中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测ppt课件

中东呼吸综合征（中东呼吸综合征（MERSMERS）疫情处理与实验室检验疫情处理与实验室检验北京市疾病预防控制中心北京市疾病预防控制中心林长缨林长缨20152015年年7 7月月1010日日1中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测中东呼吸综合征（MERS）疫情处理与实验室检验北京市疾病预主要内容主要内容中东呼吸综合征（MERS）MERS-CoVMERS的流行病学MERS诊断与报告MERS实验室检测总结2中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测主要内容中东呼吸综合征（MERS）2中东呼吸综合征疫情处理及中东呼吸综合征中东呼吸综合征（MERS）中东呼吸综合征：Middle East Respiratory Syndrome，简称MERS病 原 体：新型冠状病毒，MERS-CoV传播途径：近距离长时间接触，经呼吸道传播易感人群：儿童、老年人和基础病患者首例病例：2012年6月，沙特人，吉大港临床特点：致死率较高，儿童病例症状较轻，重症病例主要是下呼吸道感染、呼吸衰竭、休克和急性肾衰竭疫情特点：散发为主3中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测中东呼吸综合征（MERS）中东呼吸综合征：Middle E中东呼吸综合征冠状病毒中东呼吸综合征冠状病毒MERS-CoV4中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测中东呼吸综合征冠状病毒MERS-CoV4中东呼吸综合征疫情人类冠状病毒人类冠状病毒5中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测人类冠状病毒5中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测冠状病毒属冠状病毒属采用RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)上1,23bp片段进行分析6中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测冠状病毒属采用RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)上1,23bMERS-CoV分类地位分类地位冠状病毒科，冠状病毒属，亚属，C种系其它冠状病毒与HKU4(扁颅蝠冠状病毒）和HKU5(伏翼蝙蝠冠状病毒)亲缘较近与SARS-CoV、OC43和HKU1分属不同种系与229E、NL63分属不同亚属7中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测MERS-CoV分类地位冠状病毒科，冠状病毒属，亚属，C种病毒基因组病毒基因组单股正链RNA，基因组=30,106bp，分11个开放读取框合成5种独特的辅助蛋白(3,4a,4b,5,8b)及2种复制酶和4种结构蛋白8中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病毒基因组单股正链RNA，基因组=30,106bp，分11个病毒结构病毒结构RNA包膜病毒病毒外壳：棘突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白病毒核心：单股正链RNA、核衣壳蛋白棘突蛋白棘突蛋白 S包膜蛋白包膜蛋白 E核衣壳蛋白核衣壳蛋白 N膜蛋白膜蛋白 M9中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病毒结构RNA包膜病毒棘突蛋白 S包膜蛋白 E核衣壳蛋白 N病毒侵入细胞的机理病毒侵入细胞的机理人类CD26（支气管上皮细胞）是MERS-CoV的细胞受体MERS-CoV刺突蛋白与CD26结合，介导了病毒附着宿主细胞，病毒与细胞融合由此触发感染。10中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病毒侵入细胞的机理人类CD26（支气管上皮细胞）是MERS-MERS的流行病学特点的流行病学特点11中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测MERS的流行病学特点11中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测传染源传染源 自然宿主？自然宿主？核酸片段血清抗体单峰驼分布12中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测传染源 自然宿主？核酸片段血清抗体单峰驼分布12中东呼吸骆驼骆驼-人传播证据人传播证据The Lancet Infectious Diseases（Volume 14,Issue 2,9394，2014）Identification of MERS-CoV in dromedary camelsNeil M Fergusona,Maria D Van Kerkhovea13中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测骆驼-人传播证据13中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测传染源传染源-MERS患者患者有限的人传人二代病例少，没有三代病例 少量家族聚集性病例传播能力较弱14中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测传染源-MERS患者有限的人传人14中东呼吸综合征疫情处理及传播途径传播途径15中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测传播途径15中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测疫情发现疫情发现患者：60岁，沙特阿拉伯籍发病时间：6月6日入院时间：6月13日，吉大港某医院主要症状：重症肺炎、肾功能衰竭死亡时间：6月24日实验室检测：尸检肺组织的冠状病毒通用引物 检测阳性；经荷兰Erasmus医学 中心（EMC）进行序列比对，怀 疑为一种新型冠状病毒感染。