淋病等实验室诊断技术培训ppt课件

性病实验室诊断在性病防治中的作用性病实验室诊断在性病防治中的作用效果评价效果评价 临床服务临床服务疫情监测疫情监测科学研究科学研究 实验室诊断实验室诊断1 1淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024性病实验室诊断在性病防治中的作用效果评价 临床服务疫情监测科1实验室诊断在性病防治中的作用实验室诊断在性病防治中的作用经典性病经典性病经典性病经典性病监测性病监测性病监测性病监测性病梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病软下疳软下疳软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病软下疳软下疳软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDS新的方法监测的性病新的方法监测的性病新的方法监测的性病新的方法监测的性病梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDS2 2淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024实验室诊断在性病防治中的作用经典性病监测性病梅毒梅毒新的方法2性病实验室诊断在性病防治中的作用性病实验室诊断在性病防治中的作用冰山一角冰山一角冰山一角冰山一角感染者感染者有症状者有症状者就诊者就诊者正确诊断者正确诊断者接受治疗者接受治疗者治愈者治愈者3 3淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024性病实验室诊断在性病防治中的作用冰山一角感染者有症状者就诊者3在性病临床服务中的应用在性病临床服务中的应用确诊有症状的病例 实验室检测对有症状的性病患者可以提高临床诊断的特异性，达到明确诊断的目的。发现无症状的感染 有些性病感染者，特别是女性，在感染后往往不表现出典型的症状，或症状轻微。对于这类人群只有通过实验室检测方法才能发现其感染。从而减少由于感染后未能得到及时的治疗而引起严重的并发症及后遗症以及造成新的传播。4 4淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024在性病临床服务中的应用确诊有症状的病例4淋病等实验室诊断技4在性病临床服务中的应用在性病临床服务中的应用 指导临床实践 了解病原体对药物的敏感性及其流行趋势，从而为临床治疗提供可靠的依据，保障治疗的有效性。此外，实验室检测对新药的推广应用和新治疗方案的效果评估也提供了必要的支持。观察疗效及判断治愈 性病治疗效果的正确评价，有助于尽早切断传染源、预防并发症及后遗症的发生。临床疗效的判断往往需要借助于实验室的检测。5 5淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024在性病临床服务中的应用 指导临床实践5淋病等实验室诊断技术5性病实验室诊断的现状性病实验室诊断的现状梅毒梅毒:TPPA/TPHATPPA/TPHA淋病淋病:培养培养 沙眼衣原体沙眼衣原体:核酸检测核酸检测/EIA/EIA生殖器疱疹生殖器疱疹:抗原抗原/抗体抗体 EIAEIA尖锐湿疣尖锐湿疣:核酸检测核酸检测基本普基本普及方法及方法梅毒梅毒:RPR/TRUSTRPR/TRUST淋球菌淋球菌:涂片镜检涂片镜检沙眼衣原体沙眼衣原体:快速抗原检测快速抗原检测加强普加强普及方法及方法支原体培养支原体培养,广泛使广泛使用方法用方法6 6淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024性病实验室诊断的现状梅毒:TPPA/T6淋病实验室诊断淋病实验室诊断概况概况-病原学病原学(1)(1)淋病是指由淋病奈瑟菌淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria(Neisseria gonorrhoeae,gonorrhoeae,简称淋球菌简称淋球菌)引起的各种化引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病病.淋球菌为革兰阴性双球菌，大小约淋球菌为革兰阴性双球菌，大小约0.60.60.8m0.8m。通常成对生长，两菌接触面平坦。通常成对生长，两菌接触面平坦。7 7淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋病实验室诊断概况-病原学(1)淋病是指由淋病奈瑟菌(Ne7概况概况-病原学病原学(2)(2)淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜炎球菌及其他共栖奈瑟菌在生物学上炎球菌及其他共栖奈瑟菌在生物学上有许多相似性，可通过生化特性加以有许多相似性，可通过生化特性加以鉴别。发性感染部位主要为男性尿道鉴别。发性感染部位主要为男性尿道或女性宫颈管内膜。或女性宫颈管内膜。