微生物之葡萄球菌培训ppt课件

微生物之葡萄球菌微生物之葡萄球菌微生物之葡萄球菌1内容概要葡萄球菌属及金葡菌简介文献常用种属鉴定靶基因靶序列比对及文献引物金葡菌毒力因子及耐药文献2微生物之葡萄球菌内容概要葡萄球菌属及金葡菌简介文献常用种属鉴定靶基因靶序列比2葡萄球菌属致病种情况概述种名拉丁学名临床致病种类金黄色葡萄球菌*S.aureus 局部化脓感染，肺炎、伪膜性肠炎、心包炎,败血症、脓毒症等全身感染表皮葡萄球菌S.epidermidis 菌血症,术后心肌炎和心内膜炎,骨髓炎,透析性腹膜炎腐生葡萄球菌S.saprophyticus 尿路感染，慢性前列腺炎路邓葡萄球菌S.lugdunensis 脓肿、心内膜炎、腹膜炎、泌尿道感染、中枢神经系统感染、骨关节感染 人葡萄球菌S.hominis 耳部、咽部、眼内、宫颈、前列腺、支气管炎、肺炎、泌尿系统等的感染或化脓性感染，以及败血症溶血葡萄球菌S.haemolyticus 败血症、创伤和下呼吸道感木糖葡萄球菌S.xylosus 术后感染沃氏葡萄球菌S.warneri 动脉栓塞和牙周炎有关头状葡萄球菌S.capitis 尿道感染等3微生物之葡萄球菌葡萄球菌属致病种情况概述种名拉丁学名临床致病种类金黄色葡萄球3葡萄球菌属及金葡菌简介 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌、施氏葡萄球菌、路邓葡萄球菌等35 个种，17 个亚种。金黄色葡萄球菌革兰阳性球菌，直径为0.5 1.5 m，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。在液体培养基或服液标本中，往往排列成双或短链，易误认为链球菌。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的自溶血环，部分菌落也可呈灰白色或拧攘色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，不溶血。14微生物之葡萄球菌葡萄球菌属及金葡菌简介 葡萄球菌属是一类触酶试4触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、荒草糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA 酶试验阳性，七叶苷试验阴性。葡萄球菌属在自然界分布很广。存在于空气、水、尘埃及皮肤上的葡萄球菌大多数无致病性。金黄色葡萄球菌，主要引起局部组织的化脓性感染、败血症、心内膜炎等全身感染等，也可引起骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎和深部脓肿等。腐生葡萄球菌引起尿道感染、前列腺炎、外伤和败血症等。溶血葡萄球菌引起心内膜炎、败血症、腹膜炎、尿道感染、外伤、骨折和关节炎等。葡萄球菌对甲氧西林耐药率较高，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头抱菌素、碳青霉烯类和-内酰胺类/-内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖昔类和大环内醋类抗生素常协同耐药。15微生物之葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、荒草糖和甘露醇，不分解棉子5文献中金葡菌常用鉴定靶基因基因名生理功能特异性敏感性 coa2,4,9,11,29,37,38 凝固酶100%unknowNuc3,5-9,15,19,20,22,25-31,34,105 耐热核酸酶100%1.15*103/mL623S9,10,21,29，33,36 核糖体RNA亚基100%10-105 cfu/mLSa44211,12,13,14,18unknow100%unknowPhospholipase16磷脂酶100%104 cfu/mL16Hsp17unknow100%N*104 cfu/mL17vicK24信号传导基因100%unknow16S35核糖体RNA100%103 cfu/mLfemA93 Unclear(细胞壁/膜代谢有关)100%unknow表格中划表格中划“”的表明已做，的表明已做，“？”表明在表明在NCBI上找不到序列，没做上找不到序列，没做6微生物之葡萄球菌文献中金葡菌常用鉴定靶基因基因名生理功能特异性敏感性 coa6其他葡萄球菌鉴定基因靶微生物基因名生理功能特异性敏感性S.xylosusHsp6039热休克蛋白假阳性UnknowS.xylosusxylB39?木酮糖激酶100%unknowS.saprophyticusunknow40unknow100%100 copies/PCRS.saprophyticus16S41 核糖体RNA100%unknowS.lugdunensistanA42 鞣酸酶100%unknowS.epidermidisatlE43 细胞表面蛋白假阴性（2/109）103 cfu/mLS.hominisGap43 Unknow100%105 cfu/mLS.haemolyticusmvaA43 unknow100%104 cfu/mLS.HaemolyticusS.EpidermidisS。hominisfemA44肽聚糖合成蛋白100%unknow表格中划表格中划“”的表明已做，的表明已做，“？”