肺炎病原学诊断ppt课件

社区获得性社区获得性肺炎病原学诊断肺炎病原学诊断张泓张泓 肺炎病原学诊断社区获得性肺炎病原学诊断张泓 肺炎病原学诊断1社区获得性肺炎病原学 病毒病毒病原病原 合胞病毒合胞病毒、腺病毒、腺病毒 流感病毒流感病毒A A和和B B 副流感病毒副流感病毒1 1、2 2、3 3 偏肺病毒、鼻病毒偏肺病毒、鼻病毒 细菌细菌病原病原肺炎链球菌、流感嗜血杆菌肺炎链球菌、流感嗜血杆菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌军团菌属、结核杆菌等军团菌属、结核杆菌等肺炎病原学诊断社区获得性肺炎病原学病毒病原肺炎病原学诊断2社区获得性肺炎病原学 非典型性病原非典型性病原肺炎支原体肺炎支原体肺炎衣原体肺炎衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体 病毒感染为病毒感染为25%35%25%35%，细菌感染为，细菌感染为2154%,2154%,非典非典型病原如支原体、衣原体感染为型病原如支原体、衣原体感染为7%,7%,两种以上病两种以上病原混合原混合11%11%。肺炎病原学诊断社区获得性肺炎病原学非典型性病原肺炎病原学诊断3不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现出生至20日B族链球菌 早发型败血症的肺部表现。G-肠道细菌 常为院内感染,经常在生后1周才发现。巨细胞病毒 全身巨细胞病毒感染的肺部表现,伴先天性感染的其他体征存在。3周至3月 沙眼衣原体 由母体生殖道感染,出现发热及进展性、亚急性间质性肺炎。RSV发病的高峰在27月龄,常以喘息为特点,在各季或早春多见。副流感病毒3同RSV感染非常相似,在婴儿晚期影响很小,在冬季不流行。肺炎链球菌 最常见的细菌性肺炎病原。婴幼儿年龄组 百日咳杆菌 主要引起支气管炎,但在严重病例也引起肺炎。金黄色葡萄球菌 可引起重症肺炎常合并渗出。肺炎病原学诊断不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现出生至4不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现4 月至4岁RSV、腺病毒、副流感流感病毒、鼻病毒是引起年幼儿肺炎的最常见病因。肺炎链球菌 最常引起大叶性肺炎,但也可引起其他形式的肺炎。流感嗜血杆菌其他血清型和不定型株在发展中国家可引起肺炎肺炎支原体 在这一年龄组中的年长儿中主要引起肺炎结核分枝杆菌 在此病原感染高度流行地区是肺炎的重要病因。肺炎病原学诊断不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现4 月5不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现5至15岁 肺炎支原体 这一年龄组儿童肺炎的主要病因肺炎衣原体 可能是这一年龄组年长儿童肺炎的一个重要病因肺炎链球菌 大叶性肺炎的最主要病原,但可能也引起其他形式肺炎。结核分枝杆菌 在此病原感染的高发地区是肺炎的常见病因,并可能在青春期和妊娠期病情恶化 肺炎病原学诊断不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现5 至6儿童CAP病原学诊断方法 病原菌分离培养病原菌分离培养 免疫学方法检测病原的特异性抗原抗体免疫学方法检测病原的特异性抗原抗体 分子生物学诊断方法分子生物学诊断方法肺炎病原学诊断儿童CAP 病原学诊断方法病原菌分离培养肺炎病原学诊断7病原培养分离 标本种类 血液血液 胸水胸水 支气管肺泡灌洗支气管肺泡灌洗 痰液，咽、鼻分泌物痰液，咽、鼻分泌物肺炎病原学诊断病原培养分离标本种类肺炎病原学诊断8血液培养血液培养 肺炎伴发菌血症机会肺炎伴发菌血症机会5 51010，重症和免疫抑制，重症和免疫抑制患者则较高。患者则较高。血标本采集方便、安全，且污染机会少、特异性血标本采集方便、安全，且污染机会少、特异性高，它们在病原学诊断上具有特殊意义。