8 8淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024概况-病原学(2)淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜炎球菌及其8概况概况-流行病学流行病学淋病的传播途径有以下二种：淋病的传播途径有以下二种：1 1、直接性接触感染：成人淋病几乎全部、直接性接触感染：成人淋病几乎全部 通过性接触感染。通过性接触感染。2 2、间接接触感染：儿童可通过污染了淋、间接接触感染：儿童可通过污染了淋 球菌的物品间接感染。新生儿可通过球菌的物品间接感染。新生儿可通过 母亲产道分泌物间接感染。母亲产道分泌物间接感染。9 9淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024概况-流行病学淋病的传播途径有以下二种：9淋病等实验室诊断技9淋病的实验室诊断方法淋病的实验室诊断方法直接显微镜检查淋球菌；直接显微镜检查淋球菌；分离培养淋球菌；分离培养淋球菌；非非培培养养技技术术检检测测淋淋球球菌菌细细胞胞成成份份如如抗抗原原或或DNADNA（EIA,PCREIA,PCR）1010淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋病的实验室诊断方法直接显微镜检查淋球菌；10淋病等实验室诊10标本的采集标本的采集 取材部位依据取材部位依据 年龄年龄 性别性别 性接触方式性接触方式 临床表现临床表现取材拭子种类取材拭子种类 藻酸钙拭子藻酸钙拭子 普通棉拭子普通棉拭子 涤纶拭子涤纶拭子 1111淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集 取材部位依据取材拭子种类11淋病等实验室诊断技术11标本的采集标本的采集-取材部位取材部位(1)(1)男性男性异性恋者异性恋者:采集尿道标本，有口淫史者加取咽部标本；采集尿道标本，有口淫史者加取咽部标本；同性恋者同性恋者:采集尿道、直肠及咽部标本采集尿道、直肠及咽部标本.女性女性 采采集集宫宫颈颈标标本本，必必要要时时从从尿尿道道、直直肠肠、咽咽部部、前前庭庭大大腺腺和尿道旁腺取材和尿道旁腺取材.1212淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集-取材部位(1)男性12淋病等实验室诊断技术8/112标本的采集标本的采集-取材部位取材部位(2)(2)幼女幼女 幼幼女女和和/或或处处女女膜膜未未破破的的感感染染者者标标本本：采采集集阴阴道分泌物道分泌物新生儿眼炎患者新生儿眼炎患者 采集眼结膜分泌物采集眼结膜分泌物1313淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集-取材部位(2)幼女13淋病等实验室诊断技术8/113标本的采集标本的采集-取材方法取材方法(1)(1)尿道尿道男性患者男性患者 用用手手指指从从阴阴茎茎根根部部向向尿尿道道口口方方向向挤挤压压，有有症症状状患患者者可可挤挤出出脓脓液液，用用取取样样拭拭子子蘸蘸取取脓脓液液作作涂涂片片或或培培养养。对对挤挤压压后后无无明明显显分分泌泌物物时时，采采用用男男用用取取材材拭拭子子插插入入尿尿道道 2 23cm3cm，稍稍用用力力转转动动，保保留留数数秒秒钟钟再再取取出，出，以采集到粘膜上皮细胞。以采集到粘膜上皮细胞。1414淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集-取材方法(1)尿道14淋病等实验室诊断技术8/114标本的采集标本的采集-取材方法取材方法(2)(2)尿道尿道女性患者女性患者 可可抵抵着着耻耻骨骨联联合合轻轻轻轻按按摩摩尿尿道道口口，挤挤压压出出分分泌泌物物。如如果果无无明明显显分分泌泌物物，可可用用同同男性相似的上述方法取材。男性相似的上述方法取材。1515淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集-取材方法(2)尿道15淋病等实验室诊断技术8/115标本的采集标本的采集-取材方法取材方法(3)(3)宫颈宫颈 避避免免使使用用防防腐腐剂剂和和润润滑滑剂剂，因因为为这这些些物物质质对对淋淋球球菌菌有有抑抑制制作作用用。仔仔细细检检查查阴阴道道壁壁和和宫宫颈颈，如如果果宫宫颈颈口口外外面面的的分分泌泌物物较较多多，先先用用无无菌菌棉棉拭拭清清除除过过多多的的宫宫颈颈粘粘液液。将将一一取取样样拭拭子子插插入入宫宫颈颈管管内内1 12cm2cm，稍稍用用力力转转动动，保保留留10103030秒后取出。秒后取出。眼部眼部 用用男男性性采采样样拭拭子子在在眼眼结结膜膜处处蘸蘸取取分分泌泌物物或或轻轻绕绕眼眼结结膜。膜。1616淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集-取材方法(3)16淋病等实验室诊断技术8/11/16标本的采集标本的采集-取材方法取材方法(4)(4)直肠直肠 将将取取样样拭拭子子插插入入肛肛门门2 23cm3cm，从从紧紧靠靠肛肛环环边边的的隐隐窝中取材。避免接触粪便。窝中取材。避免接触粪便。阴道阴道 青青春春期期前前女女孩孩可可采采集集阴阴道道标标本本。将将取取样样拭拭子子置置于于阴道后穹窿阴道后穹窿10101515秒，采集阴道分泌物。秒，采集阴道分泌物。