表明在表明在NCBI上找不到序列，没做上找不到序列，没做7微生物之葡萄球菌其他葡萄球菌鉴定基因靶微生物基因名生理功能特异性敏感性S.7检测靶点的确定 腐生（16S）葡萄球菌 金葡（nuc,coa,femA,23S）表葡（atlE）木糖（xylB）人型（gap）溶血（mvaA）路邓（tanA）16S8微生物之葡萄球菌检测靶点的确定 腐生（16S）葡萄 金葡（nuc,coa,8金黄色葡萄球菌nuc序列比对NCBI中选择61株金黄色葡萄球菌nuc基因序列进行比对9微生物之葡萄球菌金黄色葡萄球菌nuc序列比对NCBI中选择61株金黄色葡萄球9Nuc基因进化树10微生物之葡萄球菌Nuc基因进化树10微生物之葡萄球菌10文献中nuc引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)Sense1,2,7,8Anti-senseGCGATTGATGGTGATACGGTTAGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC金葡298-318558-581267QNuc-S3QNuc-ASCCTGAAGCAAGTGCATTTACGACTTTAGCCAAGCCTTGACGAACT金葡415-436563-585166Nuc-S3,4,5Nuc-ASCTGGCATATGTATGGCAATTGTTTATTGACCTGAATCAGCGTTGTCT金葡35-57680-703664NUC-F1666NUC-R565AGTTCAGCAAATGCATCACATAGCCAAGCCTTGACGAACT金葡不匹配563-582400SAU5A9SAU5BCAAGTCTAAGTAGCTCAGCAAATGACCGTATCACCATCAATCGC金葡167-190298-31715011微生物之葡萄球菌文献中nuc引物Primer nameSequence（511金葡菌coa序列比对选取199株金葡菌coa序列进行比对12微生物之葡萄球菌金葡菌coa序列比对选取199株金葡菌coa序列进行比对1212coa进化树13微生物之葡萄球菌coa进化树13微生物之葡萄球菌13文献中coa引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)SA-31,2,3SA-4GTAGATTGGGCAATTACATTTTGGAGGCGCATCAGCTTTGTTATCCCATGTA金葡75-101不匹配117COAG24COAG3CGAGACCAAGATTCAACAAGAAAGAAAACCACTCACATCA金葡1759-17782735-275499514微生物之葡萄球菌文献中coa引物Primer nameSequence（514金葡菌23S序列比对选取166条金葡菌23S序列进行比对15微生物之葡萄球菌金葡菌23S序列比对选取166条金葡菌23S序列进行比对1515金葡23S进化树16微生物之葡萄球菌金葡23S进化树16微生物之葡萄球菌16文献中23S引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)23S-F120023S-R16981,2AGCTGTGGATTGTCCTTTGGTCGCTCGCTCACCTTAGAAT金葡6481-65006964-6983499Sau3273Sau1645GGACGACATTAGACGAATCACGGGCACCTATTTTCTATCT金葡10786-1080512085-121041318Staur44Staur6ACGGAGTTACAAAGGACGACAGCTCAGCCTTAACGAGTAC金葡5542-55626829-6848130617微生物之葡萄球菌文献中23S引物Primer nameSequence（517金葡femA序列比对选取57条金葡femA序列进行比对18微生物之葡萄球菌金葡femA序列比对选取57条金葡femA序列进行比对18微18femA进化树19微生物之葡萄球菌femA进化树19微生物之葡萄球菌19文献中femA引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)F1RACAGCTAAAGAGTTTGGTGCTCTAACACTGAGTGATAACG金葡634-6531082-110346720微生物之葡萄球菌文献中femA引物Primer nameSequence（520其他葡萄球菌序列比对选取34条表皮葡萄球菌altE序列进行比对选取6条人葡萄球菌gap序列进行比对选取2条溶血葡萄球菌mvaA序列进行比对21微生物之葡萄球菌其他葡萄球菌序列比对选取34条表皮葡萄球菌altE序列进行比21表皮葡萄球菌altE和人葡萄球菌gap进化树altEgap22微生物之葡萄球菌表皮葡萄球菌altE和人葡萄球菌gap进化树altEgap22文献中表皮葡萄球菌altE、人葡萄球菌gap和溶血葡萄球菌mvaA引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)F1RPggaggaactaataataagttaactgGtcataaacagttgtatataagccFAM-ctgctaatcgtggtgttgctcaaattaaa-BHQ1S.epidermidis4204-42284273-42964232-426092F1RPTagatggatctgaaacagtagtatCcttcaacaataccaaattcgtcTexas red-aggtgcttcatgtactacaaactcattg BHQ2S.hominis394-417471-493419-44699F1RPTatgcatgatggtttaacagatgGaactcatcttgcatttcacVIC-ctttcattatgtaccaatgggtgtaacagc-BHQ1S.haemolyticus1949-19712035-2054不匹配10523微生物之葡萄球菌文献中表皮葡萄球菌altE、人葡萄球菌gap和溶血葡萄球菌23路邓葡萄球菌 tanA、腐生葡萄球菌16S序列比对选取4条路邓葡萄球菌tanA序列进行比对选取194条腐生葡萄球菌16S序列进行比对24微生物之葡萄球菌路邓葡萄球菌 tanA、腐生葡萄球菌16S序列比对选取4条路24文献中路邓葡萄球菌tanA和腐生葡萄球菌16S引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)F1RAGCATGGGCAATAACAGCAGTAAGCTGCGCCAATTTGTTCTAAATATS.lugdunensis2185-22072400-2423239Probe2TCCTTTGAAAACTCTAGAS.saprophyticus1110-1127(腐生葡萄球菌 16S-1文件中的位置)unknow25微生物之葡萄球菌文献中路邓葡萄球菌tanA和腐生葡萄球菌16S引物Prime25金黄色葡萄球菌毒力因子检测26微生物之葡萄球菌金黄色葡萄球菌毒力因子检测26微生物之葡萄球菌26PSM和PSM-mec毒素简介 PSM 是一类具有溶中性粒细胞活性的致炎性蛋白，呈螺旋，为缩氨酸小分子，由核基因编码，PSM 操纵子无效突变体菌株的毒力在致皮肤病和菌血症中明显比野生株下降很多，这说明PSM 在感染中是重要的致病毒力因子。