微生物检验质量控制课件

微生物检验的质量控制微生物检验的质量控制 广东省微生物研究所广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心广东省微生物分析检测中心20122012年年1111月月微生物检验的质量控制 广东省微生物研究所1前言前言 在实际工作中存在许多复杂因素影响微生物在实际工作中存在许多复杂因素影响微生物学检验，可能给检验结果带来偏差甚至错误，因学检验，可能给检验结果带来偏差甚至错误，因此必须对影响检验结果的诸多因素采取控制手段此必须对影响检验结果的诸多因素采取控制手段保证检验结果的正确性，不断完善微生物检验的保证检验结果的正确性，不断完善微生物检验的质量控制。质量控制。前言 2 主要内容主要内容1 1 检验人员检验人员 2 2 仪器、设备仪器、设备 3 3 检验培养基、试剂检验培养基、试剂 4 4 检验环境检验环境 5 5 采样采样 6 6 样品的接收和预处理样品的接收和预处理 7 7 检验质量检验质量 8 8 校验的执行校验的执行 9 9 参考菌株及其保存参考菌株及其保存 10 10 实验室内外部质量控制实验室内外部质量控制 11 11 检验报告及结果质量控制检验报告及结果质量控制 主要内容1 检验人员 31 1 检验人员检验人员（1 1）微生物检验不能完全依赖全自动鉴定仪器，）微生物检验不能完全依赖全自动鉴定仪器，检验工作中每一步骤均需要有高度的主观分析和检验工作中每一步骤均需要有高度的主观分析和判断能力，与个人的经验、技能和微生物检验基判断能力，与个人的经验、技能和微生物检验基础知识水平密切相关。础知识水平密切相关。（2 2）除要求微生物检验人员必须具备严肃认真）除要求微生物检验人员必须具备严肃认真的工作态度、精密细致的观察和操作习惯，注重的工作态度、精密细致的观察和操作习惯，注重个人卫生外，还必须熟练掌握微生物学检验技术。个人卫生外，还必须熟练掌握微生物学检验技术。1 检验人员（1）微生物检验不能完全依赖全自动鉴定仪器，检41 1 检验人员检验人员（3 3）检验人员应执行上岗前培训制度，上岗前）检验人员应执行上岗前培训制度，上岗前培训合格方能上岗操作，还要主动参加学习、培培训合格方能上岗操作，还要主动参加学习、培训、讲座，学习新技术，掌握微生物学检验方法、训、讲座，学习新技术，掌握微生物学检验方法、标准及相关法律法规；标准及相关法律法规；（4 4）参与编写测试程序及仪器操作程序，学习）参与编写测试程序及仪器操作程序，学习质量保证体系知识和计量学基本知识；质量保证体系知识和计量学基本知识；1 检验人员（3）检验人员应执行上岗前培训制度，上岗前培训51 1 检验人员检验人员（5 5）参加各类水平测试和盲样测试，提高检测）参加各类水平测试和盲样测试，提高检测水平和分析问题、解决问题的能力；水平和分析问题、解决问题的能力；（6 6）微生物学检验室负责人应定期对检验人员）微生物学检验室负责人应定期对检验人员进行专业知识和操作熟练程度的考核，提高检验进行专业知识和操作熟练程度的考核，提高检验人员的素质。人员的素质。1 检验人员（5）参加各类水平测试和盲样测试，提高检测水平62 2 仪器、设备仪器、设备 大型微生物检验室的主要仪器及设备包括：大型微生物检验室的主要仪器及设备包括：无菌室、微生物自动鉴定仪、微生物快速初筛无菌室、微生物自动鉴定仪、微生物快速初筛仪、显微镜、菌落计数器、高压灭菌器、干热灭仪、显微镜、菌落计数器、高压灭菌器、干热灭菌器、离心机、蒸馏设备、培养箱、厌氧箱、水菌器、离心机、蒸馏设备、培养箱、厌氧箱、水浴箱、冰箱、超净工作台、酶标仪、洗板机、浴箱、冰箱、超净工作台、酶标仪、洗板机、PCRPCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。仪、电泳仪、凝胶成像系统等。2 仪器、设备 大型微生物检验室的主要仪器及设备包括：72 2 仪器、设备仪器、设备 要求所有的仪器和设备均应按照生产厂家提要求所有的仪器和设备均应按照生产厂家提供的方法和有关规定正确使用。供的方法和有关规定正确使用。需要强制性定期检定的仪器和设备，经符合需要强制性定期检定的仪器和设备，经符合资历的计量部门校准合格后方可使用。资历的计量部门校准合格后方可使用。对于常用的贵重仪器和设备，在使用前应加对于常用的贵重仪器和设备，在使用前应加以检查，使用后要登记，要做到定期维护，以保以检查，使用后要登记，要做到定期维护，以保证仪器处于良好的工作状态。证仪器处于良好的工作状态。2 仪器、设备 要求所有的仪器和设备均应按照生产厂家82.1 2.1 高压灭菌器高压灭菌器（1 1）操作人员应了解蒸气灭菌的原理并遵守操）操作人员应了解蒸气灭菌的原理并遵守操作规则。