咽部咽部 从咽后壁或扁桃体隐窝取材从咽后壁或扁桃体隐窝取材 1717淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集-取材方法(4)直肠17淋病等实验室诊断技术8/117标本的运送标本的运送淋淋球球菌菌的的抵抵抗抗力力弱弱，对对热热敏敏感感，不不耐耐干干燥燥。取取材材后后标标本本若若不不能能立立即即接接种种于于选选择择性性培培养养基基上上时时，需需采采用用运运送送系系统统。置置于于非非营营养养型型运运送送培培养养基基中中的的标标本本应应在在1212小小时时内内送送到到实实验验室室，接接种种于于选选择择性性培培养养基基，分分离离阳阳性性率率可可达达90%90%以以上上。超超过过2424小小时则分离阳性率下降。时则分离阳性率下降。1818淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的运送淋球菌的抵抗力弱，对热敏感，不耐干燥。取材后标本若18直接显微镜检查直接显微镜检查染色方法染色方法:革兰染液革兰染液 美兰染液美兰染液 姬姆萨染液姬姆萨染液 荧光抗体荧光抗体 革革兰兰染染色色为为一一传传统统方方法法，因因简简便便、快快捷捷及及价价廉廉、仍仍然然为为最最广广泛泛采采用用的的方方法法。革革兰兰染染色色将将菌菌分分为为二二大大类类，即即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。1919淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024直接显微镜检查染色方法:19淋病等实验室诊断技术8/11/219革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌2020淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌20淋病等实验室诊断技术8/120直接显微镜检查的临床意义直接显微镜检查的临床意义男性淋菌性尿道炎的尿道标本男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达敏感性及特异性可高达95%95%99%99%，具诊断价值。，具诊断价值。宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅敏感性仅404070%70%。不不推推荐荐直直接接显显微微镜镜检检查查诊诊断断直直肠肠和和咽咽部部淋淋球球菌菌感感染染。亦亦不不能能用用于于疗疗后后判判愈愈。如如果果在在多多形形核核细细胞胞外外见见到到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。2121淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024直接显微镜检查的临床意义男性淋菌性尿道炎的尿道标本21淋病等21淋球菌镜检报告格式1、革兰氏阴性双球菌2、细胞内外3、该细胞指的是什么细胞规范格式：细胞内外见到革兰氏阴性双球菌细胞内外见到革兰氏阴性双球菌 或细胞内外未见到革兰氏阴性双球菌或细胞内外未见到革兰氏阴性双球菌2222淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌镜检报告格式1、革兰氏阴性双球菌22淋病等实验室诊断技2223美国中国美国和中国淋病病例性别分布比较美国和中国淋病病例性别分布比较2323淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/202423美国中国美国和中国淋病病例性别分布比较23淋病等实验室诊23淋球菌培养淋球菌培养培养法为诊断淋病的金标准培养法为诊断淋病的金标准.对女性淋病的确诊应做淋球菌培养对女性淋病的确诊应做淋球菌培养 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。培养的敏感性培养的敏感性81100%81100%。培养的优点有：培养的优点有：特异性极高（特异性极高（100%100%）；）；可发现无症状淋球菌感染患者；可发现无症状淋球菌感染患者；可确诊儿童性虐待；可确诊儿童性虐待；可用于进一步作药敏试验；可用于进一步作药敏试验；可用于治疗后的判愈试验。可用于治疗后的判愈试验。2424淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养培养法为诊断淋病的金标准.24淋病等实验室诊断技术24淋球菌培养淋球菌培养选择性培养基选择性培养基 评价培养基质量的一个重要指标评价培养基质量的一个重要指标:男男性性淋淋菌菌性性尿尿道道炎炎标标本本的的革革兰兰染染色色与与培培养养的的符符合合率率应应达达95%95%100%100%。如如果果革革兰兰染染色色阳阳性性/培培养养阴阴性性的的比比率率较较高高则则表表明明选选择择性性培培养养基基的的质质量欠佳量欠佳2525淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养选择性培养基25淋病等实验室诊断技术8/11/2025淋球菌培养淋球菌培养接种标本接种标本 取取材材后后标标本本应应尽尽可可能能及及早早接接种种。培培养养基基应应先先置置于于室室温温或或孵孵箱箱中中预预温温。将将取取材材的的拭拭子子转转动动涂涂布布于于平平皿皿的的上上1/41/4范范围围，然然后后用用接接种环分区划线，以保证获得较纯的单个菌落。