新鉴定的 PSM-mec跟PSM 不同，它由耐甲氧西林SCCmec编码，为水平转移元件，受agr系统调控，在细菌之间传播，该基因存在于SCCmec type 和（HA-MRSA）中，而在CA-MRSA（USA300）中没有。就溶白细胞活性而言，psm-mec比PSM 3低，比PSM 高，诱导IL-8因子的能力psm-mec的能力高于其他的PSM。这就是说，除了PSM 3以外，psm-mec跟其他的PSM 的致炎能力相当。当其他PSMs的量较它大时，psm-mec的致病能力较低，当它的量比其他溶细胞性的PSMs高时，才表现出在致病方面的主导作用121。F region位于SCCmec上的调控基因mecI的下游，它的缺失或突变造成毒力的增强和菌落延展能力的增大，它存在于type和 的SCCmec中，不存在于中122。27微生物之葡萄球菌PSM和PSM-mec毒素简介 PSM 27Fudoh基因简介Fudoh基因跟psm-mec一样，也是由SCCmec移动元件携带的调控基因，Chikara Kaito等122证实其跟金葡的毒力有关，它的存在会抑制菌落在培养基上的延展扩散，比如在SCCmec type 型的MRSA，菌落相比较其他MSSA菌落要小，此外，Fudoh基因的存在会抑制金葡外毒素的产生，Fudoh基因点突变体或缺失突变菌株的菌落延展性和菌株毒性均大于野生菌株。Fudoh基因存在于SCCmec-和，不存在于、和。28微生物之葡萄球菌Fudoh基因简介Fudoh基因跟psm-mec一样，也是由28Fudoh基因序列比对2株fudohSCCmec-II-fudoh比对结果29微生物之葡萄球菌Fudoh基因序列比对2株fudohSCCmec-II-fu29金黄色葡萄球菌毒力因子毒力因子子类检测基因分布率毒理及临床表现参考文献溶血素hla 98.5%溶解红细胞，并与牛羊坏疽性乳腺炎有关，导致白细胞崩解，引起平滑肌收缩，麻痹，最终坏死45,72hlb 97%(462株)具有神经磷脂酶作用，特异裂解细胞膜上的鞘磷脂，使细胞膜渗漏而溶解46,47,72hlgA 98.5%破坏嗜中性白血球和巨噬细胞，破坏哺乳动物红血球。hlgB 98.5%67hlgC 98.5%67hld 98.5%-溶血素能破坏很多哺乳类动物的细胞膜，对许多细胞都有作用。一般认为它在细胞膜上有表面活性剂的作用，通过溶解目标细胞的膜来裂解细胞45表格中划表格中划“”的表明已做，的表明已做，“？”表明在表明在NCBI上找不到序列，没做上找不到序列，没做30微生物之葡萄球菌金黄色葡萄球菌毒力因子毒力因子子类检测基因分布率毒理及临床表30毒力因子子类检测基因基因位置临床症状及来源分布率参考文献杀白细胞素LukS-lukFPVL 由前噬菌体携带，整合到染色体上lukF 破坏人的白细胞和巨噬细胞,lukS破坏兔子红细胞83/59348,49,50,51,53LukE-lukDLukE-lukD 染色体兔源性菌株携带，不具有溶血活性和很弱的杀白细胞活性All strains48,52LukMLukM 噬菌体从牛和羊身上分离出的菌株携带unknow4831微生物之葡萄球菌毒力因子子类检测基因基因位置临床症状分布率参考文献杀白细胞素31毒力因子子类检测基因分布率基因位置毒理及临床症状参考文献肠毒素sea（classical）sea 5/13染色体/噬菌体1、刺激肠上皮细胞，产生腹泻2、刺激呕吐中枢，导致呕吐为主的食物中毒症状。3、刺激非特异性T细胞增殖的超抗原特性。47,55,60,73,74,75,76,78,79,80,81,83,84,85,86,88,90,91seb（classical）seb 2/94染色体55,60,74,75,76,78,79,80,81,83,84,85,86,88,90,91sec（classical）sec 123/462染色体46,55,60,73,76,78,79,80,81,83,84,85,86,88,90,91sed（classical）sed 59/462染色体/质粒46,55,60,73,76,78,79,80,81,83,84,85,86,88,90,91see（classical）see 噬菌体76,78,80,81,83,84,85,86,88,89,90,91sehseh 4/75染色体73,76,77,80,81,83,84,85,86,87,88,89,90,91seisei 7/75染色体73,76,77,78,80,81,83,84,85,86,87,88,90,91segseg 10/75染色体73,76,77,78,80,81,83,84,85,86,87,88,89,90,91sejsej 31/75质粒73,76,77,78,80,81,83,84,85,86,88,9132微生物之葡萄球菌毒力因子子类检测基因分布率基因位置毒理及临床症状参考文献肠毒32毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床特点参考文献肠毒素seksek 16.3%(147)非催吐型类肠毒素76,78,81,83,89selsel 15/7573,76,78,81,83,89semsem 