16中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测疫情发现患者：60岁，沙特阿拉伯籍16中东呼吸综合征疫情处理疫情发现疫情发现患者：男性，49岁，卡塔尔籍发病时间：9月3日入院时间：9月7日，多哈某医院；9月11日转 英国治疗主要症状：呼吸道症状、肾功能衰竭流行病学史：发病前曾到沙特阿拉伯实验室检测：呼吸道样本中冠状病毒通用引物 检测阳性；经序列比对，怀疑为 一种新型冠状病毒感染。17中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测疫情发现患者：男性，49岁，卡塔尔籍17中东呼吸综合征疫情处疫情发现疫情发现两例病例体内的新型冠状病毒聚合酶基因序列比对（250bp）结果显示其同源性高达99.5%病毒与蝙蝠冠状病毒的同源性较高(HKU4和HKU5)与SARS冠状病毒在基因序列上相似程度不高此病毒感染导致一种新发传染病 18中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测疫情发现两例病例体内的新型冠状病毒聚合酶基因序列比对（250病例来自于中东国家病例来自于中东国家欧盟CDC发布的疫情动态（2015年5月底）19中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例来自于中东国家欧盟CDC发布的疫情动态（2015年5月底全球疫情状态全球疫情状态WHO：截至2015年7月8日，全球共计1,368例实验室确诊病例，死亡487人，病死率约为36%。欧盟CDC：截至2015年5月30日，全球累计报告MERS确诊病例1172例，死亡479例，病死率40.87%20中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测全球疫情状态WHO：截至2015年7月8日，全球共计1,3621中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测21中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例时间分布病例时间分布22中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例时间分布22中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例地区分布病例地区分布截至截至2015年年5月月30日日中东地区：中东地区：沙特阿拉伯、阿沙特阿拉伯、阿联酋、卡塔尔、联酋、卡塔尔、苏丹、苏丹、安曼、科安曼、科威特威特、也门、黎、也门、黎巴嫩、伊朗巴嫩、伊朗另外：另外：亚洲：亚洲：韩国韩国23中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例地区分布截至2015年5月30日23中东呼吸综合征疫情处病例特征病例特征据WHO报道，MERS的潜伏期为2-14天。男性病例较多：男女性别比为1.7：1年龄中位数为49岁（范围为1-94岁）男性：50岁，女性：46岁。病死率较高（36%左右）无症状感染者比例大约为20%。17%的病例为医务人员：医院是“重灾区”24中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例特征据WHO报道，MERS的潜伏期为2-14天。24中东临床表现临床表现主要表现：发热畏寒/寒战干咳、气短头痛和肌痛。其他症状：咽痛、鼻塞、咯痰恶心、呕吐、头晕腹泻和腹痛。25中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床表现主要表现：25中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床表现临床表现重症患者：开始表现为发热伴上呼吸道症状一周内快速进展为重症肺炎，伴有呼吸衰竭、休克、急性肾功能衰竭、凝血功能障碍和血小板减少。MERS患者中有28.6%的病例无临床症状仅表现为轻微的呼吸道症状无发热、腹泻和肺炎。26中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床表现重症患者：26中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床表现临床表现影像学表现：如发生肺炎可出现：单侧至双侧的肺部影像学改变主要特点为胸膜下和基底部分布，磨玻璃影为主，可出现实变影27中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床表现影像学表现：27中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床检测临床检测血常规：白细胞总数一般不高，可伴有淋巴细胞减少。血生化检查：部分患者肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酐等升高。28中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床检测血常规：白细胞总数一般不高，可伴有淋巴细胞减少。28防控措施防控措施29中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测防控措施29中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测MERS诊断与报告诊断与报告30中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测MERS诊断与报告30中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例发现病例发现严重急性呼吸道感染（SARI）监测区区县医院医院科室科室东城天坛医院呼吸内科病房感染性疾病科病房重症医学科病房儿科病房重症监护室（ICU）石景山石景山医院朝阳北京华信医院西城北京大学人民医院海淀航天中心医院大兴大兴区人民医院密云密云县医院昌平昌平区医院门头沟京煤集团总医院怀柔怀柔区第一医院不明原因肺炎病例监测呼吸道暴发疫情监测口岸监测31中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例发现严重急性呼吸道感染（SARI）监测区县医院科室东城天疑似病例定义疑似病例定义患者同时符合临床表现和流行病学史，但尚无实验室确认依据。