种环分区划线，以保证获得较纯的单个菌落。2626淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养接种标本26淋病等实验室诊断技术8/11/202326接种标本接种标本-四区划分接种四区划分接种2727淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024接种标本-四区划分接种27淋病等实验室诊断技术8/11/2027接种标本接种标本-四区划分接种四区划分接种2828淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024接种标本-四区划分接种28淋病等实验室诊断技术8/11/2028淋球菌培养淋球菌培养培培养养条条件件 ：35 35 3636，含含5%5%10%10%COCO2 2，湿湿润（润（70%70%湿度）的环境。湿度）的环境。COCO2 2环环境境可可由由COCO2 2培培养养箱箱、COCO2 2产产气气袋袋及及烛烛缸缸提提供供。使使用用烛烛缸缸时时，应应使使用用白白色色、无无芳芳香香味味的的无无毒毒性性蜡蜡烛烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。培养时间：培养时间：24244848小时小时2929淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养培养条件：35 36，含5%10%CO29淋球菌培养淋球菌培养-观察结果观察结果3030淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养-观察结果30淋病等实验室诊断技术8/11/20230淋球菌培养淋球菌培养-淋球菌的初步鉴定淋球菌的初步鉴定初步鉴定淋球菌的主要依据初步鉴定淋球菌的主要依据 菌落特征菌落特征氧化酶试验氧化酶试验 革兰染色革兰染色3131淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养-淋球菌的初步鉴定初步鉴定淋球菌的主要依据31淋病31淋球菌培养淋球菌培养-淋球菌的确证试验淋球菌的确证试验来来自自泌泌尿尿生生殖殖道道符符合合初初步步鉴鉴定定标标准准的的分分离离株株，一一般可诊断为淋球菌，准确性达般可诊断为淋球菌，准确性达98%98%。对对于于菌菌落落形形态态不不典典型型的的分分离离株株，来来自自咽咽部部、眼眼睛睛、或或其其他他泌泌尿尿生生殖殖道道外外部部位位的的分分离离株株，来来自自低低危危人人群群（如如儿儿童童）的的分分离离株株，以以及及涉涉及及医医疗疗法法律律案案例例的分离株，应作确证试验。的分离株，应作确证试验。3232淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养-淋球菌的确证试验来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的32淋球菌培养淋球菌培养-淋球菌的确证试验淋球菌的确证试验糖发酵试验糖发酵试验免疫学试验免疫学试验 -荧光抗体染色荧光抗体染色 -协同凝集试验协同凝集试验 酶底物试验酶底物试验DNADNA探针试验探针试验 3333淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌培养-淋球菌的确证试验糖发酵试验33淋病等实验室诊断技33糖发酵试验糖发酵试验糖糖发发酵酵试试验验检检测测奈奈瑟瑟球球菌菌分分解解特特定定糖糖类类(葡葡萄萄糖糖、麦麦芽芽糖糖、乳乳糖糖及及蔗蔗糖糖)产产酸酸的的能能力力。根根据据淋淋球球菌菌仅仅分分解解葡葡萄萄糖糖，脑脑膜膜炎炎球球菌菌分分解解葡葡萄萄糖糖和和麦麦芽芽糖糖，乳乳屑屑奈奈瑟瑟球球菌菌分分解解葡葡萄萄糖糖、麦麦芽芽糖糖、蔗蔗糖糖或或不不分分解解这这些些糖糖类类，可可将将淋淋球球菌菌与与可可能能在在淋淋球球菌菌选选择择性性培培养养基基上上分分离离出出的的其其他他奈奈瑟瑟球球菌菌加以鉴别。加以鉴别。3434淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024糖发酵试验糖发酵试验检测奈瑟球菌分解特定糖类(葡萄糖、麦芽糖34糖发酵试验糖发酵试验-奈瑟球菌属的糖发酵特征奈瑟球菌属的糖发酵特征细菌细菌葡萄糖葡萄糖麦芽糖麦芽糖乳糖乳糖蔗糖蔗糖淋球菌淋球菌+-脑膜炎球菌脑膜炎球菌+-乳酰胺奈瑟菌乳酰胺奈瑟菌+-灰色奈瑟球菌灰色奈瑟球菌-布兰汉卡他球菌布兰汉卡他球菌-3535淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024糖发酵试验-奈瑟球菌属的糖发酵特征细菌葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖淋35淋球菌的鉴定特征淋球菌的鉴定特征菌落形态菌落形态淋球菌样淋球菌样革兰染色革兰染色革兰阴性双球菌革兰阴性双球菌氧化酶试验氧化酶试验阳性阳性过氧化物酶试验过氧化物酶试验阳性阳性快速糖发酵试验快速糖发酵试验G+L-M-S-3636淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌的鉴定特征菌落形态淋球菌样革兰染色革兰阴性双球菌氧化酶36非培养诊断技术非培养诊断技术-核酸检测核酸检测核酸检测的特点核酸检测的特点 