11.6%(147)76,78,81,83,84,85sepsep 2/13噬菌体47,78,81,83sensen 10.9%(147)噬菌体76,78,81,83,85seoseo 14.3%(147)76,78,81,83,85seqseq 10.9%(147)76,78,81,83seuseu 14.2%(147)76,81,83serser?5.4%(147)质粒81,82,8333微生物之葡萄球菌毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床特点参考文献肠毒素se33毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床症状参考文献毒性休克综合征毒素-1（tsst-1）无tst 24%染色体可引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征(TSS)54,55,56,57,58,59,60,65表皮剥落素(et)Aeta 染色体可以引发人类的葡萄球菌烫伤样皮肤综合症。常见于 5 岁以下对葡萄球菌毒素抗体还未形成的新生儿或者有严重疾病的成人中，儿童病例死亡率约为 3%-4%61,62,63,64,65,66,89Betb 质粒64,65,66,8934微生物之葡萄球菌毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床症状参考文献毒性休克综34毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床症状参考文献粘附因子BiofilmicaA 68,92icaD 100%68laminin-adhesineno(lbp)nasal colonisation,haematogenous osteomyelitisand arthritis.68,89Collagen adhesion cna 22.4%染色体跟小孩肺病有关68,70,71,92fibronectin-adhesinfnbA 98%染色体眼角膜炎、骨髓炎和脓毒性关节炎有关68,70,71,72fnbB 99%染色体眼角膜炎、骨髓炎和脓毒性关节炎有关68,70,71fnbP 63.5%粘附乳腺细胞69elastin-adhesinebpS 100%染色体nasal colonisation,haematogenous osteomyelitisand arthritis.68,7035微生物之葡萄球菌毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床症状参考文献粘附因子B35毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床症状参考文献Sialoprotein adhesionBbp 跟骨髓炎和关节炎有关68,89FibrinogenadhesinclfA 50.6%染色体68,69,70,72clfB 91.8%nasal colonisation,haematogenous osteomyelitisand arthritis.68,69,70,72,89fib 100%染色体68,70,89sdrC 68,69sdrD 68sdrE 68,92fbpA 1/25染色体70Broad-specificity adhesion Map 100%7036微生物之葡萄球菌毒力因子子类检测基因分布率基因位置临床症状参考文献Sialo36杀白细胞素PVL序列比对选取247株金葡菌PVL（杀白细胞素）序列进行比对。金葡菌PVL-137微生物之葡萄球菌杀白细胞素PVL序列比对选取247株金葡菌PVL（杀白细胞素37金葡菌PVL进化树金葡菌PVL-138微生物之葡萄球菌金葡菌PVL进化树金葡菌PVL-138微生物之葡萄球菌38文献中金葡菌PVL引物Primer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)PVL-11PVL-2CTGGTGCGATTCATGGTACGATATCGTGGTCATCACA282-299不匹配金葡菌PVL-13524PVL-FP2PVL-RPprobeGCTGGACAAAACTTCTTGGAATATGATAGGACACCAATAAATTCTGGATTGAAAATGCCAGTGTTATCCA2789-28122847-28732816-283484luk-PV-13,4luk-PV-2ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCAGCATCAATGTATTGGATAGCAAAAGC1646-1677不匹配43339微生物之葡萄球菌文献中金葡菌PVL引物Primer nameSequence39lukE，lukD序列比对 18株金葡lukE序列进行比对 14株金葡lukD序列进行比对40微生物之葡萄球菌lukE，lukD序列比对 18株金葡lukE序列进行比对 40lukE,lukD进化树lukElukD41微生物之葡萄球菌lukE,lukD进化树lukElukD41微生物之葡萄球菌41文献中的lukE,lukD引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)lukElukE-S1lukE-ASAATGTTAGCTGCAACTTTGTCACTTTCTGCGTAAATACCAGTTCTA525-5461341-1364lukD未找到相关引物42微生物之葡萄球菌文献中的lukE,lukD引物TargetingPrimer42金葡lukM序列比对选取3株金葡lukM序列进行比对43微生物之葡萄球菌金葡lukM序列比对选取3株金葡lukM序列进行比对43微生43金葡菌tst（tsst-1）序列比对选取11株金葡菌tst序列进行比对。