临床表现临床表现 难以用其他病原感染解释的急性呼吸道感染：体温38 、咳嗽，有胸部影像学改变等。流行病学史流行病学史发病前14天内在中东呼吸综合征病例报告或流行地区旅游或居住；或与疑似/临床诊断/确诊病例有密切接触史。阿拉伯半岛中或附近的国家和地区：巴林、伊拉克、伊朗、以色列、约旦河西岸和加沙地带、约旦、科威特、黎巴嫩、阿曼、卡塔尔、沙特阿拉伯、叙利亚、阿联酋、也门32中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测疑似病例定义患者同时符合临床表现和流行病学史，但尚无实验室确临床诊断病例定义临床诊断病例定义满足疑似病例标准，仅有实验室阳性筛查结果（如仅呈单靶标PCR或单份血清抗体阳性）的患者。满足疑似病例标准，因仅有单份采集或处理不当的标本而导致实验室检测结果阴性或无法判断结果的患者。33中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测临床诊断病例定义满足疑似病例标准，仅有实验室阳性筛查结果33确诊病例定义确诊病例定义具备下述4项之一者可确诊为中东呼吸综合征实验室确诊病例：至少双靶标PCR检测阳性。单个靶标PCR阳性产物，经基因测序确认。从呼吸道标本中分离出中东呼吸综合征冠状病毒。恢复期血清中东呼吸综合征冠状病毒抗体较急性期血清抗体水平呈4倍及以上升高。34中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测确诊病例定义具备下述4项之一者可确诊为中东呼吸综合征实验室确密切接触者定义密切接触者定义诊疗、护理中东呼吸综合征确诊、临床诊断或疑似病例时未采取有效防护措施未采取有效防护措施的医护人员、家属或其他与病例有类似近距离接触的人员。2.在确诊、临床诊断或疑似病例出现症状期间，有共同居住、学习、工作或其它密切接触的人员。3.现场调查人员调查后判断认为符合条件的人员。35中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测密切接触者定义诊疗、护理中东呼吸综合征确诊、临床诊断或疑似病病例报告与调查病例报告与调查发现中东呼吸综合征疑似病例、临床诊断病例及确诊病例时，具备网络直报条件的医疗机构应当于2小时内进行网络直报，并同时报告本辖区疾控中心各区县疾控中心接到辖区内医疗机构或医务人员报告中东呼吸综合征疑似病例、临床诊断病例及确诊病例后，应在2小时内报告区县卫生局、市疾控中心。按照中东呼吸综合征病例流行病学个案调查表赶赴现场对病例进行流行病学调查和采样于12小时内将流行病学调查报告上报区县卫生局和市疾控中心，同时将调查情况通报病例现住址辖区疾控中心。36中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例报告与调查发现中东呼吸综合征疑似病例、临床诊断病例及确诊标本采集与检测标本采集与检测采集疑似病例的上呼吸道标本和下呼吸道标本；采集急性期血清和恢复期血清。按照高致病性病原微生物运输相关要求送本辖区疾控中心进行标本检测。辖区疾控中心检测出MERS-CoV核酸阳性样本后，应立即将阳性标本送市疾控中心进行复核。具备实验室检测条件的网络实验室所在医疗机构对于本单位发现的疑似病例，可在确保生物安全的情况下进行初筛。37中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测标本采集与检测采集疑似病例的上呼吸道标本和下呼吸道标本；37病例救治病例救治医疗机构发现疑似病例后应按照北京市卫生局关于做好可能发生的中东呼吸综合征疫情医疗救治准备工作的通知（京卫医字2013160号）有关规定进行救治做好医疗救治所需的人员、药品、设施、设备、防护用品等保障工作。38中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例救治医疗机构发现疑似病例后38中东呼吸综合征疫情处理及实病例管理病例管理在知情同意的情况下，对临床诊断和确诊病例实行隔离治疗参与救治的医护人员实施有效防护措施（标准预防+飞沫传播预防+接触传播预防）。病例管理和感染防护具体要求参见国家卫生计生委制定的中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014年版）和中东呼吸综合征医院感染预防与控制技术指南（2014年版）。39中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例管理在知情同意的情况下，对临床诊断和确诊病例实行隔离治疗病例管理病例管理对于疑似病例：在尚未明确排除中东呼吸综合征冠状病毒感染前，原则上也应当实施隔离医学观察和治疗做好感染防护，直至病人发热、咳嗽等临床症状体征消失或排除感染中东呼吸综合征冠状病毒。40中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病例管理对于疑似病例：40中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测密切接触者的追踪和管理密切接触者的追踪和管理由密切接触者现住址所在区县卫生局组织、协调密切接触者的追踪和管理。密切接触者均实行居家医学观察，每日至少进行2次体温测定，并询问是否出现急性呼吸道症状或其他相关症状及病情进展。41中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测密切接触者的追踪和管理由密切接触者现住址所在区县卫生局组织、密切接触者的追踪和管理密切接触者的追踪和管理密切接触者医学观察期为与病例末次接触后14天。医学观察期内，一旦出现发热、咳嗽，或腹泻等非呼吸道感染症状，或有肺炎症状和体征等表现的病例，区县卫生局负责将其转送至定点医疗机构进行诊断、报告、隔离及治疗。现住址所在区县疾控中心应当采集密切接触者的咽拭子标本和双份血清标本。第一份血清标本应当尽可能在末次暴露后7天内采集第二份血清标本间隔3周后采集咽拭子标本由采集标本的区县疾控中心开展检测；血清标本送市疾控中心。