不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件；不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件；仅适合尿道或宫颈标本，以及尿液；仅适合尿道或宫颈标本，以及尿液；不能进行抗生素敏感性试验不能进行抗生素敏感性试验 用于判愈试验需在治疗后至少用于判愈试验需在治疗后至少3 3 周以上进行周以上进行.3737淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024非培养诊断技术-核酸检测核酸检测的特点37淋病等实验室诊断37淋球菌耐药检测淋球菌耐药检测3838淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌耐药检测38淋病等实验室诊断技术8/11/202338淋球菌耐药检测方法淋球菌耐药检测方法琼脂纸片扩散法琼脂纸片扩散法 E test E test 琼脂稀释法琼脂稀释法分子生物学方法分子生物学方法(耐药基因检测耐药基因检测)3939淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌耐药检测方法琼脂纸片扩散法 39淋病等实验室诊断技术839琼脂纸片扩散法琼脂纸片扩散法4040淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024琼脂纸片扩散法40淋病等实验室诊断技术8/11/202340琼脂稀释法琼脂稀释法 将待检菌接种到含有不同浓度抗菌药物的将待检菌接种到含有不同浓度抗菌药物的琼脂平皿上，抗菌药物浓度小时细菌生长，浓度大琼脂平皿上，抗菌药物浓度小时细菌生长，浓度大时细菌生长被抑制，据此可测出该菌株最低抑菌制时细菌生长被抑制，据此可测出该菌株最低抑菌制浓度（浓度（MIC),MIC),判断对抗菌药物的敏感性。此法主要判断对抗菌药物的敏感性。此法主要用于耐药监测用于耐药监测.MICMIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为药物浓度，表示单位为 g/ml g/ml 4141淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024琼脂稀释法 将待检菌接种到含有不同浓度抗菌药物的41E testE test4242淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024E test42淋病等实验室诊断技术8/11/202342淋球菌耐药监测淋球菌耐药监测-内容与方法内容与方法监测药物监测药物 青霉素青霉素 头孢克肟头孢克肟 四环素四环素 阿奇霉素阿奇霉素 大观霉素大观霉素 头孢曲松头孢曲松 环丙沙星环丙沙星4343淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌耐药监测-内容与方法43淋病等实验室诊断技术8/11/43NG cases in 2006 3,000GRSP sites in 1987-2003GRSP sites in 2004-2006GRSP sites in 2007-1987：个省个省1992-2006 5个省个省2007-2009 个省个省2010-2012 10个省（个省（12点）点）中国淋球菌耐药监测网络中国淋球菌耐药监测网络4444淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024NG cases in 2006 3,000GRSP s442006-20122006-2012年间广西南宁地区淋球菌对头孢曲松、大观霉素、年间广西南宁地区淋球菌对头孢曲松、大观霉素、年间广西南宁地区淋球菌对头孢曲松、大观霉素、年间广西南宁地区淋球菌对头孢曲松、大观霉素、环丙沙星、环丙沙星、环丙沙星、环丙沙星、TRNGTRNG和和和和PPNGPPNG的变化趋势的变化趋势的变化趋势的变化趋势 4545淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/20242006-2012年间广西南宁地区淋球菌对头孢曲松、大观霉素4520142014年年南宁地区淋球菌南宁地区淋球菌对抗生素敏感性对抗生素敏感性4646淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/20242014年南宁地区淋球菌对抗生素敏感性46淋病等实验室诊断技46淋球菌耐药监测项目淋球菌耐药监测项目1、开展时间1987年至2015年，连续监测28年2、课题：卫生厅课题（2014年）一项 科技厅课题（2007年）一项3、文章：总共发表文章近15篇（皮研所）其中大部分为国家级核心期刊论文，一篇SCI文章，中华医学会系列杂志4篇。