44微生物之葡萄球菌金葡菌tst（tsst-1）序列比对选取11株金葡菌tst序44文献中金葡菌tst（tsst-1）引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)Tsst-1TSST-1_FPa1TSST-1_RPbProbeTCATCAGCTAACTCAAATACATGGATTTGTGGATCCGTCATTCATTGTTTCCAATAACCACCCGTTTTATCGCTTGAA5717-57435783-5804不匹配87Tsst-1GTSSTR-12GTSSTR-2ACCCCTGTTCCCTTATCATCTTTTCAGTATTTGTAACGCC5268-52875574-5593326Tsst-1TSST-13TSST-2Atggcagcatcagcttgatatttccaataaccacccgttt不匹配5761-578035045微生物之葡萄球菌文献中金葡菌tst（tsst-1）引物TargetingPr45金葡菌表皮剥落素eta,etb序列比对选取13株金葡菌eta序列进行比对。选取3株金葡菌etb序列进行比对。46微生物之葡萄球菌金葡菌表皮剥落素eta,etb序列比对选取13株金葡菌eta46文献中金葡菌eta和etb引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)etbGETBR-11,2GETBR-2ACAAGCAAAAGAATACAGCGGTTTTTGGCTGCTTCTCTTG4772-47914985-5004226文献中eta引物均不与比对文件匹配，故没列出文献中eta的引物47微生物之葡萄球菌文献中金葡菌eta和etb引物TargetingPrimer47 金葡菌hla()和hlb()序列比对选取9株金葡菌hla序列进行比对，生成比对文件hla-1(下图)，hla-2.选取6株金葡菌hlb序列进行比对，生成比对文件hlb.48微生物之葡萄球菌 金葡菌hla()和hlb()序列比对选取948文献中hla和hlb引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)hlaF1RTATTAGAACGAAAGGTACCAACTGTACCTTAAAGGCTGAA240-259321-340(hla-2)hlaF2RGCGAAGAAGGTGCTAACAAAAGTGGCGCCAATTTTTCCTGTATCATCACC284-308不匹配(hla-2)unknowHlbHlb-13Hlb-2GTTGCAACACTTGCATTAGCACGTAGTAATATGGGAACGCA788-8071675-169590749微生物之葡萄球菌文献中hla和hlb引物TargetingPrimer na49金葡菌Delta溶血素hld序列比对选取48株金葡菌hld序列进行比对，生成比对文件hld and other genes.apr(除hld外还有其他基因)和hld.apr。hld and other genes.aprhld.apr50微生物之葡萄球菌金葡菌Delta溶血素hld序列比对选取48株金葡菌hld序50Hld进化树hld and other genes.aprhld.apr51微生物之葡萄球菌Hld进化树hld and other genes.aprh51 gamma溶血素hlg（A,B,C）序列比对ABC52微生物之葡萄球菌 gamma溶血素hlg（A,B,C）序列比对ABC52微生52Hlg（A,B,C）进化树ABC53微生物之葡萄球菌Hlg（A,B,C）进化树ABC53微生物之葡萄球菌53Hlg引物Primer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)Hlg-1Hlg-2GCCAATCCGTTATTAGAAAATGCCCATAGACGTAGCAACGGAThlg1707-17292625-264493754微生物之葡萄球菌Hlg引物Primer nameSequence（53）T54金葡菌肠毒素与疾病金葡菌可产近20种肠毒素，分为三类，一类是经典型：sea,seb,sec,sed,see，第二类是新发现的seg,seh,sei,sej，这两类都属于催吐型肠毒素，第三类是非催吐型类肠毒素：sel,sek,sep,seq,sen,sem,seu,ser等，肠毒素阳性金葡菌常引起以呕吐和腹泻为主要症状的食物中毒，在含蛋白较多且含淀粉的食品中易产生和积累，且对热稳定。肠毒素除了能引起食物中毒以外，还对感染肠毒素阳性金葡的呼吸系统造成严重的影响124。55微生物之葡萄球菌金葡菌肠毒素与疾病金葡菌可产近20种肠毒素，分为三类，一类是558类催吐性肠毒素基因序列比对57株sea序列24株seb序列56微生物之葡萄球菌8类催吐性肠毒素基因序列比对57株sea序列24株seb序列568株sec序列6株sed序列34株seg序列57微生物之葡萄球菌8株sec序列6株sed序列34株seg序列57微生物之葡萄577株seh序列16株sei序列4株sej序列58微生物之葡萄球菌7株seh序列16株sei序列4株sej序列58微生物之葡萄58文献中肠毒素引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)seaSEAU1,2SEALprobeATGGTAGCGAGAAAAGCGAAGCCATAAATTGATCGGCACTCTAAAGCTGTTCCCTGCAATTCA329-348705-724381-403比对文件Sea-1395seaGSEAR-14GSEAR-2GGTTATCAATGTGCGGGTGGCGGCACTTTTTTCTCTTCGG610-629692-711比对文件Sea-1102seaSEA-33SEA-4CCTTTGGAAACGGTTAAAACGTCTGAACCTTCCCATCAAAAAC748-768853-874比对文件Sea-1126seaSEA 15SEA 