作规则。（2 2）放入的灭菌物品不宜放得过挤。）放入的灭菌物品不宜放得过挤。（3 3）使用时，放入生物指示条或化学指示条。）使用时，放入生物指示条或化学指示条。（4 4）生物指标为嗜热脂肪芽胞杆菌的耐受性）生物指标为嗜热脂肪芽胞杆菌的耐受性（121121，1515minmin）。）。（5 5）灭菌后，再培养观察有无细菌生长）灭菌后，再培养观察有无细菌生长。（6 6）也可采用水银留点温度计进行校准。）也可采用水银留点温度计进行校准。2.1 高压灭菌器（1）操作人员应了解蒸气灭菌的原理并遵守操92.2 2.2 干热灭菌器干热灭菌器（1 1）应遵守操作规则，放入箱内灭菌的器皿）应遵守操作规则，放入箱内灭菌的器皿不宜放得过挤，器皿与内层底板不能直接接触。不宜放得过挤，器皿与内层底板不能直接接触。（2 2）灭菌完毕，不能立即开门取物，须关闭）灭菌完毕，不能立即开门取物，须关闭电源，待温度下降至电源，待温度下降至5050以下再开门取物。以下再开门取物。（3 3）带有纸包装的物品灭菌温度不能超过）带有纸包装的物品灭菌温度不能超过160160。2.2 干热灭菌器（1）应遵守操作规则，放入箱内灭菌的器皿不102.3 2.3 培养箱培养箱（1 1）箱内不应放入过热或过冷的物品，取放物品时，）箱内不应放入过热或过冷的物品，取放物品时，应随手关闭箱门，以维持恒温。应随手关闭箱门，以维持恒温。（2 2）如培养物不慎泼洒到箱内，应马上清洁，并采）如培养物不慎泼洒到箱内，应马上清洁，并采取必要的消毒措施。取必要的消毒措施。（3 3）培养物不宜与培养箱最底层直接接触。）培养物不宜与培养箱最底层直接接触。（4 4）必要时，可放入装水容器以维持箱内的湿度。）必要时，可放入装水容器以维持箱内的湿度。（5 5）每天记录温度及湿度的变化，观察培养箱内温）每天记录温度及湿度的变化，观察培养箱内温度与设定温度是否一致。在两次计量周期之间要进度与设定温度是否一致。在两次计量周期之间要进行至少一次内部校准。行至少一次内部校准。2.3 培养箱（1）箱内不应放入过热或过冷的物品，取放物品时112.5 2.5 显微镜显微镜按使用说明进行操作。按使用说明进行操作。使用油镜后先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用使用油镜后先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用沾上二甲苯的擦镜纸擦拭，最后用干净擦镜纸沾上二甲苯的擦镜纸擦拭，最后用干净擦镜纸擦干。（擦干。（建议使用无水乙醇建议使用无水乙醇+乙醚乙醚）注意防尘，保持清洁、干燥。注意防尘，保持清洁、干燥。2.5 显微镜按使用说明进行操作。122 2 仪器、设备仪器、设备 实验室需要使用的无菌器具应能正确实施灭实验室需要使用的无菌器具应能正确实施灭菌，无菌器具和器皿有明显标识，以便与非无菌菌，无菌器具和器皿有明显标识，以便与非无菌器具和器皿加以区别。器具和器皿加以区别。2 仪器、设备 实验室需要使用的无菌器具应能正确实施灭菌133 3 检验培养基、试剂检验培养基、试剂 3.13.1培养基培养基 微生物学检验所用干粉培养基，必须由专微生物学检验所用干粉培养基，必须由专业厂家生产，产品质量必须符合有关的质量标业厂家生产，产品质量必须符合有关的质量标准，保存也应符合要求，防止潮解、结块等。准，保存也应符合要求，防止潮解、结块等。干粉培养基易受潮变性，需要重视。干粉培养基易受潮变性，需要重视。一旦一旦变质，不得再使用。变质，不得再使用。3 检验培养基、试剂 3.1培养基143.13.1培养基培养基 为保证干粉培养基质量指标，在实际工作中为保证干粉培养基质量指标，在实际工作中应注意：应注意：（1 1）加强包装的密封性能；）加强包装的密封性能；（2 2）使用时尽量缩短开盖时间；）使用时尽量缩短开盖时间；（3 3）干粉培养基一般放在通风、干燥、避光的）干粉培养基一般放在通风、干燥、避光的环境中保存，对于易受潮的品种，启用后宜放入环境中保存，对于易受潮的品种，启用后宜放入干燥器中保存；干燥器中保存；（4 4）由于配制水分不同、启用次数或时间增加，）由于配制水分不同、启用次数或时间增加，干粉培养基的干粉培养基的pHpH值可能会有所变化，应随时略加值可能会有所变化，应随时略加调整。调整。