4747淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024淋球菌耐药监测项目1、开展时间1987年至2015年，连续监47性病门诊检查发现存在的问题性病门诊检查发现存在的问题淋病淋病1、淋病缺少治疗药（大观、菌必治等）2、未开展淋球菌培养项目3、女性淋病仅涂片显微镜检查就诊断和报病4、淋球菌培养未按要求使用淋球菌培养基4848淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024性病门诊检查发现存在的问题淋病1、淋病缺少治疗药（大观、菌481.1.沙眼衣原体的病原学沙眼衣原体的病原学2.2.沙眼衣原体的分类与致病性沙眼衣原体的分类与致病性3.3.沙眼衣原体泌尿生殖道和婴幼儿感染的实沙眼衣原体泌尿生殖道和婴幼儿感染的实验室诊断验室诊断沙眼衣原体感染的实验室诊断 4949淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024沙眼衣原体的病原学沙眼衣原体感染的实验室诊断 49淋病等实验49一、一、沙眼衣原体病原学沙眼衣原体病原学严格细胞内寄生严格细胞内寄生 生活特性：原体和始体生活特性：原体和始体 正常生活周期 持续性感染5050淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024一、沙眼衣原体病原学严格细胞内寄生正常生活周期 50分类：沙眼、性病淋巴肉芽肿和鼠生物变种分类：沙眼、性病淋巴肉芽肿和鼠生物变种Serovar:A,B,Ba,C,D,E,F,G,H,I,K,L1,L2,L3Serovar:A,B,Ba,C,D,E,F,G,H,I,K,L1,L2,L3B B群群:B:B、BaBa、D D、E E、L1L1和和L2 L2 C C群群:A:A、C C、H H、I I、J J、K K和和L3 L3 中间群：中间群：G G 和和 F F二、二、沙眼衣原体分类与致病性沙眼衣原体分类与致病性5151淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024分类：沙眼、性病淋巴肉芽肿和鼠生物变种二、沙眼衣原体分类与致51三、沙眼衣原体泌尿生殖道感染的实验室诊断 检测方法：n直接涂片法n免疫学方法：ELISA，IFA，胶体金法n细胞培养法n分子生物学方法5252淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024三、沙眼衣原体泌尿生殖道感染的实验室诊断 检测方法：52淋病52标本的采集：标本的采集：泌尿生殖道感染：泌尿生殖道感染：男性：尿道拭子、尿沉渣和男性：尿道拭子、尿沉渣和EPSEPS等。等。女性：宫颈拭子女性：宫颈拭子/阴道拭子等。阴道拭子等。5353淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本的采集：53淋病等实验室诊断技术8/11/202353直接涂片法（姬姆萨染色）：直接涂片法（姬姆萨染色）：方法：涂片姬姆萨染色镜检包涵体方法：涂片姬姆萨染色镜检包涵体。5454淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024直接涂片法（姬姆萨染色）：54淋病等实验室诊断技术8/11/54沙眼衣原体包涵体姬姆萨染色临床应用：眼部感染：敏感性95，男性尿道：敏感性15，宫颈感染：敏感性41。应用范围：眼部标本。5555淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024沙眼衣原体包涵体姬姆萨染色临床应用：55淋病等实验室诊断技术55沙眼衣原体免疫荧光法检测临床应用沙眼衣原体免疫荧光法检测临床应用 敏感性：敏感性：74749090 高高 特异性特异性:98:989999 高高 缺缺 点：主观性，荧光显微镜点：主观性，荧光显微镜 临床应用：快速检测临床应用：快速检测 非培养法阳性标本的确证非培养法阳性标本的确证5656淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024沙眼衣原体免疫荧光法检测临床应用56淋病等实验室诊断技术8/56ELISAELISA法法 原理：原理：AbAbAgAgAb-Ab-酶酶 底物显色底物显色 方法：加入标本（孵育后洗板）方法：加入标本（孵育后洗板）酶标抗体（孵育后洗板）酶标抗体（孵育后洗板）底底 物（孵育）物（孵育）终止液机读或肉眼读。终止液机读或肉眼读。5757淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024ELISA法57淋病等实验室诊断技术8/11/202357免疫胶体金快速法：免疫胶体金快速法：原理：原理：方法：拭子方法：拭子I I液液80C1080C10分冷分冷5 5分分 滴加滴加5 5滴滴1515分读结果分读结果 结果：阳性：质控窗，结果窗结果：阳性：质控窗，结果窗 阴性：质控窗，结果窗阴性：质控窗，结果窗 失败：质控窗，结果窗失败：质控窗，结果窗5858淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024免疫胶体金快速法：58淋病等实验室诊断技术8/11/20258 免疫胶体金快速法检测临床应用免疫胶体金快速法检测临床应用 敏感性：敏感性：33.333.349.749.7 低低 特异性特异性:88.1:88.199.299.2 高高 缺缺 点：需要确证，不宜质控操作点：需要确证，不宜质控操作 临床应用：临床症状典型病例的检测临床应用：临床症状典型病例的检测 