2TTGGAAACGGTTAAAACGAAGAACCTTCCCATCAAAAACA751-770852-871121sebSEB 15SEB 2TCGCATCAAACTGACAAACGGCAGGTACTCTATAAGTGCC635-6541119-113847759微生物之葡萄球菌文献中肠毒素引物TargetingPrimer nameSe59sebSEBU1SEBLprobeTGTATGTATGGTGGTGTAACACAAATCGTTAAAAACGGCGATAGTGACGAGTTAGGTA661-6801253-1272808-825611sebSEBU12SEBL1CATTAACCCCTTGTTGCCATACAAATCGTTAAAAACGGCG1192-12111281-1300108sebSEB-13SEB-4TCGCATCAAACTGACAAACGGCAGGTACTCTATAAGTGCCTGC635-654不匹配477sebGSEBR-14GSEBR-2GTATGGTGGTGTAACTGAGCCCAAATAGTGACGAGTTAGG667-686832-851164secSEC-33SEC-4CTCAAGAACTAGACATAAAAGCTAGGTCAAAATCGGATTAACATTATCC666-691914-936271secGSECR-14GSECR-2AGATGAAGTAGTTGATGTGTATGGCACACTTTTAGAATCAACCG433-456864-883451secSEC 15SEC 2GACATAAAAGCTAGGAATTTAAATCGGATTAACATTATCC677-696914-933257sedSED-33SED-4CTAGTTTGGTAATATCTCCTTTAAACGTTAATGCTATATCTTATAGGGTAAACATC355-381645-673319sedGSEDR-14GSEDR-2CCAATAATAGGAGAAAATAAAAGATTGGTATTTTTTTTCGTTC492-514750-769278sedSED 15SED 2CTAGTTTGGTAATATCTCCTTAATGCTATATCTTATAGGG355-374653-67231860微生物之葡萄球菌sebSEBU1TGTATGTATGGTGGTGTAAC60TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)segSEG-13SEG-2AAGTAGACATTTTTGGCGTTCCAGAACCATCAAACTCGTATAGC484-505749-770287segSEG-14SEG-2TGCTATCGACACACTACAACCCCAGATTCAAATGCAGAACC79-100765-784704segSEG 15SEG 2TGCTATCGACACACTACAACCCCAGATTCAAATGCAGAACC79-100765-784704sehSEH-13SEH-2GTCTATATGGAGGTACAACACTGACCTTTACTTATTTCGCTGTC554-575745-766213sehSEH-14SEH-2CGAAAGCAGAAGATTTACACGGACCTTTACTTATTTCGCTGTC272-292745-76649561微生物之葡萄球菌TargetingPrimer nameSequence（561TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)seiSEI-13SEI-2GGTGATATTGGTGTAGGTAACATCCATATTCTTTGCCTTTACCAG231-251664-687454seiSEI-14SEI-2GACAACAAAACTGTCGAAACTGCCATATTCTTTGCCTTTACCAG51-72664-685630sejSEJ-13SEJ-2ATAGCATCAGAACTGTTGTTCCGCTTTCTGAATTTTACCACCAAAGG1377-1399不匹配152sejSEJ-14SEJ-2CATCAGAACTGTTGTTCCGCTAGCTGAATTTTACCATCAAAGGTAC1381-14031500-152214262微生物之葡萄球菌TargetingPrimer nameSequence（562非致吐性肠毒素基因序列比对6株sek6株sel6株sem63微生物之葡萄球菌非致吐性肠毒素基因序列比对6株sek6株sel6株sem63636株sen8株seo5株sep64微生物之葡萄球菌6株sen8株seo5株sep64微生物之葡萄球菌644株seu2株seq65微生物之葡萄球菌4株seu2株seq65微生物之葡萄球菌65文献中非致吐性肠毒素引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)sekSek-11Sek-2TAGGTGTCTCTAATAATGCCATAGATATTCGTTAGTAGCTG47-67320-339293sekSek13sek2TGATACTCCTATAGCTAATCAACTACAACATCAATCTCTTGAGCGGTAACA153-179429-452300selSel-1 1Sel-2TAACGGCGATGTAGGTCCAGGCATCTATTTCTTGTGCGGTAAC74-94437-458383selSel13sel2ACCAGAATCACACCGCTTAGAATACTGGAATACTACACTCCCCTTATCAAAAG162-186422semSem-1 1Sem-2GGATAATTCGACAGTAACAGTCCTGCATTAAATCCAGAAC177-196536-555379senSen-1 1Sen-2TATGTTAATGCTGAAGTAGACATTTCCAAAATACAGTCCATA82-102343-363282senSen12Sen2GAAATAAATGTGTAGGCTTCTTCTTGTTGGACACCATCTT359-377473-49313566微生物之葡萄球菌文献中非致吐性肠毒素引物TargetingPrimer