是RAS蛋白活化必不可少的关键酶，蛋白活化必不可少的关键酶，抑制法尼基转移酶活性，可阻断抑制法尼基转移酶活性，可阻断RAS蛋白在细胞内信号转导。临床试验阶蛋白在细胞内信号转导。临床试验阶段。段。2020/11/328其它信号转导通路抑制剂法尼基转移酶(farnesyltran2020/11/3292020/11/329多靶点酶抑制剂多靶点酶抑制剂v索拉菲尼索拉菲尼(sorafenib，商品名，商品名Nexavar)：vFDA 10年来第一次批准治疗肾癌的药物，年来第一次批准治疗肾癌的药物，还可用于还可用于HCC,Melanoma,NSCLC。v范得他尼范得他尼(vandetanib，ZD6474，商品名，商品名Zactima):口服，口服，NSCLCvSunitinib：口服，治疗：口服，治疗GIST和晚期肾癌和晚期肾癌2020/11/330多靶点酶抑制剂索拉菲尼(sorafenib，商品名Nexav2.血管生成抑制剂血管生成抑制剂v主要针对肿瘤血管形成的某主要针对肿瘤血管形成的某些因子及关键步骤进行干预。些因子及关键步骤进行干预。2020/11/3312.血管生成抑制剂主要针对肿瘤血管形成的某些因子及关键步骤血管抑素血管抑素(angiostatin)内皮抑素内皮抑素(endostatin)v抑制由碱性成纤维细胞生长因子抑制由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱发的血管生长，特异性抑诱发的血管生长，特异性抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖，但不制肿瘤血管内皮细胞的增殖，但不直接影响肿瘤细胞的增生。直接影响肿瘤细胞的增生。vYH16（Endostar，恩度，恩度)为我国为我国生产的重组人血管内皮抑制素注射生产的重组人血管内皮抑制素注射液，用于不能手术的液，用于不能手术的NSCLC。2020/11/332血管抑素(angiostatin)内皮抑素(endostaVEGFR酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂v抑制抑制VEGFR酪酪氨酸激酶的活氨酸激酶的活性，从而抑制性，从而抑制血管内皮细胞血管内皮细胞生长。生长。2020/11/333VEGFR酪氨酸激酶抑制剂抑制VEGFR酪氨酸激酶的活性，从O-(氯乙酰氯乙酰-氨甲酰基氨甲酰基)烟曲霉醇烟曲霉醇(TNP-470)v一种烟曲霉菌分泌的烟曲霉素的人一种烟曲霉菌分泌的烟曲霉素的人工合成类似物，对血管内皮细胞增工合成类似物，对血管内皮细胞增殖的抑制作用强，无明显毒副作用。殖的抑制作用强，无明显毒副作用。2020/11/334O-(氯乙酰-氨甲酰基)烟曲霉醇(TNP-470)一种烟曲霉金属蛋白酶抑制剂金属蛋白酶抑制剂v能与基质金属蛋白酶（能与基质金属蛋白酶（MMPs）活性部位的锌结合，抑制血管生活性部位的锌结合，抑制血管生成。成。2020/11/335金属蛋白酶抑制剂能与基质金属蛋白酶（MMPs）活性部位的锌结沙利度胺沙利度胺(thalisdomide)v反应停反应停v抑制抑制bFGF 和和VEGF介导的血管生介导的血管生成；也可抑制成；也可抑制TNF-a合成，阻断合成，阻断NF-kB激活，下调细胞表面粘附分激活，下调细胞表面粘附分子和减少自由基生成。子和减少自由基生成。2020/11/336沙利度胺(thalisdomide)反应停2020/11/3.蛋白酶体抑制剂蛋白酶体抑制剂v多酶复合体多酶复合体蛋白酶体蛋白酶体(proteasome)在调节细胞周期上起作用，促进细胞增在调节细胞周期上起作用，促进细胞增殖。殖。v硼替佐米硼替佐米(bortezomib)，2003年年FDA批批准用于治疗复发性和难治性多发性骨髓准用于治疗复发性和难治性多发性骨髓瘤。瘤。2020/11/3373.蛋白酶体抑制剂多酶复合体蛋白酶体(proteaso4.