不适合非典型感染的筛查不适合非典型感染的筛查5959淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024 免疫胶体金快速法检测临床应用59淋病等实验室诊断技术8/159细胞培养法：细胞培养法：原理：衣原体在瘤细胞原理：衣原体在瘤细胞 生长，染色检测生长，染色检测 方法：制备方法：制备McCoyMcCoy细胞细胞 接种标本（接种标本（25002500转，转，1h1h）去上清加新培养液（培养去上清加新培养液（培养48487272）检测（碘或姬姆萨染色，荧光法）检测（碘或姬姆萨染色，荧光法）6060淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024细胞培养法：60淋病等实验室诊断技术8/11/2023606161淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/202461淋病等实验室诊断技术8/11/202361细胞培养法检测临床应用细胞培养法检测临床应用 敏感性：敏感性：52529292 低低 特异性特异性:99:99100100 高高 缺缺 点：实验室条件和实验技术要求高，点：实验室条件和实验技术要求高，费时，敏感性低费时，敏感性低 临床应用：临床应用：“金标准金标准”方法方法 方法学评价方法学评价 沙眼衣原体感染的确证沙眼衣原体感染的确证 沙眼衣原体感染的科研沙眼衣原体感染的科研 6262淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024细胞培养法检测临床应用62淋病等实验室诊断技术8/11/2062分子生物学检测临床应用分子生物学检测临床应用 敏感性：敏感性：75759797 高高 特异性特异性:98:98100100 高高 缺缺 点：实验室条件和技术要求高，点：实验室条件和技术要求高，成本高，费时，假阳性，抑制物成本高，费时，假阳性，抑制物临床应用：临床和健康体检临床应用：临床和健康体检 沙眼衣原体感染的筛查沙眼衣原体感染的筛查6363淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024分子生物学检测临床应用63淋病等实验室诊断技术8/11/2063生殖器疱疹的实验室诊断生殖器疱疹的实验室诊断 6464淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024生殖器疱疹的实验室诊断 64淋病等实验室诊断技术864概述 生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒(HSV)感染泌尿生殖器 及肛门部位皮肤粘膜而引起是一种复发性疾病,是一 种常见的性传播疾病。HSV是双链DNA病毒，属人类疱疹病毒亚科。人类是HSV的唯一自然宿主。HSV有两种类型;单纯疱疹病毒1型(SHV-1)和单纯疱疹病毒2型(HSV-2)。多数生殖器疱疹是由HSV-2引起。HSV可呈慢性复法过程，尚无彻底治愈的方法。6565淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024概述 生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒(HSV)感染泌尿生殖器 及65概述生殖器疱疹的复发可给患者带来很大的身体痛苦，影响其生活质量，并可能引起播散性HSV感染、病毒性脑膜炎、脊髓脊神经根病、盆腔炎综合征等一系列并发症。孕妇HSV感染影响生育，可引起子宫内新生儿的感染那，导致流产、早产、死产、新生儿死亡或发生严重疑症。6666淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024概述生殖器疱疹的复发可给患者带来很大的身体痛苦，影响其生活质66概述传染源：生殖器HSV 感染者、亚临床感染或无症状派读者、未识别症状或不典型生殖器疱疹患者是生殖器疱疹的主要传播源 传播途径有水平传播和垂直传播。水平传播主要是性接触传播，垂直传播是指母-婴及母-胎儿间传播，包括子宫内感染和经产道感染。6767淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024概述传染源：生殖器HSV 感染者、亚临床感染或无症状派读者、67标本采集 复发性生殖器疱疹病程12周,病毒排放持续平均时间4天;原发性病程23周,病毒排放持续时间12天。1、疱液取材；2、溃疡取材；3、宫颈取材；4、其他标本如尿道拭子，丘疹等。6868淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本采集 复发性生殖器疱疹病程12周,病68标本采集标本运送：如不能立即检测，应将标本洗入病毒运送液，置冰箱保持。如当天检测可置4保存，如不能当天检测，应置-70 保存6969淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024标本采集标本运送：如不能立即检测，应将标本洗入病毒运送液，置69实验方法1分离培养法2.