3.1培养基 为保证干粉培养基质量指标，在实际工作中应注153.13.1培养基培养基 干粉培养基所要求的理化指标，可以从下干粉培养基所要求的理化指标，可以从下面几个方面进行初步检查：面几个方面进行初步检查：（1 1）干粉培养基应为疏松颗粒状或粉末状，颜）干粉培养基应为疏松颗粒状或粉末状，颜色正常、一致；色正常、一致；（2 2）溶解后清彻透明，无沉淀；）溶解后清彻透明，无沉淀；（3 3）4545时时pHpH值为值为7.27.2士士0.20.2；熔化温度；熔化温度7070左左右，凝固温度为右，凝固温度为35-4035-40；（4 4）水分含量符合标准。）水分含量符合标准。3.1培养基 干粉培养基所要求的理化指标，可以从下面几163.13.1培养基培养基 商品化培养基的平皿应对所用培养基做外观商品化培养基的平皿应对所用培养基做外观检查，如培养基是否开裂、平皿有无破碎、血平检查，如培养基是否开裂、平皿有无破碎、血平板有否溶血、有否冰冻、灌注是否均匀、有否过板有否溶血、有否冰冻、灌注是否均匀、有否过多的气泡，清晰度和有无污染也需要检查。多的气泡，清晰度和有无污染也需要检查。培养基平皿的制备商必须按照标准随产品附培养基平皿的制备商必须按照标准随产品附上书面鉴定资料，实验室应将此鉴定书保存一定上书面鉴定资料，实验室应将此鉴定书保存一定时期。时期。3.1培养基 商品化培养基的平皿应对所用培养基做外观检173.13.1培养基培养基 实验室自制培养基应有质量控制，包括：实验室自制培养基应有质量控制，包括：制备数量制备数量 制备日期制备日期 有效日期有效日期 制备者姓名制备者姓名还必须检查：还必须检查：培养基颜色培养基颜色 均匀度均匀度 厚度厚度 光洁度光洁度 溶血与否溶血与否 有否过多气泡有否过多气泡 是否污染是否污染 3.1培养基 实验室自制培养基应有质量控制，包括：183.1 3.1 培养基培养基 培养基的配制应严格按照标准规定的方法进培养基的配制应严格按照标准规定的方法进行操作，并做好配制记录。行操作，并做好配制记录。为保证培养基质量，在配制时应注意：为保证培养基质量，在配制时应注意：制备培养基必须在玻璃容器、搪瓷缸中进行，制备培养基必须在玻璃容器、搪瓷缸中进行，如用铜、铁等金属器皿，可能会对微生物生长有毒如用铜、铁等金属器皿，可能会对微生物生长有毒害作用。害作用。配制培养基时应按检验项目规定的配方添加，配制培养基时应按检验项目规定的配方添加，不得随意增减或更改培养基成分。不得随意增减或更改培养基成分。3.1 培养基 培养基的配制应严格按照标准规定的方法进193.1 3.1 培养基培养基 使用专用的角匙取药品，避免交叉污染。使用专用的角匙取药品，避免交叉污染。使用蒸馏水或去离子水配制，不得使用自来使用蒸馏水或去离子水配制，不得使用自来水，因其中含有氯等抗菌物质。水，因其中含有氯等抗菌物质。不同类型的微生物对不同类型的微生物对pHpH值的要求不同，配制值的要求不同，配制培养基时应测定培养基时应测定pHpH值，如测定结果与所要求的值，如测定结果与所要求的pHpH值不符，则用值不符，则用lmol/L NaOHlmol/L NaOH或或lmol/L HCllmol/L HCl溶液进行溶液进行调节。调节。3.1 培养基 使用专用的角匙取药品，避免交叉污染。203.1 3.1 培养基培养基 制备好的培养基应及时使用，使用不完的，制备好的培养基应及时使用，使用不完的，如无特殊需求，可室温或如无特殊需求，可室温或2-82-8冷藏保存。冷藏保存。如用塑料袋密封，保存期可延长，发生变如用塑料袋密封，保存期可延长，发生变质等被污染迹象或干裂现象的则不能再使用。质等被污染迹象或干裂现象的则不能再使用。3.1 培养基 制备好的培养基应及时使用，使用不完的，21表表1 1 培养基在培养基在2-82-8冷藏条件下保存的有效期冷藏条件下保存的有效期培养基种类培养基种类保存条件保存条件有效期有效期平板培养基平板培养基不装塑料袋不装塑料袋2周周塑料袋密封塑料袋密封8周周试管（棉塞）培养基试管（棉塞）培养基不装塑料袋不装塑料袋2周周-1个月个月塑料袋密封塑料袋密封2个月个月试管（螺旋盖）培养基试管（螺旋盖）培养基不装塑料袋不装塑料袋2个月个月塑料袋密封塑料袋密封4个月个月表1 培养基在2-8冷藏条件下保存的有效期培养基种类保存条223.13.1培养基培养基 每批自制培养基必须做无菌试验和规定的质每批自制培养基必须做无菌试验和规定的质控菌株测试，对各种不同培养基规定了专门的质控菌株测试，对各种不同培养基规定了专门的质控测试菌株。控测试菌株。无菌培养试验可将灭菌后的培养基放入无菌培养试验可将灭菌后的培养基放入3737的培养箱培养的培养箱培养24244848小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。