实验大肠杆菌的培养和分离ppt课件

微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生生物原生生物特点：特点：结构简单结构简单,形体微小形体微小.通常要用光学显微镜通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用不能进行光合作用.原核生物原核生物界界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基础知识：(一)微生物微生物包括哪五类：病毒特点：结构简单,形体微小.通常要用光学大肠杆菌（E.coli）分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、污水、土壤、谷类、乳制品等当中。污水、土壤、谷类、乳制品等当中。大肠杆菌在人体的大肠杆菌在人体的_中一般对人体无害，但任何中一般对人体无害，但任何大肠杆菌如果进入大肠杆菌如果进入_都会对人体产生危害。都会对人体产生危害。大肠杆菌是大肠杆菌是_工程中被广泛采用的工具。工程中被广泛采用的工具。肠道肠道泌尿系统泌尿系统基因基因革兰氏革兰氏_（填阴或阳）性菌（填阴或阳）性菌阴阴代谢类型：代谢类型：异养，兼性厌氧型异养，兼性厌氧型生长适宜温度：生长适宜温度：质粒、质粒、EcoREcoR限制酶、限制酶、E.coli-DNAE.coli-DNA连接酶、连接酶、受体细胞受体细胞3737左右左右大肠杆菌（E.coli）分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分大肠杆菌大肠杆菌酵母菌酵母菌放线菌放线菌 霉菌霉菌菌落：菌落：单个或少数细菌单个或少数细菌在在固体固体培养基培养基上大量生长繁殖时，所上大量生长繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形形成的肉眼可见的具有一定形态结构的态结构的子细胞群体子细胞群体。不同微生物形成的菌落具有不同不同微生物形成的菌落具有不同的特征，的特征，是鉴定菌种的重要依据是鉴定菌种的重要依据。如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。菌落的概念菌落的概念白色或乳白色，光滑白色或乳白色，光滑大肠杆菌菌落：大肠杆菌菌落：大肠杆菌酵母菌放线菌 霉菌菌落：单个或少数细菌在固体培养基上 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.芽孢 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆一、基础知识：一、基础知识：（二）培养基（二）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态分：）按物理状态分：固体培养基固体培养基和和液体培养液体培养基、半固体培养基基、半固体培养基。（2 2）按功能分：）按功能分：选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。（3 3）按成分分：）按成分分：天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途一、基础知识：（二）培养基 培养基（培养液液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥弥散散)(是否运动是否运动)半固体培养基：无动力 有动力(弥散)(是否运动选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的核苷的培养基培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞选择培养基加入青霉素的培养基:天然培养基有血清、天然培养基有血清、血浆、和组织提取液血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，营养成分丰富，培养效果好培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分成分复杂，影响对某些实复杂，影响对某些实验产物的提取和实验验产物的提取和实验结果的分析结果的分析;易发生支易发生支原体污染原体污染;根据细胞生存所需物质根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法的种类和数量，用人工方法模拟合成的。模拟合成的。合成培养基主要成分合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅合物、无机盐和其它一些辅助物质。助物质。优点：优点：标准化生产，组标准化生产，组分和含量相对固定分和含量相对固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长不能完全满足体外细胞生长需要。需要。合成培养基合成培养基:天然培养基：天然培养基：天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子；激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。球蛋白、胶原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。