环氧化酶抑制剂环氧化酶抑制剂v环氧化酶环氧化酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素是前列腺素合成过程中的催化酶，包括合成过程中的催化酶，包括COX1和和COX2。v结肠腺瘤和结肠癌高表达结肠腺瘤和结肠癌高表达COX2，肺癌、乳，肺癌、乳腺癌、前列腺癌及脑肿瘤也常过表达腺癌、前列腺癌及脑肿瘤也常过表达COX2。v选择性选择性COX2抑制剂抑制剂西乐葆西乐葆(celeoxib)用于治用于治疗家族性多发性腺瘤性息肉疗家族性多发性腺瘤性息肉(FAP)，可降低结，可降低结肠癌的发生。肠癌的发生。2020/11/3384.环氧化酶抑制剂环氧化酶(cyclooxygenase,5.雌激素受体抑制剂雌激素受体抑制剂v他莫西芬他莫西芬(tamoxifen)，能与雌二醇竞争雌激素，能与雌二醇竞争雌激素受体，与胞质雌激素受体结合形成复合物，进受体，与胞质雌激素受体结合形成复合物，进入细胞后不能刺激入细胞后不能刺激RNA和蛋白质合成，从而抑和蛋白质合成，从而抑制依赖雌激素才能生长的肿瘤。制依赖雌激素才能生长的肿瘤。v用于治疗绝经后乳腺癌患者的姑息治疗和手术用于治疗绝经后乳腺癌患者的姑息治疗和手术后的辅助治疗，也可治疗子宫内膜样腺癌。后的辅助治疗，也可治疗子宫内膜样腺癌。v阿那曲唑阿那曲唑(anastrozole)，来曲唑，来曲唑(letrozole)和依和依西美坦西美坦(exemestane)等芳香化酶抑制剂，能与等芳香化酶抑制剂，能与内源性底物竞争芳香化酶的活性部位，抑制酶内源性底物竞争芳香化酶的活性部位，抑制酶的活性，明显降低雌激素水平，可用于治疗绝的活性，明显降低雌激素水平，可用于治疗绝经妇女的晚期乳腺癌。经妇女的晚期乳腺癌。2020/11/3395.雌激素受体抑制剂他莫西芬(tamoxifen)，能与雌6.其它小分子化合物其它小分子化合物(正在临床试验阶段正在临床试验阶段)v凋亡诱导剂凋亡诱导剂v周期蛋白酶抑制剂周期蛋白酶抑制剂v端粒酶抑制剂端粒酶抑制剂v反义核苷酸反义核苷酸2020/11/3406.其它小分子化合物(正在临床试验阶段)凋亡诱导剂202肿瘤靶向治疗中肿瘤靶向治疗中分子靶点的检测及结果判读分子靶点的检测及结果判读2020/11/341肿瘤靶向治疗中分子靶点的检测及结果判读2020/11/34分子靶点检测的常用技术分子靶点检测的常用技术v免疫组织化学免疫组织化学(IHC)v实时荧光定量实时荧光定量PCR(qRT-PCR)v荧光原位杂交荧光原位杂交(FISH)v显色原位杂交显色原位杂交(CISH)vDNA测序测序(DNA Sequence)2020/11/342分子靶点检测的常用技术免疫组织化学(IHC)2020/11/1.免疫组织化学技术免疫组织化学技术(IHC)v检测肿瘤分子靶点的蛋白产物表达情况。检测肿瘤分子靶点的蛋白产物表达情况。v最常用和最简便。最常用和最简便。2020/11/3431.免疫组织化学技术(IHC)检测肿瘤分子靶点的蛋白产物表达CD20v正常正常B淋巴细胞从淋巴细胞从前体前体B细胞到前浆细胞到前浆细胞，绝大多数细胞，绝大多数B细胞淋巴瘤均表细胞淋巴瘤均表达；达；v阳性反应定位于阳性反应定位于细胞膜上。细胞膜上。2020/11/344CD20正常B淋巴细胞从前体B细胞到前浆细胞，绝大多数B细胞C-KIT蛋白蛋白(CD117)v非受体酪氨酸激酶非受体酪氨酸激酶v绝大多数绝大多数GIST存在存在C-KIT基因功能获得性基因功能获得性突变，导致该基因不突变，导致该基因不需与配体结合，即可需与配体结合，即可发生自磷酸化而激活发生自磷酸化而激活信号转导通路信号转导通路vCD117的阳性反应定的阳性反应定位于细胞膜或和胞浆。位于细胞膜或和胞浆。