na66TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)sepSep-1 1Sep-2TGATTTATTAGTAGACCTTGGATAACCAACCGAATCACCAG276-296650-669396sepSep12sep2AGAAGTAACTGTTCAGGAGCTAATCATAACCAACCGAATCAC525-546653-672148seqSeq-1 1Seq-2AATCTCTGGGTCAATGGTAAGCTTGTATTCGTTTTGTAGGTATTTTCG12670-1269112766-12791122seqSeq12seq2TCAGGTCTTTGTAATACAAAATCTGCTTGACCAGTTCCGGT12586-1260612925-12944359seoSeo12seo2TTTGTGTAAGAAGTCAAGTGTAGAAATTCAGCAGATATTCCAT126-148278-297172seoSeo-1 1Seo-2TGTGTAAGAAGTCAAGTGTAGTCTTTAGAAATCGCTGATGA128-148322-341214seuSeu12seu2ATTTGCTTTTATCTTCATGGACTTTAATGTTTGTTTCTGAT135-152279-30116767微生物之葡萄球菌TargetingPrimer nameSequence（56717个粘附因子序列比对11株cna序列28株eno序列68微生物之葡萄球菌17个粘附因子序列比对11株cna序列28株eno序列68微6820株icaA序列18株icaD序列2株fnbP序列69微生物之葡萄球菌20株icaA序列18株icaD序列2株fnbP序列69微生69126株fnbB序列77株ebpS序列331株clfA序列70微生物之葡萄球菌126株fnbB序列77株ebpS序列331株clfA序列7708株fib序列62株sdrD序列68株sdrC序列71微生物之葡萄球菌8株fib序列62株sdrD序列68株sdrC序列71微生物7155株sdrE序列12株fbpA序列300株fnbA序列72微生物之葡萄球菌55株sdrE序列12株fbpA序列300株fnbA序列72728株bbp序列6株map序列395株cflB序列73微生物之葡萄球菌8株bbp序列6株map序列395株cflB序列73微生物之73文献中17类粘附因子基因序列引物Primer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)F1RAGTGGTTACTAATACTGCAGGATAGATTGGTTTAcna1719-17352882-2911744F3RAAAGCGTTGCCTAGTGGAGAAGTGCCTTCCCAAACCTTTTcna1291-13101463-1482192F4RAAAATGACAAAAATGGCAAGCAGGTTTAGTTGGTGGTGTTcna1616-16352928-29491888F5RCGGGAGATATGCTACCAGAAGATAATAGCCTTGTGGAATTGTTACATCAcna680-703933-957277F1RGATTATGTAATGTGCTTGGAACTACTGCTGCGTTAATAATicaA382-4011132-1151770F2RTtcacatcaagaccatacggttgcttggttagcacctgttgcebpS63-82520-541475F5RAGACCAATCAGAATTAGAACATCATCAGAAACTGTTGAATGCTCAGTGTebpS96-119452-47638074微生物之葡萄球菌文献中17类粘附因子基因序列引物Primer nameSeq74Primer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)F4RAAGACAATACGCAAACTGCAACTGGTCGTGATTGCATGTTACTACTAGTTTCTsdrC248-271不匹配120F5RAGCGGCAATAGGTATTACTACAACTCGAATGTACCATCGTTAAATTCATfib39-63不匹配unknowF2RAcggtccaagagaaaagaaaccttgtccagactacttgcatctgcfib98-119不匹配657F4RGATTCTGACCCAGGTTCAGACTGTATCTGGTAATGGTTCTTTclfA1756-17753106-3127945F6RTGCAACTACGGAAGAAACGCCGCCTCCGCATTTGTATTGCTTGATTGclfA387-408466-490103F7RCATAAATTGGGAGCAGCATCAATCAGCAGCTGAATTCCCATTfnbA151-171不匹配不匹配127F3RGATACAAACCCAGGTGGTGGTGTGCTTGACCATGCTCTTCfnbA2026-20452197-2216191F6RCGACACAACCTCAAGACAATAGCGGCGTGGCTTACTTTCTGATGCCGTTCfnbA503-527611-63513275微生物之葡萄球菌Primer