诊断——血液学一般检查课件

01 七月 2024诊断诊断血液学一般检血液学一般检查查12 八月 2023诊断血液学一般检查11.1.血红蛋白测定血红蛋白测定-氰化高铁血红蛋白（氰化高铁血红蛋白（HiCNHiCN）测定法）测定法 n该该法法具具有有操操作作简简便便，结结果果稳稳定定可可靠靠，试试剂剂容容易易保保存存等等优优点点，被被国国际际血血液液学学标标准准化化委委员员会会(ICSH)(ICSH)推推荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。实实 验验 一一1.血红蛋白测定-2血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾被高铁氰化钾KK3 3Fe(CN)Fe(CN)6 6 氧化为高铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白（HiHi），后者与氰离子（），后者与氰离子（CNCN-）结合生成稳定）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCNHiCN）。在特定）。在特定波长（波长（540nm540nm）和光径（比色杯内径）和光径（比色杯内径1.0cm1.0cm）条）条件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。原原 理理HbHb HiHi+CNCN-HiCNHiCNK K3 3Fe(CN)Fe(CN)6 6实实 验验 一一血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾K3Fe3试剂试剂血红蛋白转化液（文齐氏液）：血红蛋白转化液（文齐氏液）：氰化钾（氰化钾（KCNKCN）0.05g 0.05g高铁氰化钾高铁氰化钾KK3 3Fe(CN)Fe(CN)6 6 0.20g 0.20g无水磷酸二氢钾（无水磷酸二氢钾（KHKH2 2POPO4 4）0.14g 0.14gTriton X100 1.0mlTriton X100 1.0ml蒸馏水蒸馏水 加至加至1000ml1000ml器材器材1.1.血红蛋白吸管，血红蛋白吸管，5ml5ml吸管吸管2.2.大试管大试管3.7213.721分光光度计分光光度计上述试剂为淡黄上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，色瓶中室温保存，其中非离子表面活其中非离子表面活性剂可加速溶血，性剂可加速溶血，缩短转化时间，防缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变止因血浆蛋白改变引起的混浊引起的混浊标本来源标本来源EDTA-KEDTA-K2 2抗凝全血或抗凝全血或毛细血管采血毛细血管采血实实 验验 一一器材上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，其中非4 操作操作 1.1.取血红蛋白转化液取血红蛋白转化液5.0ml5.0ml加入大加入大试管中。试管中。2.2.用血红蛋白吸管吸取全血用血红蛋白吸管吸取全血20l20l，轻拭管尖外余血，并准确调节血，轻拭管尖外余血，并准确调节血柱液面至柱液面至20l20l。加入到准备好的血。加入到准备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、红蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液，充分混匀，静置液，充分混匀，静置5 5分钟。分钟。实实 验验 一一操作1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。2.用血53.3.于于722722分光光度计上以转化液为分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长空白进行比色测定，波长540nm,540nm,光光径径1.0cm1.0cm。4.4.通过标准曲线间接求出血液中通过标准曲线间接求出血液中HbHb的含量的含量实实 验验 一一3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长546q将将HiCNHiCN标标准准液液倍倍比比稀稀释释（如如50g/L50g/L、100g/L100g/L、150g/L150g/L、200g/L200g/L）后后,在在所所用用的的分分光光光光度度计计上上540nm540nm处处，光光径径1.0cm1.0cm，以以转转化化液液为为空空白白测测定定各各稀稀释释度度的的吸吸光光度度。以以标标准准品品血血红红蛋蛋白白含含量量为为横横坐坐标标，吸吸光光度度值值为为纵纵坐坐标标，绘绘制制标标准准曲曲线线,或或求求出出换换算算常常数数K(K=Hb/A)K(K=Hb/A)。则则通通过过待待测测标标本本吸吸光光度度值查标准曲线或用值查标准曲线或用K K值计算血红蛋白浓度（值计算血红蛋白浓度（Hb=KAHb=KA）。）。附附HiCNHiCN标准曲线绘制和标准曲线绘制和K K值计算：值计算：实实 验验 一一将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、1507 参考值参考值 成年男性：成年男性：（120120160160）g/Lg/L成年女性：成年女性：（110110150150）g/Lg/L新生儿：新生儿：（170170200200）g/Lg/L 注意事项注意事项 1.1.试试剂剂因因含含氰氰化化钾钾，虽虽浓浓度度较较低低，但但在在配配制制、保保存存、使用中需妥善。使用中需妥善。2.2.标准曲线或标准曲线或K K值，应定期检查、校准。值，应定期检查、校准。报告方式报告方式 HbHb：_g/L_g/L实实 验验 一一参考值报告方式实 验 一82.2.白细胞计数白细胞计数 原理原理 血液用白细胞稀释液（血液用白细胞稀释液（2%2%醋酸溶液）稀释，使红细醋酸溶液）稀释，使红细胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量算求出每升血液中的白细胞数量 实实 验验 一一2.