高，它们在病原学诊断上具有特殊意义。重症特别是免疫抑制宿主肺炎，应尽早、多次采重症特别是免疫抑制宿主肺炎，应尽早、多次采血作细菌和真菌培养。血作细菌和真菌培养。肺炎病原学诊断血液培养肺炎伴发菌血症机会510，重症和免疫抑制患者则9血液培养 血培养标本要求采集必须在使用抗菌药物之前采集必须在使用抗菌药物之前采用全自动血培养仪配备的儿童专用血培养瓶采用全自动血培养仪配备的儿童专用血培养瓶每次每次2 2瓶，在不同部位采血瓶，在不同部位采血采血量，儿童采血量，儿童3-5ml3-5ml，婴幼儿，婴幼儿1-2ml1-2ml。采集后的血培养瓶应立即送往实验室采集后的血培养瓶应立即送往实验室肺炎病原学诊断血液培养血培养标本要求肺炎病原学诊断10采血份数与阳性率之间的关系采血份数与阳性率之间的关系肺炎病原学诊断采血份数与阳性率之间的关系肺炎病原学诊断11采血量与阳性率的关系采血量与阳性率的关系肺炎病原学诊断采血量与阳性率的关系肺炎病原学诊断12胸水胸水 对大多数伴有胸腔积液的肺炎，无论确诊与否，应该行胸对大多数伴有胸腔积液的肺炎，无论确诊与否，应该行胸腔穿刺术采集标本。胸腔积液或脓胸均应做厌氧培养。腔穿刺术采集标本。胸腔积液或脓胸均应做厌氧培养。胸水是无污染标本，不论被检测出的微生物数量多少，都胸水是无污染标本，不论被检测出的微生物数量多少，都被认为是病原体。被认为是病原体。细胞计数和细胞计数和pHpH测定，腺苷脱氨酶（测定，腺苷脱氨酶（ADAADA）测定对鉴别结核）测定对鉴别结核胸膜炎具有较好价值。胸膜炎具有较好价值。胸水的抗原检测用于疾病诊断，如流感嗜血杆菌胸水的抗原检测用于疾病诊断，如流感嗜血杆菌b b型、肺型、肺炎链球菌、军团菌或新型隐球菌。炎链球菌、军团菌或新型隐球菌。肺炎病原学诊断胸水 对大多数伴有胸腔积液的肺炎，无论确诊与否，应该行胸腔穿13痰标本 痰培养结果应结合临床表现、直接镜检、细胞学筛选、定量痰培养结果应结合临床表现、直接镜检、细胞学筛选、定量或半定量培养以及所发现的微生物的致病力等加以解释。或半定量培养以及所发现的微生物的致病力等加以解释。可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌的检测，但不适于检测厌可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌的检测，但不适于检测厌氧菌。氧菌。在无菌条件下，用负压吸引法吸取患儿会咽部以下的下呼吸在无菌条件下，用负压吸引法吸取患儿会咽部以下的下呼吸道的分泌物，置灭菌三通管内。道的分泌物，置灭菌三通管内。肺炎病原学诊断痰标本痰培养结果应结合临床表现、直接镜检、细胞学筛选、定量或14痰标本 痰涂片镜检每低倍镜视野痰涂片镜检每低倍镜视野102525个个中性粒细胞。中性粒细胞。痰标本也可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道痰标本也可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染。的病毒感染。肺炎病原学诊断痰标本痰涂片镜检每低倍镜视野25个中15支气管肺泡灌洗液 对于不能咳出或诱导出足够的痰液患者，支气管肺泡灌洗对于不能咳出或诱导出足够的痰液患者，支气管肺泡灌洗液可作为获取标本进行病原菌培养的一种方法。液可作为获取标本进行病原菌培养的一种方法。支气管肺泡灌洗液在检测需氧菌、真菌、军团菌和分枝杆支气管肺泡灌洗液在检测需氧菌、真菌、军团菌和分枝杆菌等感染时可提高阳性检出率。有研究表明特异性高达菌等感染时可提高阳性检出率。有研究表明特异性高达8989100%100%。支气管肺泡灌洗液经低速在玻片上制成细胞标本涂片，可支气管肺泡灌洗液经低速在玻片上制成细胞标本涂片，可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染的以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染的8 8种病毒。种病毒。鳞状上皮细胞鳞状上皮细胞 1 1中性粒细胞中性粒细胞8080为合格标本。