2020/11/345C-KIT蛋白(CD117)非受体酪氨酸激酶2020/11/HER2蛋白蛋白v具有受体酪氨酸激酶活性的表皮生长因具有受体酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体蛋白，在控制上皮细胞生长、分子受体蛋白，在控制上皮细胞生长、分化、粘附和活动等细胞信号转导通路的化、粘附和活动等细胞信号转导通路的活化上起重要作用。活化上起重要作用。v曲妥珠单抗能下调过度表达曲妥珠单抗能下调过度表达HER2蛋白蛋白的乳癌癌细胞表面的乳癌癌细胞表面HER2受体的数目。受体的数目。v1998年年FDA批准了单抗治疗前的标准检批准了单抗治疗前的标准检测程序测程序v检测对象为浸润性乳腺癌检测对象为浸润性乳腺癌v阳性反应定位于细胞膜阳性反应定位于细胞膜2020/11/346HER2蛋白具有受体酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体蛋白，在2020/11/3472020/11/347ST.GALLEN 2007HER2：乳腺癌危险因素的新定义：乳腺癌危险因素的新定义RISK G1 T2ER/PR+淋巴结淋巴结-HER2-LVI无无淋巴结淋巴结1-3 和和HER2+,ER/PR-或或淋巴结淋巴结4年龄年龄2淋巴结淋巴结-,HER2+,ER/PR-或或LVI 侵润淋巴结侵润淋巴结1-3且且HER2-,ER/PR+低低中中高高RISK2020/11/348ST.GALLEN 2007HER2：乳腺癌危险因素的新定2007 ASCO/CAP GuidelinesvScore 0 No staining is observed or cell membrane staining is observed in less than10%of the tumor cells.vScore 1+A faint perceptible membrane staining can be detected in more than 10%of the tumor cells.The cells are only stained in part of their membrane.vScore 2+A weak to moderate complete membrane staining is observed in more than 10%of the tumor cells.vScore 3+A strong complete membrane staining is observed in more than 30%of the tumor cells.JCO,25(1):20072020/11/3492007 ASCO/CAP GuidelinesScore 2009版中国乳腺癌版中国乳腺癌HER2指南指南v0：无着色，或：无着色，或10%的浸润癌细胞呈现弱或中度强度，的浸润癌细胞呈现弱或中度强度，且不完整的膜着色；且不完整的膜着色；v2+：10%浸润癌细胞呈现弱或中度强度，浸润癌细胞呈现弱或中度强度，且完整的膜着色；或且完整的膜着色；或30%癌细胞胞膜强染色，连续，环绕癌细胞胞膜强染色，连续，环绕整个胞膜。整个胞膜。2020/11/3502009版中国乳腺癌HER2指南0：无着色，或1%癌细胞的胞膜染色癌细胞的胞膜染色超过背景细胞即为阳性，超过背景细胞即为阳性，无论染色是否完整环绕无论染色是否完整环绕胞膜。胞膜。2020/11/354EGFR/HER1蛋白阳性反应定位于细胞膜。2020/11/ER、PR蛋白蛋白v阳性反应定位于细胞核。阳性反应定位于细胞核。v染色强度及百分比。染色强度及百分比。v2010 ASCO/CAP guideline 1%Positive,10%确切的用药标准，确切的用药标准，1-10%，需综合考虑，需综合考虑2020/11/355ER、PR蛋白阳性反应定位于细胞核。2020/11/3552.实时荧光定量实时荧光定量PCR(qRT-PCR)v检测肿瘤分子靶点的检测肿瘤分子靶点的mRNA表达情况。表达情况。v操作简单，灵敏度高，快速，高通量。