血清中含有：人工合成培养基只能维持细胞生存，要培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌，液体培养基：增菌，常用于发酵工业常用于发酵工业固体培养基：固体培养基：增菌，菌种保存及分离纯化、增菌，菌种保存及分离纯化、鉴定菌落、活菌计数等鉴定菌落、活菌计数等半固体培养基：动力检测，保种半固体培养基：动力检测，保种培养基的用途液体培养基：增菌，常用于发酵工业不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方调节调节pHpH2 2、成分、成分水、碳源、氮源、水、碳源、氮源、无机盐、生长因子无机盐、生长因子(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)真菌：真菌：5 56 6 细菌：细菌：6.5 6.5 7.5 7.5 有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方调节pH2、成分水、1.1.无菌操作的概念无菌操作的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止防止_污染的方法。污染的方法。四、无菌操作四、无菌操作_必须无菌、必须无菌、_也必须要无菌、也必须要无菌、_时不能带入其他杂菌时不能带入其他杂菌主要包括：主要包括：杂菌杂菌2.2.消毒与灭菌消毒与灭菌的概念及两者的区别的概念及两者的区别 消毒：消毒：使用使用较温和理化因素较温和理化因素，仅杀死物体表面或内，仅杀死物体表面或内部的部的一部分一部分对人体有害的微生物的过程。对人体有害的微生物的过程。不能杀死不能杀死芽孢和孢子。芽孢和孢子。灭菌：灭菌：使用使用强烈的理化因素强烈的理化因素消灭物体内外消灭物体内外所有所有微生微生物，包括芽孢和孢子。物，包括芽孢和孢子。各种器具各种器具培养基培养基转移菌种转移菌种1.无菌操作的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所比较消毒与灭菌比比较项理化因素的作理化因素的作用用强度度消消灭微生物的数微生物的数量量芽芽孢和和孢子能否子能否被消被消灭消毒消毒灭菌菌较为温和较为温和部分生活状态部分生活状态的微生物的微生物不能不能能能全部微生物全部微生物强烈强烈比较消毒与灭菌比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）（湿热灭菌）洒精灯灼烧灭菌洒精灯灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌（1 1）灭菌方法：）灭菌方法：3 3、常用的灭菌和消毒的方法、常用的灭菌和消毒的方法培养基、无菌水、培养基、无菌水、各种耐高温的玻璃金属器具各种耐高温的玻璃金属器具100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min15-30min需要保持干燥需要保持干燥耐高温的玻璃金属器皿耐高温的玻璃金属器皿160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h接种环等金属器具接种环等金属器具高压蒸汽灭菌（1）灭菌方法：3、常用的灭菌和消毒的方法培养基实验大肠杆菌的培养和分离ppt课件1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(2)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min(2)消毒的方法：3请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：（答：（1 1）、（）、（2 2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。答：（1）、（2）（一）制备（一）制备LBLB培养基（通用的细菌培养基）培养基（通用的细菌培养基）1 1、配方：蛋白胨、配方：蛋白胨0.50.5克，酵母提取物克，酵母提取物0.250.25克，克，氯化钠氯化钠0.50.5克，水克，水50ml50ml（配固体培养基再加琼脂（配固体培养基再加琼脂1 1克）克）溶解溶解计算称量计算称量调调pHpH分装分装加塞，包扎加塞，包扎2 2、流程、流程二二 操作步骤操作步骤灭菌灭菌倒平板倒平板（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）1、配方：蛋白胨0.分装：分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用_。加塞加塞：试管用塑料盖或：试管用塑料盖或_；三角瓶口用；三角瓶口用_或或_封口封口,再用再用_或报纸封口。或报纸封口。包扎：包扎：用用_或报纸或报纸三角漏斗三角漏斗棉花塞棉花塞封口膜封口膜6 6层纱布层纱布牛皮纸牛皮纸牛皮纸牛皮纸高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法灭菌灭菌1 1）加水：）加水：2 2）装锅：）装锅：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是向外层锅内加入适量的水，加水的要求是_._.物品放置的要求物品放置的要求_：加盖：将盖上的加盖：将盖上的排气软管排气软管插入内层灭菌桶的插入内层灭菌桶的_内。内。再以再以_方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。栓松紧一致，勿使漏气。不触及内胆不触及内胆整齐、稳定、留出空隙整齐、稳定、留出空隙排气槽排气槽两两对称两两对称三角漏斗棉花塞封口膜6层纱布牛皮纸牛皮纸高压蒸气灭菌法灭菌3 3）加热排气：）加热排气：4 4）保温保压：）保温保压：5 5）出锅：）出锅：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的_。_后，关上排气阀。后，关上排气阀。当锅内压力升到当锅内压力升到_kg/cm_kg/cm2 2时，控制时，控制热源，维持压力至热源，维持压力至_min_min。