42中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测密切接触者的追踪和管理密切接触者医学观察期为与病例末次接触后MERS实验室检测实验室检测43中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测MERS实验室检测43中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测实验室检测实验室检测血常规：白细胞总数一般不高，可伴有淋巴细胞减少。血生化检查：部分患者肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酐等升高。病原学检测病毒分离培养：金标准血清学抗体检测：需要双份血清核酸PCR检测：可用于早期检测44中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测实验室检测血常规：白细胞总数一般不高，可伴有淋巴细胞减少。4病原学检测病原学检测病毒分离：需在BSL-3实验室内进行标本标本上、下呼吸道采样物，粪便，尿液，组织器官等培养用细胞系非洲绿猴肾（Vero）细胞恒河猴肾（LLC-MK2）细胞45中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测病毒分离：需在BSL-3实验室内进行45中东呼吸综病原学检测病原学检测血清学检测：可在BSL-2实验室内进行标本：急性期、恢复期双份血清，各5ml急性期血清应在发病后7天内采集，恢复期血清应在发病后第34周采集。方法ELISA法恢复期血清抗体滴度较急性期4倍及以上升高46中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测血清学检测：可在BSL-2实验室内进行46中东呼吸病原学检测病原学检测血清学检测：可在BSL-2实验室内进行标本：急性期、恢复期双份血清，各5ml急性期血清应在发病后7天内采集恢复期血清应在发病后第34周采集方法ELISA法恢复期血清抗体滴度较急性期4倍及以上升高注意血清学检测中交叉凝集问题47中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测血清学检测：可在BSL-2实验室内进行47中东呼吸病原学检测病原学检测核酸检测：可在BSL-2实验室内进行标本：上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液下呼吸道标本：包括呼吸道（支气管）抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本其它标本，如尸检标本，粪便，尿液（5-10日）等标本储存及运输标本储存及运输采集后72小时内，可2-8C冷藏或运输长期保存温度为-70C或更低每个病例应尽可能在病程进展的不同阶段连续同时采集上、下呼吸道标本48中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测核酸检测：可在BSL-2实验室内进行48中东呼吸综病原学检测病原学检测核酸检测：可在BSL-2实验室内进行靶基因靶基因：E蛋白上游基因（upE）：Real Time-PCR，初筛和确认ORF1b基因：Real Time-PCR，初筛和确认ORF1a基因：Real Time-PCR，初筛和确认 RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）基因：nRT-PCR，用于测序核衣壳蛋白（N）基因：nRT-PCR，用于测序49中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测核酸检测：可在BSL-2实验室内进行49中东呼吸综病原学检测病原学检测核酸检测阳性结果：至少两种MERS-CoV PCR检测结果阳性；或一种MERS-CoV PCR阳性+PCR产物序列测序结果与已知对应序列相符。两种靶序列检测结果不一致时两种靶序列检测结果不一致时RT-PCR+测序50中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测核酸检测阳性结果：50中东呼吸综合征疫情处理及实验病原学检测病原学检测考虑假阴性的因素：样本质量差技术本身存在的原因PCR检测结果为阴性，但临床表现和流行病学特点提示是MERS-CoV感染时：可采用血清学方法进行检测：双份血清标本能够满足血清学检测的要求。51中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测考虑假阴性的因素：51中东呼吸综合征疫情处理及实验病原学检测病原学检测巢式PCR：巢式PCR通过两次扩增，可对样本中微量病毒目的片段进行特异扩增，扩增产物序列较长，可用于序列测定对RdRp基因和N基因序列进行PCR扩增，可产生较长片段的基因序列，通过序列测定，确定感染病毒型别可用于初筛和确认52中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测病原学检测巢式PCR：52中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测加强实验室生物安全及检测加强实验室生物安全及检测各有关医疗卫生机构应按照高致病性病原微生物实验室生物安全相关规定开展病例救治、流行病学调查、标本采集、运输和检测等工作。应当尽可能采集病例的下呼吸道标本，以提高检出率。在疑似病例标本检测过程中，只要出现任何一个靶序列检测结果阳性或可疑阳性，请及时与市疾控联系，以便进一步复核验证。53中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测加强实验室生物安全及检测各有关医疗卫生机构应按照高致病性病原总结总结MERS尚有很多情况不明，没有疫苗等有效的预防控制措施，MERS病例仍可能不断出现，涉及国家范围有可能进一步扩大。目前仅发现病毒具有有限的人传人能力，续发病例几乎均为二代病例，极少出现三代以上病例，出现大流行的风险仍然较低。在二代病例中医疗机构相关感染病例较多，包括多起医院聚集性病例，表明在未采取有效医院感染控制措施的情况下，医院出现出现院内感染的风险较高。北京有可能出现输入性病例以及由于输入性病例所导致的续发病例的可能性54中东呼吸综合征疫情处理及实验室检测总结MERS尚有很多情况不明，没有疫苗等有效的预防控制措施，