3.1培养基 每批自制培养基必须做无菌试验和规定的质控233.1培养基 效果试验是指按不同的培养基接种相应的效果试验是指按不同的培养基接种相应的菌株，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血菌株，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血等特征，据此判断培养基是否符合要求。等特征，据此判断培养基是否符合要求。3.1培养基 效果试验是指按不同的培养基接种相应的菌株243.2 3.2 检验试剂及药品检验试剂及药品检验药品、试剂须在分析纯检验药品、试剂须在分析纯(AR)AR)级以上。级以上。在利用药品、试剂配制标准溶液、染色液、缓冲在利用药品、试剂配制标准溶液、染色液、缓冲液及其他试剂时应注意：液及其他试剂时应注意：(1)(1)按要求选取溶剂；按要求选取溶剂；(2)(2)用带塞的试剂瓶盛装；用带塞的试剂瓶盛装；(3)(3)易分解的试剂宜用棕色瓶；易分解的试剂宜用棕色瓶；(4)(4)挥发性的试剂其瓶口应予密封；挥发性的试剂其瓶口应予密封；(5)(5)如发现溶液有变质现象，应停止使用；如发现溶液有变质现象，应停止使用；(6)(6)标准溶液应定时标定。标准溶液应定时标定。3.2 检验试剂及药品检验药品、试剂须在分析纯(AR)级以上253.2 3.2 检验试剂及药品检验试剂及药品 实验室内保存的试剂应定期进行清点，过实验室内保存的试剂应定期进行清点，过期或变质的试剂应弃去；期或变质的试剂应弃去；注意试剂在保存条件下的使用有效期以及最注意试剂在保存条件下的使用有效期以及最佳保存方式。佳保存方式。3.2 检验试剂及药品 实验室内保存的试剂应定期进行清263.3 3.3 染色液染色液 染色液配制后，必须选用适当的标准菌株作染色液配制后，必须选用适当的标准菌株作阳性及阴性对照来鉴定染色液的性能，如革兰氏阳性及阴性对照来鉴定染色液的性能，如革兰氏染色选用枯草杆菌、葡萄球菌和大肠杆菌作为对染色选用枯草杆菌、葡萄球菌和大肠杆菌作为对照，鞭毛染色液采用普通变形杆菌和福氏志贺氏照，鞭毛染色液采用普通变形杆菌和福氏志贺氏菌作为对照。菌作为对照。对经验不足者，每次染色时均应作对照染色。对经验不足者，每次染色时均应作对照染色。3.3 染色液 染色液配制后，必须选用适当的标准菌株作273.43.4诊断血清诊断血清 沙门氏菌属、志贺氏菌属、致病性大肠埃希氏菌等诊断沙门氏菌属、志贺氏菌属、致病性大肠埃希氏菌等诊断血清，使用时应注意有效期及效价。血清，使用时应注意有效期及效价。每月用相应的菌株检查其有效性，过期血清和变混浊的每月用相应的菌株检查其有效性，过期血清和变混浊的血清不应继续使用。血清不应继续使用。诊断血清一般放普通冰箱内保存，使用时应以最短的时诊断血清一般放普通冰箱内保存，使用时应以最短的时间暴露于空气中。间暴露于空气中。最好备有两个生物制品研究所生产的诊断血清，以便互最好备有两个生物制品研究所生产的诊断血清，以便互相对照，检查其可靠性。相对照，检查其可靠性。3.4诊断血清 沙门氏菌属、志贺氏菌属、致病性大肠埃希284 4 检验环境检验环境 微生物学检验均在检验室进行，既不能让微生微生物学检验均在检验室进行，既不能让微生物散布出去，又必须使样品不再受污染，更不能允物散布出去，又必须使样品不再受污染，更不能允许病原菌感染检验人员，为此，检验室的环境要求许病原菌感染检验人员，为此，检验室的环境要求和卫生管理制度非常重要。和卫生管理制度非常重要。实验室总体布局和各部位的安排应减少潜在的实验室总体布局和各部位的安排应减少潜在的对样本的污染和对人员的危害。对样本的污染和对人员的危害。4 检验环境 微生物学检验均在检验室进行，既不能让微294 4 检验环境检验环境 微生物学检验室要求内外环境整洁，布局合理，操作区微生物学检验室要求内外环境整洁，布局合理，操作区域与办公区域分开。域与办公区域分开。洗涤室、培养室、消毒间、无菌室应分开，设有专室。洗涤室、培养室、消毒间、无菌室应分开，设有专室。无菌室要设有套间或缓冲间，最好设推拉门，以防空气无菌室要设有套间或缓冲间，最好设推拉门，以防空气振荡过大。振荡过大。微生物检验室应备有自动或脚踩式洗手池和固定的消毒微生物检验室应备有自动或脚踩式洗手池和固定的消毒设施。设施。4 检验环境 微生物学检验室要求内外环境整洁，布局合理304 4 检验环境检验环境 微生物检验室应制定合理、完善的卫生管理微生物检验室应制定合理、完善的卫生管理制度，工作人员必须每天坚持做好环境卫生工作，制度，工作人员必须每天坚持做好环境卫生工作，防止灰尘飞扬，定期对操作环境进行消毒。防止灰尘飞扬，定期对操作环境进行消毒。对经培养后的培养基、培养液、用过的检样对经培养后的培养基、培养液、用过的检样及其他废弃物，应投入指定的容器内，经无害化及其他废弃物，应投入指定的容器内，经无害化处理后方可排放，禁止乱扔乱放，以防某些病原处理后方可排放，禁止乱扔乱放，以防某些病原微生物散布。