切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至力降至_时，打开时，打开_，旋松螺栓，打开，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。盖子，取出灭菌物品。冷空气冷空气待冷空气完全排尽待冷空气完全排尽0 01 11515排气阀排气阀否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。发生污染，甚至使容器爆炸。灭菌后，通常将实验用具放入灭菌后，通常将实验用具放入6080 _6080 _中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_。烘箱烘箱污染污染3）加热排气：4）保温保压：5）出锅：倒平板倒平板：待培养基冷却至：待培养基冷却至_ _ 时，将时，将每只培每只培养皿倒入养皿倒入_ml_ml未凝固的固体培养基，置未凝固的固体培养基，置于于_位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。部，待凝，使之形成平面。_备用。备用。制斜面制斜面：将未凝固的固体培养：将未凝固的固体培养基的试管基的试管_放，冷却待凝使即放，冷却待凝使即成为斜面。成为斜面。10101212水平水平倒置倒置斜斜倒平板、制斜面倒平板、制斜面操作平台操作平台：灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开_和和_，灭菌，灭菌30min.30min.过滤风过滤风紫外线紫外线超净台超净台1012水平倒置斜倒平板、制斜面灭菌好的培养基和实验思考题：思考题：A A、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？1 1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌3030分钟。分钟。2 2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。3 3、整个操作在酒精灯火焰旁进行、整个操作在酒精灯火焰旁进行4 4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。B B、培养基灭菌后，需要冷却到、培养基灭菌后，需要冷却到6060后才倒平板，你后才倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度呢？用什么办法来估计培养基的温度呢？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。思考题：B、培养基灭菌后，需要冷却到60后才倒平板，你思考题思考题C C、为何要将平板倒置？、为何要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落培养基，造成污染。落培养基，造成污染。D D、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。E E、如何检查培养基是否受杂菌的污染？、如何检查培养基是否受杂菌的污染？将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生则未受杂菌污染。则未受杂菌污染。思考题C、为何要将平板倒置？E、如何检查培养基是否受杂菌的污（二）液体培养基接种培养（二）液体培养基接种培养主要器具：主要器具：操作方法：操作方法：先将接种环进行先将接种环进行_灭菌灭菌,_,_后后的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基中，加塞。置于中，加塞。置于_摇床振荡培养小时。摇床振荡培养小时。无菌操作：无菌操作：略略摇床摇床思考：如何冷却接种环？思考：如何冷却接种环？可通过接触试管内壁或未可通过接触试管内壁或未长菌的培养基达到冷却的长菌的培养基达到冷却的目的。目的。接种环、摇床等接种环、摇床等灼烧灼烧冷却冷却（二）液体培养基接种培养主要器具：操作方法：先将接种环进行_（三）平板划线分离法（三）平板划线分离法主要器具：主要器具：操作过程：操作过程：注意：注意：无菌操作方法：同前。无菌操作方法：同前。将培养皿将培养皿_（盖在下），放于（盖在下），放于_恒温培养恒温培养箱中培养箱中培养_小时。小时。在作第二次以及其后的划线操作时，要从在作第二次以及其后的划线操作时，要从上一次划线的开始上一次划线的开始_划线。划线。接种环、接种环、思考：若如上图所示进行划线分离，则接种环总思考：若如上图所示进行划线分离，则接种环总共进行几次灼烧灭菌？共进行几次灼烧灭菌？恒温培养箱。恒温培养箱。每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。末端末端倒置倒置（三）平板划线分离法主要器具：操作过程：注意：无菌操作方法：实验大肠杆菌的培养和分离ppt课件 平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 平板划线的操作方法 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？烧接种环？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。2 2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？为什么？划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？3.3.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。