白细胞计数原理实 验 一91.1.血细胞计数板，盖玻片血细胞计数板，盖玻片2.2.血血红红蛋蛋白白吸吸管管（具具有有10l10l及及20l20l刻度）刻度）3.1ml3.1ml吸管，小试管，玻棒吸管，小试管，玻棒4.4.光学显微镜光学显微镜 器材器材 实实 验验 一一1.血细胞计数板，盖玻片器材实 验 一10 试剂试剂 白细胞稀释液：冰醋酸白细胞稀释液：冰醋酸 2ml 2ml1%1%龙胆紫龙胆紫 1ml 1ml或结晶紫数滴或结晶紫数滴蒸馏水加至蒸馏水加至 100ml 100ml 标本来源标本来源 EDTA-KEDTA-K2 2抗凝全血或毛细血管采血抗凝全血或毛细血管采血实实 验验 一一试剂实 验 一111.1.加稀释液加稀释液：取白细胞稀释液：取白细胞稀释液0.38ml0.38ml于一干净小试管中。于一干净小试管中。2.2.加加血血：用用血血红红蛋蛋白白吸吸管管取取全全血血（指指血血或或EDTA-KEDTA-K2 2抗抗凝凝血血）20l20l，轻轻拭拭管管尖尖外外余余血血，准准确确调调节节血血液液液液面面至至20l20l处处，将将血血红红蛋蛋白白吸吸管管插插入入白白细细胞胞稀稀释释液液中中（即即小小试试管管底底部部），迅迅速速将将血血液液放放出出，并并用用上上清清液液吸吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。3.3.溶溶血血：轻轻轻轻混混匀匀后后室室温温静静置置，待待液液体体变变为为棕棕褐褐色色，即即红红细细胞胞被被完完全全破破坏。坏。4.4.冲冲池池：用用微微量量吸吸管管或或玻玻棒棒取取适适量量混混匀匀的的白白细细胞胞悬悬液液充充入入血血细细胞胞计计数数池池（一一次次充充好好，液液体体不不可可外外溢溢，不不可可有有气气泡泡，否否则则擦擦净净重重充充），室室温温水平静置水平静置2 23 3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。5.5.计计数数：将将血血细细胞胞计计数数盘盘放放在在显显微微镜镜载载物物台台上上，低低倍倍镜镜下下计计数数四四角角4 4个个大大方方格格内内白白细细胞胞总总数数。（压压线线细细胞胞计计数数原原则则：数数上上不不数数下下，数数左左不不数右）数右）操作操作 实实 验验 一一1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。126.6.计算计算：白细胞：白细胞/L=(N/4)1010/L=(N/4)10106 620=(N/20)1020=(N/20)109 9式中式中N N表示四个大方格内数得的白细胞总数。表示四个大方格内数得的白细胞总数。/4:/4:为平均每个大方格（为平均每个大方格（0.1mm0.1mm3 3）稀释液内）稀释液内 WBC WBC数。数。1010：将一个大方格白细胞数换算为：将一个大方格白细胞数换算为1l1l 内的白细胞数。内的白细胞数。10106 6：1L=101L=106 6ll。2020：为血液稀释倍数。：为血液稀释倍数。白白白白白白白白白细胞计数区白细胞计数区实实 验验 一一6.计算：白细胞/L=(N/4)1010620=(N/13计数池构造计数池构造实实 验验 一一计数池构造实 验 一14低倍镜下的计数池大方格结构低倍镜下的计数池大方格结构实实 验验 一一低倍镜下的计数池大方格结构实 验 一15低倍镜下的白细胞形态（低倍镜下的白细胞形态（10X1010X10）实实 验验 一一低倍镜下的白细胞形态（10X10）实 验 一16白细胞计数操作步骤白细胞计数操作步骤实实 验验 一一白细胞计数操作步骤实 验 一17 报告方式报告方式 白细胞数（白细胞数（WBCWBC）：）：_10_109 9/L/L 参考值参考值 成人：成人：（4 41010）10109 9/L/L新生儿：（新生儿：（15152020）10109 9/L/L实实 验验 一一报告方式实 验 一181.1.采血及计数室充液注意事项采血及计数室充液注意事项:n毛毛细细血血管管采采血血部部位位的的皮皮肤肤必必须须正正常常，凡凡局局部部有有水水肿肿、发发炎炎、紫紫绀绀或冻疮等均不可穿刺采血。或冻疮等均不可穿刺采血。n穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。nEDTA-KEDTA-K2 2抗凝全血使用前需混匀。抗凝全血使用前需混匀。n计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。n血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。n毛毛细细血血管管采采血血动动作作必必须须迅迅速速否否则则常常易易凝凝固固，若若作作血血红红蛋蛋白白和和红红细细胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。n手手指指血血红红细细胞胞与与静静脉脉采采血血有有差差异异且且影影响响因因素素多多，条条件件允允许许时时应应尽尽量静脉采血。量静脉采血。注意事项注意事项 实实 验验 一一1.采血及计数室充液注意事项:注意事项实 验 一192 2一一定定要要在在稀稀释释液液转转为为棕棕褐褐色色后后方方能能充充池池计计数数，否否则则因因RBCRBC残存而干扰计数使结果偏高。残存而干扰计数使结果偏高。3 3白白细细胞胞稀稀释释液液不不能能破破坏坏有有核核红红细细胞胞，某某些些病病理理情情况况下下外外周周血血出出现现大大量量有有核核红红细细胞胞，可可使使白白细细胞胞计计数数结结果果偏偏高，应进行校正。高，应进行校正。校正公式：校正公式：WBC=A100/(100+B)WBC=A100/(100+B)其其中中A:A:校校正正前前WBCWBC数数；B:B:分分类类计计数数100100个个WBCWBC时时遇遇到到的的有有核核RBCRBC数。数。实实 验验 一一2一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因RBC残存20