微生物散布。4 检验环境 微生物检验室应制定合理、完善的卫生管理制314 4 检验环境检验环境 对需在无菌条件下工作的区域应以明确标识并能有效对需在无菌条件下工作的区域应以明确标识并能有效地控制、监测和记录；地控制、监测和记录；检验人员应待无菌室过滤净化装置开机检验人员应待无菌室过滤净化装置开机0.50.51 1h h后，再后，再进入无菌室工作；进入无菌室工作；每天记录环境检测报告，并经常进行空气落菌实验：每天记录环境检测报告，并经常进行空气落菌实验：空气落菌以营养琼脂开上皿空气落菌以营养琼脂开上皿1515minmin后盖上盖子，后盖上盖子，361361培培养养4848h h计数；计数；定期对无菌室进行室内环境消毒，空气消毒可采用甲定期对无菌室进行室内环境消毒，空气消毒可采用甲醛熏蒸法，甲醛与高锰酸钾比例醛熏蒸法，甲醛与高锰酸钾比例2:12:1。4 检验环境 对需在无菌条件下工作的区域应以明确标识并325 5 采样采样（1 1）采样工具和容器宜选用耐消毒灭菌的材料，如）采样工具和容器宜选用耐消毒灭菌的材料，如玻璃、陶瓷、搪瓷、铝、不锈钢等，使用之前应进玻璃、陶瓷、搪瓷、铝、不锈钢等，使用之前应进行认真清洗、干燥和相应的灭菌处理。采样工具和行认真清洗、干燥和相应的灭菌处理。采样工具和容器不能用消毒剂消毒，样品中也不得加入防腐剂，容器不能用消毒剂消毒，样品中也不得加入防腐剂，以免影响检验结果的正确性。以免影响检验结果的正确性。（2 2）在严格无菌操作的条件下，按国家规定的样品）在严格无菌操作的条件下，按国家规定的样品采集标准均匀而准确地取样，并及时封口，使样品采集标准均匀而准确地取样，并及时封口，使样品具有准确性和代表性。具有准确性和代表性。5 采样（1）采样工具和容器宜选用耐消毒灭菌的材料，如玻璃335 5 采样采样（3 3）每件样品封口后，贴上标签，做好记录）每件样品封口后，贴上标签，做好记录(如如样品名称、采样地点、时间、数量、储藏情况、样品名称、采样地点、时间、数量、储藏情况、采集或送检单位及姓名、采样现场温度、湿度及采集或送检单位及姓名、采样现场温度、湿度及卫生状况等卫生状况等)。采集后的样品，一般可保存在。采集后的样品，一般可保存在2-2-88的环境中，如果样品是冷冻食品，应保持在冷的环境中，如果样品是冷冻食品，应保持在冷冻状态，并及时送检。冻状态，并及时送检。（4 4）采样数量不能少于全部检验需要量的）采样数量不能少于全部检验需要量的3 3倍，倍，以供检验、复检、备查。以供检验、复检、备查。5 采样（3）每件样品封口后，贴上标签，做好记录(如样品名346 6 样品的接收和预处理样品的接收和预处理 样品送达实验室时，应检查样品标记是否与样品送达实验室时，应检查样品标记是否与样品相符，样品包装状况是否正常。样品相符，样品包装状况是否正常。若存在下述情况，应考虑拒收样品：若存在下述情况，应考虑拒收样品：（1 1）抽样后样品送达实验室的时间太迟，）抽样后样品送达实验室的时间太迟，使其不能在规定的时间内进行检验；使其不能在规定的时间内进行检验；（2 2）样品温度太高；）样品温度太高；（3 3）在转运中样品遭到破损或受到污染。）在转运中样品遭到破损或受到污染。6 样品的接收和预处理 样品送达实验室时，应检查样品356 6 样品的接收和预处理样品的接收和预处理 若对这些样品进行分析，应将情况记录并若对这些样品进行分析，应将情况记录并在分析报告中加以说明。在分析报告中加以说明。检验前，冷冻食品应在最高温度为检验前，冷冻食品应在最高温度为44下下解冻，不超过解冻，不超过1818h h；较小、易解冻的样品可放置于最高温度为较小、易解冻的样品可放置于最高温度为3737的恒温箱内最长达的恒温箱内最长达15 15 minmin。6 样品的接收和预处理 若对这些样品进行分析，应将情366 6 样品的接收和预处理样品的接收和预处理 微生物学检验室在收到样品后，必须及时微生物学检验室在收到样品后，必须及时准备条件、组织力量进行检验。准备条件、组织力量进行检验。送检的样品，一般需保持在送检的样品，一般需保持在2 288的环境的环境中，对于冷冻食品应保持在冷冻状态，直到检中，对于冷冻食品应保持在冷冻状态，直到检验为止。验为止。6 样品的接收和预处理 微生物学检验室在收到样品后，376 6 样品的接收和预处理样品的接收和预处理 冻藏的样品应尽快放在冷藏的温度下解冻，冻藏的样品应尽快放在冷藏的温度下解冻，亦可放在适宜温度亦可放在适宜温度(37)(37)下短时间下短时间(15(15min)min)使其使其解冻，但温度必须较低，以防止病原菌死亡。