4.4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。殖而来的菌落。5 5、如何判断接种操作是否符合无菌要求？、如何判断接种操作是否符合无菌要求？如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。接种过程中，无菌操作还未达到要求。3.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种（四）（四）稀释涂布平板法稀释涂布平板法主要器具：主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管玻璃三角刮刀、移液管或吸管操作过程：操作过程：先将培养菌液先将培养菌液稀释稀释（1010-5-51010-7-7倍）倍）用移液管或吸管取用移液管或吸管取0.1ml0.1ml稀释度不同的菌液，加稀释度不同的菌液，加在平板上，用无菌玻璃三角刮刀均匀涂布在培养在平板上，用无菌玻璃三角刮刀均匀涂布在培养基平面上。基平面上。在适当稀释度下在适当稀释度下，可培养得到相互分，可培养得到相互分开的的菌落。开的的菌落。将培养皿倒置（盖在下），放于将培养皿倒置（盖在下），放于 恒温培养恒温培养箱中培养小时。箱中培养小时。划线分离方法简单；涂布分离，易形成单菌落，划线分离方法简单；涂布分离，易形成单菌落，但操作复杂些。但操作复杂些。（四）稀释涂布平板法主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管操作10g10g土样土样从土壤中分离微生物从土壤中分离微生物稀释涂布法稀释涂布法10g土样从土壤中分离微生物稀释涂布法（五）斜面接种及菌种保存（五）斜面接种及菌种保存主要器具主要器具：操作过程操作过程：在无菌操作下，用接种环挑取：在无菌操作下，用接种环挑取_菌落，菌落，再用划线法再用划线法（自斜面底部向上轻轻划直线）接种接种在在_上，上，_恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养_小时小时后，后，_ _ 冰箱保存。冰箱保存。无菌操作无菌操作：同前：同前试管斜面培养基密闭效果比平面的好很多试管斜面培养基密闭效果比平面的好很多,不容易不容易进入杂菌，同时能用来做纯细菌的长期保存。进入杂菌，同时能用来做纯细菌的长期保存。思考：菌种保存为何采思考：菌种保存为何采用斜面而不是平板？用斜面而不是平板？接种环、恒温箱、冰箱接种环、恒温箱、冰箱单单斜面斜面（五）斜面接种及菌种保存主要器具：操作过程：在无菌操作下，用菌种的保存菌种的保存菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长实验一实验一 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离实验步骤：实验步骤：一一 配制配制LBLB培养基培养基溶解溶解计算称量计算称量调调pHpH分装分装加塞，包扎加塞，包扎灭菌灭菌二二 倒平板、制斜面倒平板、制斜面三三 大肠杆菌的培养大肠杆菌的培养三三 大肠杆菌的分离大肠杆菌的分离平板划线分离法（或稀释涂布平板法）平板划线分离法（或稀释涂布平板法）使所需细菌大量繁殖使所需细菌大量繁殖获得单菌落，纯化菌株获得单菌落，纯化菌株四四 斜面接种培养斜面接种培养目的菌株的纯培养和菌种保存目的菌株的纯培养和菌种保存实验一 大肠杆菌的培养和分离实验步骤：一 配制LB培养基溶类型一类型一 培养基及无菌技培养基及无菌技术【典例【典例1 1】(2015(2015绍兴模模拟)请回答下列与大回答下列与大肠杆菌有关的杆菌有关的问题。(1)(1)从生从生态系系统的成分上看，的成分上看，大大肠杆菌属于杆菌属于。类型一 培养基及无菌技术成分成分含量含量蛋白蛋白胨10.0 g10.0 g乳糖乳糖5.0 g5.0 g蔗糖蔗糖5.0 g5.0 gK K2 2HPOHPO4 42.0 g2.0 g显色色剂0.2 g0.2 g琼脂脂12.0 g12.0 g将上述物将上述物质溶解后，用蒸溶解后，用蒸馏水定容到水定容到1 000 mL1 000 mL(2)(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。成分含量蛋白胨10.0 g乳糖5.0 g蔗糖5.0 gK根据物理状根据物理状态划分，划分，该培养基属于培养基属于(固体、固体、液体液体)培养基。培养基。该培养基中的碳源是培养基中的碳源是。(3)(3)在微生物培养操作在微生物培养操作过程中，程中，为防止防止杂菌菌污染，需染，需对培养基和培养皿培养基和培养皿进行行(填填“消毒消毒”或或“灭菌菌”)；操作者的双手需要；操作者的双手需要进行清洗和行清洗和。空气。空气中的中的细菌可用紫外菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外，其原因是紫外线能使蛋白能使蛋白质变性，性，还能能 。根据物理状态划分，该培养基属于(固体、液体)培养基(4)(4)将配制好的培养基分装到将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支管中，加棉塞后若干支试管一捆，管一捆，包上牛皮包上牛皮纸并用皮筋勒并用皮筋勒紧放入放入中中灭菌，温度菌，温度为，时间为。灭菌完菌完毕拔掉拔掉电源，待源，待锅内内压力自然降到大气力自然降到大气压时，将，将试管取出。如果棉塞管取出。如果棉塞上沾有培养基，此上沾有培养基，此试管管应。(5)(5)使用高使用高压蒸汽蒸汽灭菌菌锅时注意，先向注意，先向锅内倒入内倒入。把。把锅内水加内水加热煮沸并将其中原有冷空气煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后，将底排出后，将锅密密闭。若在若在灭菌前，没有排尽菌前，没有排尽锅内的冷空气会内的冷空气会导致致 。