细胞学检查3直接免疫荧光法4单纯疱疹抗原酶联免疫试验5HSV-DNA或基因检测法 6血清学检测7070淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024实验方法1分离培养法70淋病等实验室诊断技术8/11/2070病毒分离培养原理：培养法分离培养HSV，每天观察病毒对敏感细胞的细胞病变（CPE），初步确定病毒的存在。方法：单层细胞的准备；标本接种；细胞病变的观察；病毒传代；鉴定与分型。7171淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024病毒分离培养原理：培养法分离培养HSV，每天观察病毒对敏感细71病毒培养结果：培养超过4天后可以观察CPE，可初步确定HSV培养为阳性，如要确认需经过免疫学方法进一步鉴定证实。注意事项：1、细胞的敏感性（选敏感性好及活力强幼龄细胞）；2、标本取材时不应使用消毒剂和润滑剂及藻酸钙拭子；3、标本中病毒含量；4、保存；5、注意无菌操作，避免细菌和真菌污染7272淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024病毒培养结果：培养超过4天后可以观察CPE，可初步确定HSV72病毒培养临床意义：培养法是HSV检测的“金标准”，对病毒分离敏感、特异，生殖器疱疹患者的斑丘疹、水疱、脓疱、溃疡、结痂性皮损标本坐HSV培养的敏感性分别是25%、94%、87%、70%和27%。7373淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024病毒培养临床意义：73淋病等实验室诊断技术8/11/202373细胞学检查 HSV感染细胞后,可使细胞产生特征性的病变。取疱液或溃疡渗液涂片，在显微镜下观察细胞的变化，如细胞出现气球样变或出现胞浆空泡，感染细胞相互融合成多核巨细胞，同时观察病毒包涵体，有助于诊断。由于特异性差，目前不主张将细胞学检查应用于生殖器疱疹的诊断。7474淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024细胞学检查 HSV感染细胞后,可使细胞产生特征性的病变。取疱74直接免疫荧光法 国内外有检测疱疹病毒的荧光单克隆抗体试剂市售。直接免疫荧光法检测简单，阳性结果为上皮细胞的浆和细胞核内可见亮绿色的荧光。本法易受取材和涂片技术的影响。目前，国外有疱疹病毒分型的单克隆抗体试剂供应，可用于病毒细胞培养鉴定和临床标本检测。7575淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024直接免疫荧光法 国内外有检测疱疹病毒的荧光单克隆抗体试剂市75单纯疱疹抗原酶联免疫试验 近年，丹麦一厂家生产96孔单纯疱疹抗原酶联免疫诊断试剂盒，可检测水泡、溃疡和痂皮中的疱疹病毒。本法与细胞培养比较，敏感性为85.6，特异性为97.8。本法的缺点是疱疹病毒不能分型。7676淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024单纯疱疹抗原酶联免疫试验 近年，丹麦一厂家生产96孔单纯疱疹76PCR检测 全国性病控制中心已开展了HSV的研究，他们采用细胞培养、荧光单克隆法和PCR法对生殖器疱疹进行了全面的研究，PCR微孔板杂交法分型与病毒培养单克隆抗体分型的阳性结果一致。PCR敏感、特异和快速，适用于生殖器标本中的检测。7777淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024PCR检测 全国性病控制中心已开展了HSV的研究，他们采用细77血清学检测 血清学检测主要采用HSV的特异性的糖蛋白，可检测并区分血清中的抗SHV1和SHV2型抗体的免疫酶联试验。检测抗SHV抗体的血清试验可用于证实既往SHV的感染，主要用于回顾原发性感染的诊断，对恢复期或复发性生殖器疱疹的意义不大。7878淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024血清学检测 血清学检测主要采用HSV的特异性的糖蛋白，可检测78单纯疱疹病毒的透射电镜图像7979淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024单纯疱疹病毒的透射电镜图像79淋病等实验室诊断技术8/11/79单纯疱疹病毒感染细胞的免疫荧光染色8080淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024单纯疱疹病毒感染细胞的免疫荧光染色80淋病等实验室诊断技术880单纯疱疹病毒感染后形成的多核巨细胞8181淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/2024单纯疱疹病毒感染后形成的多核巨细胞81淋病等实验室诊断技术8818282淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/202482淋病等实验室诊断技术8/11/2023828383淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/202483淋病等实验室诊断技术8/11/202383谢谢！8484淋病等实验室诊断技术淋病等实验室诊断技术6/29/202484淋病等实验室诊断技术8/11/202384