为合格标本。肺炎病原学诊断支气管肺泡灌洗液对于不能咳出或诱导出足够的痰液患者，支气管肺16标本采集和送检 痰和支气管肺泡灌洗液痰和支气管肺泡灌洗液必须在使用抗菌药物之前或必须在使用抗菌药物之前或停停停停药药1 1天后留取天后留取天后留取天后留取标标本。本。本。本。标本采集后标本采集后1h1h内必须立即进行实验室处理。内必须立即进行实验室处理。室温下延搁室温下延搁2h2h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌的分离率，铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌则过度养菌的分离率，铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌则过度生长。生长。肺炎病原学诊断标本采集和送检痰和支气管肺泡灌洗液肺炎病原学诊断17我院呼吸道分离的主要细菌（2008-2009）肺炎链球菌肺炎链球菌869869株（株（14%14%）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌692692株（株（11%11%）流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌662662株（株（10%10%）肺炎支原体肺炎支原体878878株（株（16.3%16.3%）肺炎病原学诊断我院呼吸道分离的主要细菌（2008-2009）肺炎链球菌18细菌培养菌落形态 肺炎链球菌肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌肺炎病原学诊断细菌培养菌落形态肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌 19细菌培养菌落形态肺炎病原学诊断细菌培养菌落形态肺炎病原学诊断20MP培养肺炎病原学诊断MP培养肺炎病原学诊断21MP培养肺炎病原学诊断MP培养肺炎病原学诊断22MFA检测呼吸道病毒肺炎病原学诊断MFA检测呼吸道病毒肺炎病原学诊断23MFA法检测呼吸道病毒肺炎病原学诊断MFA法检测呼吸道病毒肺炎病原学诊断24病原微生物的抗体检测 血清学检查通常用于检测非典型病原体如肺炎支血清学检查通常用于检测非典型病原体如肺炎支原体（原体（MPMP）、肺炎衣原体（）、肺炎衣原体（CPCP）、军团菌。）、军团菌。常用方法有间接免疫荧光试验（常用方法有间接免疫荧光试验（IFAIFA）、酶联免疫）、酶联免疫吸附试验（吸附试验（ELISAELISA）、放射免疫法（）、放射免疫法（RIARIA）、颗粒）、颗粒凝集试验（凝集试验（PAPA）等。）等。肺炎病原学诊断病原微生物的抗体检测 血清学检查通常用于检测非典型病原体如肺25MP血清学检查 ELISA法 检测检测MP-IgMMP-IgM、MP-IgGMP-IgG 定性或定量定性或定量 PA法 检测检测MP-IgMMP-IgM 确诊确诊MPMP急性感染则应强调双份血清急性感染则应强调双份血清(间隔间隔2 2周周)恢恢复期抗体滴度上升复期抗体滴度上升4 4倍或下降至原来的倍或下降至原来的1/41/4或抗或抗体滴度持续体滴度持续1:1601:160。肺炎病原学诊断MP血清学检查ELISA法肺炎病原学诊断26CP血清学检查 微量免疫荧光法微量免疫荧光法(MIF)(MIF)、酶联免疫吸附实验、酶联免疫吸附实验(ELISA)(ELISA)抗体检测抗体检测3 3种：种：IgM,IgGIgM,IgG和和IgAIgA 初次感染初次感染(原发感染原发感染)时，时，IgMIgM于发病后于发病后3 3周出现，周出现，IgGIgG于发病后于发病后6 6一一8 8周出现，而周出现，而IgAIgA反应较弱或不出现。反应较弱或不出现。再次感染再次感染(重复感染重复感染)时，时，IgGIgG常在常在1 1一一2 2周内出现，且周内出现，且效价可以很高，但往往没有效价可以很高，但往往没有IgMIgM出现或其效价很低。出现或其效价很低。