机能实验家兔肠缺血再灌注损伤参考课件

n 家兔家兔肠肠缺血缺血/再灌注再灌注损伤损伤 n Ischemia-reperfusion Injury in Rabbit(I/R)组员：张景帧组员：张景帧 孙艺孙艺 王燕王燕 李蓉蓉李蓉蓉 宋天冬宋天冬 宋子夜宋子夜1 6/29/2024 家兔肠缺血/再灌注损伤 组员：张景帧 孙艺1 p掌掌握握缺缺血血再再灌灌注注损损伤伤模模型型的的复复制制，比比较较缺血损伤和缺血再灌注损伤的区别缺血损伤和缺血再灌注损伤的区别p观观察察缺缺血血再再灌灌注注损损伤伤的的表表现现，理理解解缺缺血血再灌注损伤发生的机制再灌注损伤发生的机制 【目的要求】【目的要求】2 6/29/2024掌握缺血再灌注损伤模型的复制，比较缺血损伤和缺血再灌注损伤的n【实验动物】【实验动物】n 家兔家兔n 3 6/29/2024【实验动物】3 8/11/20【实验器材】【实验器材】n兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水4 6/29/2024【实验器材】兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管【实验设计原理】【实验设计原理】n通通 过过 肠肠 系系 膜膜 上上 动动 脉脉 结结 扎扎，即即SMAO(Superior Mesentery Artery Occlusion)来来阻阻断断部部分分肠肠的的血血液液供供应应一一段段时时间间后后再再恢恢复复血血流流灌灌注注，以以复复制制肠肠缺缺血血/再再灌灌注注损损伤伤的的动动物物模模型型，探探讨讨缺缺血血/再再灌灌注注损损伤伤的发生机制的发生机制5 6/29/2024【实验设计原理】通过肠系膜上动脉结扎，即SMAO(Superp组：持续缺血组组：持续缺血组 夹闭肠系膜上动脉夹闭肠系膜上动脉1hp组：再灌损伤组组：再灌损伤组 夹夹闭闭肠肠系系膜膜上上动动脉脉30min，再再恢恢复复血血流流30min 【实验分组】【实验分组】6 6/29/2024组：持续缺血组 【实验分组】6 【实验方法与步骤】【实验方法与步骤】n1.称重称重n2.全全 麻麻（耳耳 缘缘 静静 脉脉 注注 射射 25%乌乌 拉拉 坦坦4ml/kg）n 注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，n排尽气泡，速度不宜太快排尽气泡，速度不宜太快n 麻醉效果：角膜反射麻醉效果：角膜反射n 基本消失，钳夹家兔基本消失，钳夹家兔n 舌头无回收，四肢松软舌头无回收，四肢松软7 6/29/2024【实验方法与步骤】1.称重7 n3.仰卧固定（背部交叉）、备皮仰卧固定（背部交叉）、备皮n 颈部正中（甲状软骨下缘颈部正中（甲状软骨下缘胸骨上切迹）胸骨上切迹）n 腹部正中（剑突下腹部正中（剑突下1.5cm起向下起向下5cm）n 注意：平贴皮肤剪毛，勿拎起皮肤！注意：平贴皮肤剪毛，勿拎起皮肤！8 6/29/20243.仰卧固定（背部交叉）、备皮8 n4.颈部正中切口行动脉插管颈部正中切口行动脉插管n切切口口范范围围：颈颈部部正正中中，甲甲状状软软骨骨下下缘缘胸胸骨骨上上切迹，长约切迹，长约5cmn分离左侧颈总动脉：胸分离左侧颈总动脉：胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌之骨舌骨肌与胸锁乳突肌之间深面的颈动脉鞘内，与间深面的颈动脉鞘内，与 气管平行，颜色鲜红、气管平行，颜色鲜红、较细、触之有搏动感，较细、触之有搏动感，长约长约2-3cm，穿线备用，穿线备用9 6/29/20244.颈部正中切口行动脉插管分离左侧颈总动脉：胸骨舌骨肌与胸锁注意：（注意：（1）钝性分离钝性分离 （2）辨清颈）辨清颈A鞘内的血管神经鞘内的血管神经血管插管血管插管先结扎远心端，后夹闭近心先结扎远心端，后夹闭近心端，剪口部位尽量靠近远心端，剪口部位尽量靠近远心端，成端，成45度角朝向近心端度角朝向近心端剪一小口，约为管径的剪一小口，约为管径的1/3-1/2，插管方向朝向近，插管方向朝向近心端，插入心端，插入1-1.5cm10 6/29/2024注意：（1）钝性分离先结扎远心端，后夹闭近心端，剪口部位尽量【插管的注意事项】【插管的注意事项】p插插管管内内事事先先应应加加入入少少量量肝肝素素以以防防凝凝血血；排排净净气气泡，记录前应关闭三通管泡，记录前应关闭三通管p插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠p勿勿使使插插管管尖尖端端与与血血管管壁壁形形成成角角度度，避避免免刺刺破破血血管管11 6/29/2024【插管的注意事项】插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气泡n 5.5.