解冻，但温度必须较低，以防止病原菌死亡。冻结样品化冻时，必须小心放置于细菌生长冻结样品化冻时，必须小心放置于细菌生长温度之下以免使细菌数量增加。从容器中取出样温度之下以免使细菌数量增加。从容器中取出样品、称取样品应注意无菌操作。品、称取样品应注意无菌操作。6 样品的接收和预处理 冻藏的样品应尽快放在冷藏的温387 7 检验质量检验质量 除按国家标准方法对所需检验项目进行检除按国家标准方法对所需检验项目进行检测外，在实际工作中还应注意以下几个方面，测外，在实际工作中还应注意以下几个方面，否则会影响检验结果的准确性：否则会影响检验结果的准确性：7 检验质量 除按国家标准方法对所需检验项目进行检测397 7 检验质量检验质量（1 1）在定量检验时用）在定量检验时用重量法重量法还是用还是用体积法体积法，检验，检验结果会有误差，因为比重不等于结果会有误差，因为比重不等于1 1的样品，的样品，1 1mLmL和和1 1g g的检验结果绝不会相等。的检验结果绝不会相等。一般固态的样品宜用重量法，液体样品宜用一般固态的样品宜用重量法，液体样品宜用体积法。体积法。但对于粘性液体但对于粘性液体(如酸牛奶如酸牛奶)，如用体积法，如用体积法，会粘附一定量的样品在吸管上，因此此类样品最会粘附一定量的样品在吸管上，因此此类样品最好用重量法。好用重量法。7 检验质量（1）在定量检验时用重量法还是用体积法，检验结407 7 检验质量检验质量（2 2）如检样需用无菌水或无菌生理盐水稀释，）如检样需用无菌水或无菌生理盐水稀释，则最好用匀质器或组织捣碎机，以则最好用匀质器或组织捣碎机，以800080001000010000转转/minmin的转速处理的转速处理1 1minmin，制成均匀的菌悬液。制成均匀的菌悬液。7 检验质量（2）如检样需用无菌水或无菌生理盐水稀释，则最好417 7 检验质量检验质量（3 3）样品稀释时，常会滞留少量样品在吸管）样品稀释时，常会滞留少量样品在吸管内外，应多加注意。内外，应多加注意。吸管插入样品或稀释液中应深浅一致，否吸管插入样品或稀释液中应深浅一致，否则会影响检验结果；则会影响检验结果；吸入液体后，应沿管壁慢慢注入递增的稀吸入液体后，应沿管壁慢慢注入递增的稀释液中，特别注意此时吸管尖端切不可碰到稀释液中，特别注意此时吸管尖端切不可碰到稀释液中。释液中。7 检验质量（3）样品稀释时，常会滞留少量样品在吸管内外，应427 7 检验质量检验质量（4 4）在培养基倾注入检样、菌悬液时，注意培养）在培养基倾注入检样、菌悬液时，注意培养基温度宜在基温度宜在45-5045-50之间，并使培养基与检样、菌之间，并使培养基与检样、菌悬液充分混合。悬液充分混合。（5 5）微生物培养时，应根据要求选择正确的培养）微生物培养时，应根据要求选择正确的培养温度和时间。温度和时间。7 检验质量（4）在培养基倾注入检样、菌悬液时，注意培养基温437 7 检验质量检验质量（6 6）应用无菌水或无菌生理盐水作空白对照，）应用无菌水或无菌生理盐水作空白对照，如果在空白对照中检出细菌，则可认为培养基如果在空白对照中检出细菌，则可认为培养基质量存在问题或在操作过程中存在污染情况。质量存在问题或在操作过程中存在污染情况。另外，采用标准菌种作阳性对照，观察培另外，采用标准菌种作阳性对照，观察培养基的质量情况。养基的质量情况。7 检验质量（6）应用无菌水或无菌生理盐水作空白对照，如果447 7 检验质量检验质量（7 7）整个检验过程应严格遵守无菌操作。）整个检验过程应严格遵守无菌操作。（8 8）及时检查结果，做好原始数据记录。）及时检查结果，做好原始数据记录。7 检验质量（7）整个检验过程应严格遵守无菌操作。458 8 校验的执行校验的执行 仪器设备档案应包含以下内容仪器设备档案应包含以下内容:（1 1）仪器名称、编号、启用日期。）仪器名称、编号、启用日期。（2 2）常规校验的方法和校验周期。）常规校验的方法和校验周期。（3 3）可以接受的操作范围。）可以接受的操作范围。（4 4）仪器功能上的缺陷，如有克服缺陷）仪器功能上的缺陷，如有克服缺陷 的步骤应详细列出。的步骤应详细列出。（5 5）常规维修的日期）常规维修的日期(按制造商的推荐意按制造商的推荐意 见见)。8 校验的执行 仪器设备档案应包含以下内容:468 8 校验的执行校验的执行 仪器只要不报废，维修记录均应保存。仪器只要不报废，维修记录均应保存。实验室应预先制定仪器校验计划，并按计划实验室应预先制定仪器校验计划，并按计划对需要强制性定期检定的仪器和设备经符合资历对需要强制性定期检定的仪器和设备经符合资历计量部门校验，根据校验结果决定对仪器设备继计量部门校验，根据校验结果决定对仪器设备继续使用、降级使用或停止使用。