nameSequence（53）Target75Primer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)Bbp-17Bbp-2AACTACATCTAGTACTCAACAACAGATGTGCTTGAATAACACCATCATCTbbp525-5491074-1098575bbpF17bbpR1ATTACGGATGATTTCACACCAGTTGTTAAATCAAATGTTCCCTTCGCTATTbbp1204-12281254-127976F5RCGGCTAGTGATAATAAAGAAGTAGTGCTTGTTGGAGCTGTAGCAACTGGTTTBbp401-426925-950549F2RCtgacagaggcgttagtgaacgggtcaacgacttgtgtctttccmap773-794不匹配unknowF4RATGGTGATTCAGCAGTAAATCCCATTATTTGGTGGTGTAACTCTTcflB1634-16552946-2971880F6RTGCAAGTGCAGATTCCGAAAAAAACCCGTCGGTTGAGGTGTTTCATTTGcflB201-225371-394193F5RATTAGTGCAAACACAAACAGTGCGAGTTCCTTGCGCATTGGAAATCGTcflB277-300559-58230576微生物之葡萄球菌Primer nameSequence（53）Target76葡萄球菌属（金黄色葡萄球菌）耐药基因检测77微生物之葡萄球菌葡萄球菌属（金黄色葡萄球菌）耐药基因检测77微生物之葡萄球77SCCmec 简介SCCmec(staphlocal cassette chromosome)是金葡菌耐药岛，依据其上的ccr（重组酶）和mec基因序列的不同，分为6类，即、，大小21-67 kb不等，医院获得性耐药金葡菌（hospital acquired mutidrug-resistent staphylococcus aureus,HA）常携带、类SCCmec,社区获得性耐药金葡菌（community acquired mutidrug-resistent staphylococcus aureus,CA）常携带、类SCCmec。、类SCCmec基因组较大，除mecA基因以外，还携带其他的耐药基因，、类SCCmec基因组较小，除mecA基因意外，不携带其他耐药基因。ccr分为ccrA和ccrB，是SCCmec上的重组酶，负责耐药基因片段的切除和整合，它跟SCCmec本身插入金葡菌基因组也有关。78微生物之葡萄球菌SCCmec 简介SCCmec(staphlocal ca78mecA简介mecA 是SCCmec 耐药岛上携带的一种广泛耐-内酰胺类抗生素的耐药基因，其编码的PBP2a可替代金葡细胞壁上正常的PBP（penicillin binding protein）蛋白，PBP2a跟所有的-内酰胺类抗生素亲和力极低，使得抗生素不能牢固地结合菌体，从而使得金葡菌表现为-内酰胺耐药。mecA的转录及表达收到调控基因mec和mecR1的控制，mec 为mecA的抑制子，抑制mecA的转录和表达，mecR1为mecA基因的激活子，mecR1在功能上制衡mec 对mecA的抑制作用。除此之外，mecA基因还受到bla 和blaR1的“共抑制”，两者跟mec 和mecR1有同源性，bla 可作用于mecA的启动子来调节（抑制）其转录和表达。bla 和blaR1也是blaZ(青霉素酶基因)的调控基因。79微生物之葡萄球菌mecA简介mecA 是SCCmec 耐药岛上携带的一种广泛79SCCmec分类基因大小基因携带情况流行情况较大除了mecA,还携带其他耐药基因流行于HA菌株间较大除了mecA,还携带其他耐药基因流行于HA菌株间较大除了mecA,还携带其他耐药基因流行于HA菌株间较小只携带mecA流行于CA菌株间较小只携带mecA流行于CA菌株间80微生物之葡萄球菌SCCmec分类基因大小基因携带情况流行情况较大除了mec80SCCmec各型示意图81微生物之葡萄球菌SCCmec各型示意图81微生物之葡萄球菌81葡萄球菌耐药基因耐药种类相关基因机制基因位置分布率参考文献甲氧西林mecA合成PBP2a 替代正常PBP染色体30/4294,95,96,97,99,102,104,105,106,107,108,109,110,111,112,115,116四环素Tet(K)外排泵质粒120/83898,111,114Tet(L)外排泵质粒18/83898Tet(M)保护性蛋白染色体102/83898Tet(O)?保护性蛋白染色体2/83898-内酰胺blaZ产酶分解药物A,C,D 质粒B 染色体（血清型）10/105100,114表格中划表格中划“”的表明已做，的表明已做，“？”表明在表明在NCBI上找不到序列，没做上找不到序列，没做82微生物之葡萄球菌葡萄球菌耐药基因耐药种类相关基因机制基因位置分布率参考文献甲82耐药种类相关基因机制基因位置分布率参考文献喹诺酮类norA外排泵超量表达染色体101norB-like超量表达染色体101norC-like超量表达染色体101mgrA/norR超量表达染色体101norA promoter突变染色体101norG超量表达引起norB超量表达染色体101gyrA突变染色体75%MRSA103gyrB突变染色体75%MRSA103grlA突变染色体75%MRSA103grlB突变染色体75%MRSA10383微生物之葡萄球菌耐药种类相关基因机制基因位置分布率参考文献喹诺酮类norA外83耐药种类相关基因机制基因位置参考文献氨基糖苷类aacA-aphD 氨基糖苷修饰酶，修饰药物活性基团，使药物失效104aph(3)-IIIa？114ant(6)-Ia？114aac(6)-aph(2)？消毒剂QacA/B外排泵质粒110smr质粒110大环内酯类（红霉素）msr(A/B)msrC外排泵114ermA 23S甲基化酶转座子119ermB 23S甲基化酶转座子119ermC 23S甲基化酶质粒113,11484微生物之葡萄球菌耐药种类相关基因机制基因位置参考文献氨基糖苷类aacA-ap84林可霉素linA万古霉素vanA催化肽聚糖结构改变，使得亲和力降低质粒120vanB金葡菌暂没见到此基因介导耐药莫匹罗星（mupirocin）ileS-2质粒14.3%115117由于金葡菌没找到vanA的序列，暂用肠球菌vanA的序列进行引物设计85微生物之葡萄球菌林可霉素linA万古霉素vanA催化肽聚糖结构改变，使得亲85金葡菌