操作简单，灵敏度高，快速，高通量。v仪器昂贵，最好需要标准仪器昂贵，最好需要标准PCR室。室。v有替代测序应用于基因突变检测，如有替代测序应用于基因突变检测，如EGFR,K-ras检测。检测。2020/11/3562.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肿瘤分子靶点的2-ct2020/11/3572-ct2020/11/3573.荧光原位杂交技术荧光原位杂交技术(FISH)v是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标记的是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。在荧靶序列杂交。在荧光显微镜下，于细胞和光显微镜下，于细胞和(或或)组织原位观察并分组织原位观察并分析细胞核内杂交于析细胞核内杂交于DNA靶序列的多种彩色探针靶序列的多种彩色探针信号，以获得细胞内多条染色体信号，以获得细胞内多条染色体(或染色体片段或染色体片段)或多种基因状态的信息。或多种基因状态的信息。vFISH检测基因扩增，准确性比其它检测技术高，检测基因扩增，准确性比其它检测技术高，可避免由于染色体的多体而呈现的假阳性，金可避免由于染色体的多体而呈现的假阳性，金标准。标准。v缺点：技术操作复杂，试剂及设备昂贵。缺点：技术操作复杂，试剂及设备昂贵。2020/11/3583.荧光原位杂交技术(FISH)是一种分子细胞遗传学技术，样本预处理样本预处理探针、样本变性探针、样本变性探针样本杂交探针样本杂交杂交后洗涤杂交后洗涤结果观察结果观察原理及实验操作原理及实验操作2020/11/359样本预处理原理及实验操作2020/11/359HER2基因：基因：FISHvHER2试剂盒为双色荧光标记探针：试剂盒为双色荧光标记探针：HER-2基基因，为橘红色荧光，该基因所在的因，为橘红色荧光，该基因所在的17号染色号染色体着丝点为绿色荧光作为内对照，用于判断体着丝点为绿色荧光作为内对照，用于判断HER-2基因的拷贝数增多是真正扩增，还是基因的拷贝数增多是真正扩增，还是由于由于17号染色体的多体而导致号染色体的多体而导致HER2基因拷贝基因拷贝数相对增多。数相对增多。vO/G2.2，PostivevO/G2.0 or O6 PostiveO/G90%2020/11/368c-erbB2 IHC vs.FISHc-erbB2 scConcordance between FISH and IHC HER-2 status determination using the 30%criterionFISH-positiveF ISH-negativeTotalIHC-positive(3+)1699178IHC-negative(0,1+,2+)12104116Total181113294ConcordanceEstimate95%CI coefficient0.8500.787 to 0.913Sensitivity93.4%89.9%to 96.9%Specificity92.0%87.1%to 96.9%Overall*92.9%90.0%to 95.8%2020/11/369Concordance between FISH and IIHC,CISH,FISH符合率符合率IHCCISH（）（）FISH（）（）Group I0/1+,n=69无无扩增，增，67/69（97）无无扩增，增，69/69（100）Group II3+,n=50扩增，增，47/50（94）扩增，增，46/50（92）Group III2+，n=135 无无扩增，增，89/135；（；（66）扩增，增，37/135；（；（27）2020/11/370IHC,CISH,FISH符合率IHCCISH（）FIS5.DNA测序技术测序技术v将组织中将组织中DNA提取后行提取后行PCR扩增，然后用扩增，然后用测序分析仪分析有无基因突变、突变位点测序分析仪分析有无基因突变、突变位点和突变形式的方法。