续使用、降级使用或停止使用。8 校验的执行 仪器只要不报废，维修记录均应保存。478 8 校验的执行校验的执行 实验室可根据需要对部分仪器进行自校以实验室可根据需要对部分仪器进行自校以节约成本，但用于自校的计量工具必须经过计节约成本，但用于自校的计量工具必须经过计量部门校准方可使用。量部门校准方可使用。8 校验的执行 实验室可根据需要对部分仪器进行自校以节约489 9 标准菌株及其保存标准菌株及其保存 标准菌株可以从国际菌种保藏中心标准菌株可以从国际菌种保藏中心（ATCCATCC）、国内具有资质菌种保藏中心（、国内具有资质菌种保藏中心（CMCCCMCC、ASAS、MIGMIG等等）等等）或室间质控活动中获得，准确鉴或室间质控活动中获得，准确鉴定过的分离株也可使用。定过的分离株也可使用。实验室要准备好足够种类和数量的标准菌实验室要准备好足够种类和数量的标准菌株，满足培养基、试剂盒和试剂质量测试的需株，满足培养基、试剂盒和试剂质量测试的需要。要。9 标准菌株及其保存 标准菌株可以从国际菌种保藏中心49标准菌株的保存标准菌株的保存 保保存存菌菌株株要要定定期期传传代代，注注意意无无菌菌操操作作，使使菌菌株不污染、不死亡、不丢失；株不污染、不死亡、不丢失；应应设设专专人人妥妥善善保保管管，菌菌株株保保存存箱箱应应加加锁锁放放置置适适宜环境，取出使用应登记；宜环境，取出使用应登记；标准菌株的保存 保存菌株要定期传代，注意无菌操作，使菌50标准菌株的保存标准菌株的保存 保保存存菌菌株株应应建建册册登登记记，基基本本项项目目应应包包括括菌菌种种名名称称、分分离离来来源源、分分离离日日期期、传传代代日日期期、保保存方法、主要性状、保管者、领用者等；存方法、主要性状、保管者、领用者等；对对保保存存菌菌种种，经经传传代代数数次次后后应应进进行行一一次次系系统统生生化化反反应应、血血清清学学特特性性等等生生物物学学性性状状观观察察，检查其是否发生变异。检查其是否发生变异。标准菌株的保存 保存菌株应建册登记，基本项目应包括菌种51标准菌株的保存标准菌株的保存常见的参考菌株保存方法如下：常见的参考菌株保存方法如下：标准菌株的保存常见的参考菌株保存方法如下：52 细菌细菌(1)(1)营养要求不高的需氧细菌在胰胨大豆琼脂斜面上营养要求不高的需氧细菌在胰胨大豆琼脂斜面上能存活能存活1 1年。年。(2)(2)需氧或厌氧菌的长期储存需冷冻干燥，或存放在需氧或厌氧菌的长期储存需冷冻干燥，或存放在-7070冰箱。冰箱。(3)(3)营养要求不高的冻干菌种每隔营养要求不高的冻干菌种每隔5 5年要解冻分离重新年要解冻分离重新冻干，好氧菌每隔冻干，好氧菌每隔3 3年重新冻干。年重新冻干。(4)(4)细菌低温冰冻保存时可悬浮于消毒去脂牛奶、含细菌低温冰冻保存时可悬浮于消毒去脂牛奶、含15%15%甘油的胰胨大豆肉汤或无菌马血中。甘油的胰胨大豆肉汤或无菌马血中。细菌(1)营养要求不高的需氧细菌在胰胨大豆琼脂斜面上能存53 真菌真菌(1)(1)酵母菌按营养要求不高的细菌同样处理。酵母菌按营养要求不高的细菌同样处理。(2)(2)霉菌在马铃薯葡萄糖琼脂（霉菌在马铃薯葡萄糖琼脂（PDAPDA）斜面上，于）斜面上，于44储存可达储存可达6 6个月，斜面上覆盖消毒石蜡油可个月，斜面上覆盖消毒石蜡油可在室温下较长时间存放。在室温下较长时间存放。真菌(1)酵母菌按营养要求不高的细菌同样处理。5410 10 实验室内外部质量控制实验室内外部质量控制 10.1 10.1 内部质量控制内部质量控制 为保证实验室连续评价结果的可靠性和精密度，为保证实验室连续评价结果的可靠性和精密度，必须对所用方法的重复性及再现性定期测定。必须对所用方法的重复性及再现性定期测定。对于不同的控制系统，实验室必须建立限值，对于不同的控制系统，实验室必须建立限值，超过限值应采取纠偏措施。超过限值应采取纠偏措施。10 实验室内外部质量控制 10.1 内部质量控制5510.1 10.1 内部质量控制内部质量控制实践中内部质量控制可包括：实践中内部质量控制可包括：（1 1）系统地使用一式双份的菌落计数测定；）系统地使用一式双份的菌落计数测定；（2 2）由同一检验人员和几个检验人员作平）由同一检验人员和几个检验人员作平 行样；行样；（3 3）定期或不定期进行盲样测试。）定期或不定期进行盲样测试。（实验室内部比对试验）（实验室内部比对试验）10.1 内部质量控制实践中内部质量控制可包括：5610.210.2外部质量控制外部质量控制 实验室应参加外部的质量控制活动，对其开实验室应参加外部的质量控制活动，对其开展的每一项检测均应参加相应的室间质量控制。展的每一项检测均应参加相应的室间质量控制。