(4)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，(6)(6)从一支从一支试管向另一支管向另一支试管接种管接种时注意，接种注意，接种环要在酒精灯要在酒精灯(选填填“内焰内焰”或或“外焰外焰”)灭菌，并且待接种菌，并且待接种环后后蘸取菌种，蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管管在适宜温在适宜温度下培养，度下培养，长成菌落后放入成菌落后放入冰箱中保存。冰箱中保存。(6)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯【解题指南】【解题指南】解答本题需明确以下两点：解答本题需明确以下两点：(1)(1)根据表中提供的信息分析培养基的类型。根据表中提供的信息分析培养基的类型。(2)(2)根据题干信息总结无菌操作应注意的问题。根据题干信息总结无菌操作应注意的问题。【解题指南】解答本题需明确以下两点：【解析】【解析】(1)(1)大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆菌属于分解者。菌属于分解者。(2)(2)表中的培养基配方中含有琼脂，是固体培养基，其中能为大肠杆表中的培养基配方中含有琼脂，是固体培养基，其中能为大肠杆菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)(3)微生物培养过程中，培养基和培养皿要进行灭菌，操作者的双手微生物培养过程中，培养基和培养皿要进行灭菌，操作者的双手要进行消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能要进行消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能损伤损伤DNADNA的结构。的结构。【解析】(1)大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠(4)(4)培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为1 kg/cm1 kg/cm2 2、温度为、温度为121121条件下，灭菌条件下，灭菌15 min15 min。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，应废弃。应废弃。(5)(5)使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还有可能损坏设备。有可能损坏设备。(6)(6)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，否则会杀死菌种造成实验失败。否则会杀死菌种造成实验失败。(4)培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为1 kg/cm答案：答案：(1)(1)分解者分解者(2)(2)固体乳糖、蔗糖、蛋白胨固体乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)(3)灭菌消毒损伤灭菌消毒损伤DNADNA的结构的结构(4)(4)高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅12112115 min15 min废弃废弃(5)(5)适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底(6)(6)外焰冷却外焰冷却44答案：(1)分解者【互【互动探究】探究】(1)(1)培养大培养大肠杆菌除用杆菌除用题中所中所给培养基外，培养基外，还可用何种培养基？可用何种培养基？提示：提示：LBLB液体培养基。液体培养基。(2)(2)表中的培养基在配制表中的培养基在配制时应如何操作？如何操作？提示：提示：表中的培养基中含有琼脂成分，配制时要不断搅拌，否则易引表中的培养基中含有琼脂成分，配制时要不断搅拌，否则易引起琼脂糊底而使烧杯炸裂。起琼脂糊底而使烧杯炸裂。【互动探究】【加固【加固训练】(2015(2015嘉嘉兴模模拟)下面是肺炎双球菌离体下面是肺炎双球菌离体转化化实验的主的主要步要步骤：【加固训练】(2015嘉兴模拟)下面是肺炎双球菌离体转化实(1)(1)实验用的器皿必用的器皿必须是无菌的，常用是无菌的，常用法法灭菌。用此法菌。用此法对培培养基养基灭菌菌时，常将培养基装在，常将培养基装在(器皿器皿)中中进行。行。(2)(2)实验操作需在超操作需在超净工作台上工作台上进行。工作台上，行。工作台上，实验前一段前一段时间需需打开，而打开，而实验中需关中需关闭的是的是。A.A.酒精灯酒精灯 B.B.照明灯照明灯C.C.过滤风 D.D.紫外灯紫外灯(3)(3)平面培养基与平面培养基与悬浮培养所用的培养基相比，浮培养所用的培养基相比，应增加的成分是增加的成分是。(1)实验用的器皿必须是无菌的，常用法灭菌。用此法对(4)(4)常用涂布法常用涂布法给平面培养基接种。下列叙述平面培养基接种。下列叙述错误的是的是()A.A.接种的目的是使接种的目的是使细菌相互分离菌相互分离B.B.接种需接种需过滤除去除去杂菌后菌后进行行C.C.接种工具需灼接种工具需灼烧后使用后使用D.D.接种需在酒精灯火焰旁接种需在酒精灯火焰旁进行行(5)(5)在在3737恒温箱中培养恒温箱中培养时，培养皿需，培养皿需，主要目的是避免水，主要目的是避免水滴影响滴影响的形成。的形成。(6)(6)培养后，如果培养后，如果观察到菌落重叠，察到菌落重叠，则在涂布法接种之前需在涂布法接种之前需进行行操作。操作。(4)常用涂布法给平面培养基接种。