腹部正中切口：腹部正中切口：n 腹正中腹正中线线自自剑剑突下突下1.5cm1.5cm起向下做起向下做5cm5cm切口切口 n6.6.寻寻找找肠肠系膜上系膜上动动脉：脉：n 将将家家兔兔腹腹腔腔内内脏脏左左移移，找找到到齐齐右右肾肾门门对对侧侧垂垂直直向向腹腹主主动动脉脉分分出出的的肠肠系系膜膜上上动动脉脉，穿穿双双线线备备用用，注注意意避避免免损损伤伤其其他血管（缺血再灌注他血管（缺血再灌注夹闭时夹闭时注意注意垫垫橡皮管）橡皮管）n 7.7.记录记录一段正常血一段正常血压压曲曲线线n 8.8.复复制制肠肠缺缺血血-再再灌灌注注模模型型，轻轻轻轻提提起起肠肠系系膜膜上上动动脉脉的的穿穿线线，用，用动动脉脉夹夹闭夹夹闭，同，同时观时观察各察各项项生理指生理指标变标变化。化。n 9.9.分分组组进进行行实实验验并并记记录录各各项项指指标标。（组组：夹夹闭闭肠肠系系膜膜上上动动脉脉1h 1h 组组：夹夹闭闭肠肠系系膜膜上上动动脉脉30min30min，再再恢恢复复血血流流30min30min）12 6/29/2024 5.腹部正中切口：12 8肠系膜上动脉示意图肠系膜上动脉示意图13 6/29/2024肠系膜上动脉示意图13 8/114 6/29/202414 8/11/202315 6/29/202415 8/11/2023n1.移动内脏时，动作要轻柔移动内脏时，动作要轻柔n2.分分离离肠肠系系膜膜上上A时时需需小小心心细细致致，不不要要使使用用锐锐利利器械，以免损伤血管造成大出血器械，以免损伤血管造成大出血n3.肠肠系系膜膜上上A夹夹闭闭要要彻彻底底，缺缺血血再再灌灌注注组组结结扎扎时时注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全【注意事项】【注意事项】16 6/29/20241.移动内脏时，动作要轻柔【注意事项】16 【结果分析】【结果分析】峰峰表表示示：结结扎扎肠肠系系膜膜上上A A 血血管管床床容容量量 有有效效循循环环血血量量相相对对BPBP 压压力力感感受受器器 (+)(+)减压反射减压反射BPBP 峰峰表表示示：松松开开肠肠系系膜膜上上A A 血血管管床床容容量量有有效效循循环环血血量量相相对对 BPBP升升压压反反射射（再再灌灌注注损损伤伤还还未未来来得得及及发发生生）有有时时峰不出现，峰不出现，BPBP直到死亡直到死亡 血血压压持持续续下下降降，有有再再灌灌注注损损伤伤17 6/29/2024【结果分析】峰表示：结扎肠系膜上A 血管床容量 有n组：结扎BP BP趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁粉红暗红（淤血）肿胀（水肿），无出血点n组：结扎 BPBP趋于平稳（机体自身调节）再灌BP，肠壁暗红、水肿、出血点BP低于正常1/2时休克n 、组比较说明：缺血损伤与 是不同的 损伤过程，损伤过程，后者损伤更严重18 6/29/2024组：结扎BP BP趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁【典型结果】【典型结果】19 6/29/2024【典型结果】19 8/11/2【结果不明显可能存在的问题【结果不明显可能存在的问题】n（1）实验过程中是否发生了大血？n（2）缺血是否完全？n（3）再灌注是否通畅？n（4）记录结果时基线是否改变？n（5）个体差异 20 6/29/2024【结果不明显可能存在的问题】（1）实验过程中是否发生了大血？【I/R的发生机制】的发生机制】n（1）活性氧的作用）n（2）钙超载）n（3）白细胞的作用）n（4）高能磷酸化合物生成障碍）21 6/29/2024【I/R的发生机制】（1）活性氧的作用）21 （1）尽早恢复血流灌流，缩短缺血时间）尽早恢复血流灌流，缩短缺血时间（2）再灌注时遵循低温、低压、低钙的原则）再灌注时遵循低温、低压、低钙的原则（3）清除活性氧）清除活性氧（4）Ca2+拮抗剂的使用拮抗剂的使用（5）减少白细胞的激活和炎性介质的释放）减少白细胞的激活和炎性介质的释放（6）补充能量及促进能量生成）补充能量及促进能量生成（7）启动细胞内源性保护机制）启动细胞内源性保护机制【如何防治【如何防治I/R】22 6/29/2024（1）尽早恢复血流灌流，缩短缺血时间【如何防治I/R】22