（实验室间比对）（实验室间比对）对有关实验室或管理机构发出的测试样品应对有关实验室或管理机构发出的测试样品应严格地当作普通样品一样处理，这样一种方法严格地当作普通样品一样处理，这样一种方法有助于实验室每天测试的准确性和重复性，是有助于实验室每天测试的准确性和重复性，是对实验室所用的方法、试剂、设备和人员能力对实验室所用的方法、试剂、设备和人员能力的测试。的测试。实验室能力验证实验室能力验证 （CNASCNAS、CNCACNCA、CMACMA等组织的比对试验）等组织的比对试验）10.2外部质量控制 实验室应参加外部的质量控制活动，对其5710 10 实验室内外部质量控制实验室内外部质量控制 从室间样品测试中的错误可以发现实验室的从室间样品测试中的错误可以发现实验室的不足之处，对工作人员进行培训、教育，可以提不足之处，对工作人员进行培训、教育，可以提高实验室的检测质量。高实验室的检测质量。对反馈的室间测定评级中存在的问题应当召集对反馈的室间测定评级中存在的问题应当召集全体人员讨论，改进措施全体人员讨论，改进措施(包括方法的改变、员工包括方法的改变、员工的改变、员工的再训练、培养基和试剂购买来源的改变、员工的再训练、培养基和试剂购买来源的更换等的更换等)应当记录在案。应当记录在案。10 实验室内外部质量控制 从室间样品测试中的错误可以5810 10 实验室内外部质量控制实验室内外部质量控制 某些项目缺少室间质量控制，实验室可以设某些项目缺少室间质量控制，实验室可以设置室内质量控制，每半年自行评估一次。置室内质量控制，每半年自行评估一次。经常参加微生物实验室室间质控活动，有助经常参加微生物实验室室间质控活动，有助于加强检测人员的基本功训练，增强样品检测过于加强检测人员的基本功训练，增强样品检测过程中程中“量量”的概念。的概念。实验室间的质控可在国内外范围进行，有能实验室间的质控可在国内外范围进行，有能力的实验室应力争参加国际间质控活动，以树立力的实验室应力争参加国际间质控活动，以树立良好的检验信誉。良好的检验信誉。10 实验室内外部质量控制 某些项目缺少室间质量控制，5911 11 检验报告及结果质量控制检验报告及结果质量控制 对原始数据进行整理，用回归分析法和方差对原始数据进行整理，用回归分析法和方差分析法进行处理，去除不必要的误差，获得准确分析法进行处理，去除不必要的误差，获得准确的数据。的数据。编制微生物学检验报告可编制微生物学检验报告可考虑引入不确定度考虑引入不确定度概念。概念。11 检验报告及结果质量控制 对原始数据进行整理，用回6011 11 检验报告及结果质量控制检验报告及结果质量控制原始数据要求：原始数据要求：主题明确主题明确符合检样要求和分析目的；符合检样要求和分析目的；内容准确内容准确定性判断和定量计算应准确定性判断和定量计算应准确 无误；无误；文字简明文字简明文字、表格简洁明了，表达文字、表格简洁明了，表达 适当；适当；书写清楚书写清楚菌类名称菌类名称(学名学名)、有关数字及其它、有关数字及其它 文字说明必须书写清楚。文字说明必须书写清楚。11 检验报告及结果质量控制原始数据要求：6111 11 检验报告及结果质量控制检验报告及结果质量控制 应注意检验结果应与卫生标准的表示方法应注意检验结果应与卫生标准的表示方法一致，定量检测以一致，定量检测以N10N10n n表示，不宜用基数字表示，不宜用基数字表示，表示，N N为两位有效数字；为两位有效数字；对定性检测的报告，一定要用汉字对定性检测的报告，一定要用汉字“阳性阳性”或或“阴性阴性”表示。表示。11 检验报告及结果质量控制 应注意检验结果应与卫生标6211 11 检验报告及结果质量控制检验报告及结果质量控制 上述的微生物学检验报告，必须经过规定的上述的微生物学检验报告，必须经过规定的手续进行复查，并对照各类标准对微生物学质量手续进行复查，并对照各类标准对微生物学质量进行全面准确的评价和作出合理的解释。进行全面准确的评价和作出合理的解释。有关人员签字后，加盖检验单位印章，以示有关人员签字后，加盖检验单位印章，以示生效。这样，才能使检验结果既有法律依据又有生效。这样，才能使检验结果既有法律依据又有学术依据。学术依据。11 检验报告及结果质量控制 上述的微生物学检验报告，63结语结语 微生物检验的质量控制比较复杂，目前尚微生物检验的质量控制比较复杂，目前尚无统一规范，国内各实验室条件参差不齐，开无统一规范，国内各实验室条件参差不齐，开展此项工作任重道远。展此项工作任重道远。微生物检验的质量控制要日臻完善，有待微生物检验的质量控制要日臻完善，有待广大微生物检验人员共同努力。广大微生物检验人员共同努力。结语 微生物检验的质量控制比较复杂，目前尚无统一规范64谢谢！65