和突变形式的方法。v目前主要用于目前主要用于C-KIT、PDGFR、K-ras、EGFR、BRAF等突变，为临床靶向药物治等突变，为临床靶向药物治疗和疗效判断提供客观依据。疗和疗效判断提供客观依据。2020/11/3715.DNA测序技术将组织中DNA提取后行PCR扩增，然后用基因序列分析基因序列分析PDGFRA-18 杂合性点突变：杂合性点突变：AA:842位，位，GACGTC，杂合子，天门冬氨酸杂合子，天门冬氨酸(Asp,D)缬氨酸缬氨酸(Val,V)。2020/11/372基因序列分析PDGFRA-18 杂合性点突变：AA:842位C-KIT基因基因v大多数大多数GIST存在存在C-KIT基因突变，突基因突变，突变率变率72.6%；突变用药才有效。突变用药才有效。v其中：第其中：第11号外显子占号外显子占64%，第，第9号号外显子占外显子占7%，第，第13号外显子占号外显子占1%，第第17号外显子占号外显子占0.6%。2020/11/373C-KIT基因大多数GIST存在C-KIT基因突变，突变率7EGFR基因基因v回顾性回顾性期临床研究显示：吉非替尼对女期临床研究显示：吉非替尼对女性、非吸烟、细支气管肺泡癌患者有效性、非吸烟、细支气管肺泡癌患者有效v存在杂合性突变致存在杂合性突变致EGFR功能性获得的患功能性获得的患者才对吉非替尼治疗有反应者才对吉非替尼治疗有反应v非小细胞肺癌：检测非小细胞肺癌：检测EGFR外显子外显子18-21的的突变状况突变状况2020/11/374EGFR基因回顾性期临床研究显示：吉非替尼对女性、非吸烟、K-ras 突变突变v2009年年7月月FDA：维克替比（帕尼单：维克替比（帕尼单抗抗Panitumumab）和爱必妥（西妥）和爱必妥（西妥昔单抗昔单抗Cetuximab）药品说明书）药品说明书:如如果患者肿瘤细胞中果患者肿瘤细胞中K-ras基因的基因的12或或13密码子发生突变，不能获益。密码子发生突变，不能获益。vNCCN及及ASCO:CRC、HCC接受接受EGFR单抗治疗必须检测单抗治疗必须检测K-ras基因基因有无突变。有无突变。2020/11/375K-ras 突变2009年7月FDA：维克替比（帕尼单抗Pa21世纪病理世纪病理提供疾病提供疾病 病理诊断病理诊断 预后指标预后指标 预测指标预测指标 分子靶点分子靶点要求要求 病理形态学基础病理形态学基础 分子病理学知识分子病理学知识 细胞和分子遗传学技术细胞和分子遗传学技术2020/11/37621世纪病理提供疾病 病理诊断要求 病理形态学基础Question 1.下列分子靶点检测检测技术应下列分子靶点检测检测技术应用正确的有那些用正确的有那些vIHC检测蛋白表达检测蛋白表达vqRT-PCR检测检测DNA扩增扩增vCISH检测检测mRNA表达表达vDNA Sequence检测基因突变检测基因突变vFISH检测基因扩增检测基因扩增2020/11/377Question 1.下列分子靶点检测检测技术应用正确的Question 2.下列那些靶向药物治疗选择是下列那些靶向药物治疗选择是合适的？合适的？vA.乳腺癌乳腺癌HER2 FISH检测检测O/G=1.7，用，用Heceptin治疗治疗vB.胃肠间质瘤胃肠间质瘤c-kit检测有突变用检测有突变用Gleevec治疗治疗vC.结肠癌结肠癌K-ras检测有突变，用检测有突变，用Cetuximab 治疗治疗vD.肺腺癌肺腺癌EGFR检测有突变，用检测有突变，用Iressa治疗治疗vE.弥漫大弥漫大B 细胞瘤免疫组化检测细胞瘤免疫组化检测CD20+，用，用Rituxmab治疗治疗2020/11/378Question 2.下列那些靶向药物治疗选择是合适的？A2020/11/379Thanks!2020/11/379汇报结束谢谢大家!请各位批评指正汇报结束谢谢大家!请各位批评指正