下列叙述错误的是()【解析】【解析】(1)(1)微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌法进微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，培养基则装在三角瓶中再进行灭菌。行灭菌，培养基则装在三角瓶中再进行灭菌。(2)(2)在超净工作台上操在超净工作台上操作时应关闭紫外灯，避免对实验者造成伤害。作时应关闭紫外灯，避免对实验者造成伤害。(3)(3)平面培养基因含有平面培养基因含有琼脂而呈固体或半固体状态。琼脂而呈固体或半固体状态。(4)(4)接种的目的是为了得到所需要的细接种的目的是为了得到所需要的细菌，在无菌条件下进行，杂菌和肺炎双球菌大小差不多，所以用过滤菌，在无菌条件下进行，杂菌和肺炎双球菌大小差不多，所以用过滤的方法是不能除去杂菌的。的方法是不能除去杂菌的。(5)(5)培养皿在培养箱中应倒置，防止水滴培养皿在培养箱中应倒置，防止水滴滴落污染培养基，影响单菌落的形成。滴落污染培养基，影响单菌落的形成。(6)(6)如果菌落重叠，说明菌液如果菌落重叠，说明菌液浓度过高，需要稀释。浓度过高，需要稀释。【解析】(1)微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌法答案：答案：(1)(1)高压蒸汽灭菌三角瓶高压蒸汽灭菌三角瓶(2)D(2)D(3)(3)琼脂琼脂(4)B(4)B(5)(5)倒置单菌落倒置单菌落(6)(6)稀释菌液稀释菌液答案：(1)高压蒸汽灭菌三角瓶类型二型二 大大肠杆菌的培养和分离杆菌的培养和分离【典例【典例2 2】大大肠杆菌是生存在人体杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克道中的正常菌群，每克粪便中含便中含有有10109 9个，且能个，且能够与致病菌混与致病菌混杂生生长。如果食品和。如果食品和饮用水中出用水中出现大大肠杆菌，就意味着食物可能被杆菌，就意味着食物可能被粪便便污染而染而带上致病菌，因而常将大上致病菌，因而常将大肠杆杆菌的数量作菌的数量作为食品食品卫生的生的检测指指标之一。之一。请据此回答下列据此回答下列问题：类型二 大肠杆菌的培养和分离(1)(1)测定街定街边出售的奶茶中大出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法杆菌的数目，常用涂布分离法进行行测定。定。该方法首先配制方法首先配制LBLB培养基，培养基，进行高行高压蒸汽蒸汽灭菌后冷却至菌后冷却至6060，在，在旁倒在培养皿中形成平板；旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶奶茶样品品进行一行一定倍数的稀定倍数的稀释，取，取0.1 mL0.1 mL奶茶稀奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，液，加在培养皿的固体培养基上，用用涂布在培养基平面上，然后涂布在培养基平面上，然后进行培养；行培养；观察察统计培养皿中培养皿中数目；数目；该数据比数据比实际数数值要要 (填填“高高”或或“低低”)，原因是原因是 。实验完成后需要完成后需要对培养基培养基进行行处理，然后理，然后才能倒掉。才能倒掉。(1)测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行(2)(2)若要若要对上述培养基中的菌种上述培养基中的菌种进行行扩大培养，大培养，则需配制需配制LBLB 培养培养基，基，灭菌后，将菌后，将在酒精灯火焰上在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取后冷却，然后蘸取单菌菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养境中培养h h即可。即可。(2)若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配制LB【解析】【解析】(1)(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。然后才能倒掉。【解析】(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，(2)(2)对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸取带菌的培养物，接种到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种取带菌的培养物，接种到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种培养培养12 h12 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。，每毫升培养基中就有几亿个细菌。答案：答案：(1)(1)固体酒精灯火焰玻璃刮刀固体酒精灯火焰玻璃刮刀(涂布棒涂布棒)菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落灭菌个菌落灭菌(2)(2)液体接种环液体接种环12 12(2)对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环【加固【加固训练】(2015(2015杭州模杭州模拟)大大肠杆菌是生活在人和高等杆菌是生活在人和高等动物体物体内的一种常内的一种常见细菌，在菌，在饮用水的用水的检测中常用它作中常用它作为水源是否受到水源是否受到污染的指示菌，在染的指示菌，在遗传学上常作学上常作为实验材料，在基因工程中常用它作材料，在基因工程中常用它作为受体受体细胞，胞，为人人类的健康和科学技的健康和科学技术的的发展作出了展作出了许多多贡献。献。