肺炎病原学诊断CP血清学检查微量免疫荧光法(MIF)、酶联免疫吸附实验(E27军团菌血清抗体检测 尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人痰或尿液的嗜肺军团菌抗原。痰或尿液的嗜肺军团菌抗原。痰或尿液的嗜肺军团菌抗原。痰或尿液的嗜肺军团菌抗原。血清学检查血清学检查血清学检查血清学检查:间接免疫荧光法或酶联免疫吸附试验间接免疫荧光法或酶联免疫吸附试验间接免疫荧光法或酶联免疫吸附试验间接免疫荧光法或酶联免疫吸附试验检测特异性检测特异性检测特异性检测特异性IgMIgM抗体，如效价抗体，如效价抗体，如效价抗体，如效价 1 1：128128或双份血清或双份血清或双份血清或双份血清效价呈效价呈效价呈效价呈4 4倍以上升高可做出确定诊断。倍以上升高可做出确定诊断。倍以上升高可做出确定诊断。倍以上升高可做出确定诊断。肺炎病原学诊断军团菌血清抗体检测尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人28军团菌检测军团菌检测分类分类检材检材方法方法注意事项注意事项细菌学基因学(PCR)血清学尿抗原检测尿抗原检测痰培养分泌物支气管肺泡灌洗液阳性率低下阳性率低下同上Leg基因mip 基因军团菌特异性嗜肺军团菌特异性血清微量凝集IFA,DFA双份血清效价呈4倍增长单份血清效价 256尿液ImmunochlomatographyELISARIA嗜肺军团菌嗜肺军团菌1型特异性型特异性发病60天内，但免疫缺陷病人可延长肺炎病原学诊断军团菌检测分类检材方法注意事项细菌学基因学(PCR)血清学29IFA检测呼吸道病原抗体肺炎病原学诊断IFA检测呼吸道病原抗体肺炎病原学诊断30分子生物学技术 优点优点直接从临床标本中快速、准确地检测出包括苛养菌在直接从临床标本中快速、准确地检测出包括苛养菌在内的细菌内的细菌.检测耐药基因检测耐药基因对耐药菌进行流行病学研究对耐药菌进行流行病学研究PCRPCR方法方法 方法方法随机扩增随机扩增DNADNA多态性分析多态性分析限制性片段长度多态性分析限制性片段长度多态性分析PCRPCR多重多重PCRPCR PFGEPFGE肺炎病原学诊断分子生物学技术优点肺炎病原学诊断31MP分子生物学检测 PCRPCR检测检测MPP1MPP1粘附蛋白：根据肺炎支原体粘附蛋白：根据肺炎支原体P1P1粘附粘附蛋白设计蛋白设计PCRPCR引物：引物：P1:5-GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG-3P1:5-GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG-3 P2:5-GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG-3P2:5-GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG-3 扩增产物209bp肺炎病原学诊断MP分子生物学检测PCR检测MPP1粘附蛋白：根据肺炎支原体32双重PCR简便、快速检测军团菌 根据军团菌根据军团菌16SrRNA16SrRNA基因和基因和mipmip基因序列设计合成基因序列设计合成引物，可以扩增引物，可以扩增 386bp16SrRNA386bp16SrRNA基因和基因和 206bp206bpmipmip基因片段。基因片段。用该方法对军团菌标准参考菌株和用该方法对军团菌标准参考菌株和4747份临床标本份临床标本进行了检测。进行了检测。结果：通过一次结果：通过一次PCRPCR反应，不仅能够检测嗜肺军反应，不仅能够检测嗜肺军团菌，而且能够检测非嗜肺的军团菌，从而克服团菌，而且能够检测非嗜肺的军团菌，从而克服了单一引物应用时的不足。了单一引物应用时的不足。肺炎病原学诊断双重PCR简便、快速检测军团菌根据军团菌16SrRNA基因和33红霉素耐药肺炎链球菌PFGE图肺炎病原学诊断红霉素耐药肺炎链球菌PFGE图肺炎病原学诊断34 谢谢！肺炎病原学诊断肺炎病原学诊断35