请回答下列有关大回答下列有关大肠杆菌的杆菌的问题：(1)(1)在大在大肠杆菌培养杆菌培养过程中，除考程中，除考虑营养条件外，养条件外，还要考要考虑、和渗透和渗透压等条件。由于等条件。由于该细菌具有体菌具有体积小、小、结构构简单、易、易培养、培养、等等优点，因此常作点，因此常作为遗传学研究的学研究的实验材料。材料。【加固训练】(2015杭州模拟)大肠杆菌是生活在人和高等动(2)(2)分离大肠杆菌时常用的接种方法是分离大肠杆菌时常用的接种方法是法和法和法。前者操作简单，后者法。前者操作简单，后者更易分开，更易分开，但操作复杂些。但操作复杂些。(3)(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察宜的温度下放置适当的时间，观察。(2)分离大肠杆菌时常用的接种方法是法和(4)(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是()A.A.严格操作、多次重复严格操作、多次重复B.B.保证待测样品稀释的浓度比较合适保证待测样品稀释的浓度比较合适C.C.倒平板培养倒平板培养D.D.计数所有菌落，取其平均值计数所有菌落，取其平均值(5)(5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色等等对细菌进行初步的鉴定对细菌进行初步的鉴定(或分类或分类)。(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估【解题指南】【解题指南】解答本题的关键有两个方面：解答本题的关键有两个方面：(1)(1)在微生物培养操作过程中需要灭菌，不同的对象采用的灭菌方法在微生物培养操作过程中需要灭菌，不同的对象采用的灭菌方法不同。比较各种灭菌方法，并说明各种方法能消灭细菌的原因。不同。比较各种灭菌方法，并说明各种方法能消灭细菌的原因。(2)(2)菌种的鉴定通常使用固体培养基，根据菌落的特征鉴定菌种，不菌种的鉴定通常使用固体培养基，根据菌落的特征鉴定菌种，不能用单个的细菌进行菌种鉴定。能用单个的细菌进行菌种鉴定。【解题指南】解答本题的关键有两个方面：【解析】【解析】(1)(1)大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适宜大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适宜的温度、酸碱度的温度、酸碱度(pH)(pH)和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁殖速度快，常作为遗传学研究的实验材料。殖速度快，常作为遗传学研究的实验材料。(2)(2)分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方法简单；后者单菌落更易分开，但操作复杂些。法简单；后者单菌落更易分开，但操作复杂些。【解析】(1)大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适(3)(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污适当的时间，观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污染，在适宜条件下培养一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可根染，在适宜条件下培养一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可根据菌落数量的多少判断污染程度。据菌落数量的多少判断污染程度。(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于(4)(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，应该采用倒平板培养，并且严格操作、多次重复；值更接近实际值，应该采用倒平板培养，并且严格操作、多次重复；保证待测样品稀释的浓度比较合适。保证待测样品稀释的浓度比较合适。(5)(5)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。进行初步的鉴定。(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估答案：答案：(1)(1)温度酸碱度温度酸碱度(pH)(pH)生活周期短生活周期短(或繁殖快或繁殖快)(2)(2)划线分离涂布分离单菌落划线分离涂布分离单菌落(3)(3)培养基上是否有菌落产生培养基上是否有菌落产生(4)D(4)D(5)(5)菌落特征菌落特征答案：(1)温度酸碱度(pH)生活周期短(或繁殖快)类型三型三 分离以尿素分离以尿素为氮源的微生物氮源的微生物【典例【典例3 3】(2012(2012浙江高考浙江高考)幽幽门螺杆菌螺杆菌(Hp)(Hp)感染是急慢性胃炎和消感染是急慢性胃炎和消化性化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，本并制成菌液后，进行行分离培养。分离培养。实验基本步基本步骤如下：如下：类型三 分离以尿素为氮源的微生物请回答：回答：(1)(1)在配制培养基在配制培养基时，要加入尿素和酚，要加入尿素和酚红指示指示剂，这是因是因为HpHp含含有有，它能以尿素作，它能以尿素作为氮源；若有氮源；若有HpHp，则菌落周菌落周围会出会出现 色色环带。(2)(2)下列下列对尿素溶液尿素溶液进行行灭菌的最适方法是菌的最适方法是灭菌。菌。A.A.高高压蒸汽蒸汽 B.B.紫外灯照射紫外灯照射C.70%C.70%酒精浸泡酒精浸泡 D.D.过滤请回答：(3)(3)步步骤X X表示表示。在无菌条件下操作。在无菌条件下操作时，先将菌液稀，先将菌液稀释，然后将菌液然后将菌液到培养基平面上。菌液稀到培养基平面上。菌液稀释的目的是的目的是为了了获得得菌落。菌落。(4)(4)在培养在培养时，需将培养皿倒置并放在，需将培养皿倒置并放在中。若不倒置培养，中。若不倒置培养，将将导致致 。(5)(5)临床上用床上用1414C C呼气呼气实验检测人体是否感染人体是否感染HpHp，其基本原理是，其基本原理是HpHp能将能将1414C C标记的的分解分解为NHNH3 3和和1414COCO2 2。(3)步骤X表示。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释【解题指南】【解题指南】解答本题需注意两个方面：解答本题需注意两个方面：(1)(1)细菌和真菌的培养步骤一般为配制培养基、高温灭菌、冷却倒平细菌和真菌的培养步骤一般为配制培养基、高温灭菌、冷却倒平板、接种、适宜条件下进行培养，依据这一步骤推测板、接种、适宜条件下进行培养，依据这一步骤推测X X的名称。的名称。(2)(2)检测尿素是否分解依据其分解产物呈碱性，用酸碱指示剂酚红检检测尿素是否分解依据其分解产物呈碱性，用酸碱指示剂酚红检测。测。【解题指南】解答本题需注意两个方面：【解析】【解析】(1)(1)幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为NHNH3 3和和COCO2 2，故，故尿素为氮源。尿素为氮源。NHNH3 3为碱性，能使酚红呈红色，故菌落周围会出现红色为碱性，能使酚红呈红色，故菌落周围会出现红色环带。环带。(2)(2)尿素在高温下分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。尿素在高温下分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。(3)(3)由细菌和真菌培养操作步骤可知，由细菌和真菌培养操作步骤可知，X X为接种。接种时，应将菌种均为接种。接种时，应将菌种均匀涂布在培养基上。为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。匀涂布在培养基上。为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。(4)(4)为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中培养。为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中培养。(5)(5)用用1414C C标记尿素，分解后标记物全部在标记尿素，分解后标记物全部在COCO2 2中。中。【解析】(1)幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为NH3和答案：答案：(1)(1)脲酶红脲酶红(2)D(2)D(3)(3)接种涂布单接种涂布单(4)(4)恒温培养箱无法形成单菌落恒温培养箱无法形成单菌落(5)(5)尿素尿素答案：(1)脲酶红(2)D【加固【加固训练】尿素是一种重要的尿素是一种重要的农业肥料，但若不肥料，但若不经细菌的分解，就菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关菌的有关问题，请分析回答：分析回答：【加固训练】尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就(1)(1)上上图是利用是利用 法法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。分散到培养基的表面。(2)(2)如果要如果要对培养的菌落培养的菌落进行行纯化，在培养基上划化，在培养基上划线操作中，操操作中，操作的第一步及每次划作的第一步及每次划线之前都要灼之前都要灼烧接种接种环，目的是，目的是对接种接种环进行行 。(1)上图是利用 法进行微生物接种，把聚集的菌种(3)(3)下表是一种培养基配方：下表是一种培养基配方：制制备培养基的操作步培养基的操作步骤是是()a.a.倒平板倒平板b.b.计算算c.c.溶化溶化d.d.称量称量e.e.灭菌菌A.abcdeA.abcdeB.ebdcaB.ebdcaC.bdcaeC.bdcaeD.bdceaD.bdceaK K2 2HPOHPO4 4NaClNaClH H2 2O O葡萄糖葡萄糖尿素尿素酚酚红琼脂糖脂糖0.12 g0.12 g0.12 g0.12 g15 mL15 mL0.025 g0.025 g2.0 g2.0 g0.25 mg0.25 mg0.5 g0.5 g(3)下表是一种培养基配方：K2HPO4NaClH2O葡萄该培养基属于培养基属于培养基培养基(多多选)()A.A.液体液体B.B.固体固体C.C.鉴定定D.D.选择E.E.天然天然使用使用该培养基的目的是培养基的目的是 。在培养基中加入在培养基中加入指示指示剂，可初步，可初步鉴定出定出该种种细菌能分解尿菌能分解尿素。素。(4)(4)在在进行分离分解尿素的行分离分解尿素的细菌菌实验时，A A同学从培养基上同学从培养基上筛选出大出大约150150个菌落，而其他同学只个菌落，而其他同学只选择出大出大约5050个菌落。个菌落。A A同学的同学的实验结果果产生的原因可能有生的原因可能有(多多选)()A.A.由于土由于土样不同不同B.B.由于培养基由于培养基污染染C.C.由于操作失由于操作失误D.D.没有没有设置置对照照该培养基属于培养基(多选)()【解析】【解析】(1)(1)图中的接种方法是划线法，该方法随着划线次数的增多，图中的接种方法是划线法，该方法随着划线次数的增多，线上的细菌密度逐渐减小，最后成为单个分布的细菌。线上的细菌密度逐渐减小，最后成为单个分布的细菌。(2)(2)接种前要对接种环进行