人类辅助生殖技术应用概述课件

人类辅助生殖技术应用概述人类辅助生殖技术应用概述人类辅助生殖技术应用概述人类辅助生殖人工授精夫精人工授精赠精人工授精常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）常规体外受精单精子卵胞质内注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）射出精睾丸/附睾精植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnsosi,PGD）2020/11/32人工授精人类辅助生殖技术2020/11/32适应证男方因素宫颈因素免疫因素女方排卵障碍不明原因性不孕步骤临床妊娠率临床妊娠率10-15%10-15%2020/11/33适应证夫精人工授精临床妊娠率10-15%2020/11/33诱发排卵诱发排卵有排卵障碍的情况下有排卵障碍的情况下以诱发单个卵泡或少数卵泡的发育为目的以诱发单个卵泡或少数卵泡的发育为目的超排卵超排卵在可控制的范围内诱发多卵泡发育和成熟在可控制的范围内诱发多卵泡发育和成熟为为ARTART奠定基础奠定基础治疗的对象很多本身有正常的排卵功能治疗的对象很多本身有正常的排卵功能2020/11/34中山大学附属第一医院促排卵治疗诱发排卵2020/11/34中山大学附属第一医院授精时间更精确授精时间更精确纠正排卵障碍纠正排卵障碍提供更多可用的卵子提供更多可用的卵子2020/11/35中山大学附属第一医院IUI中促排卵的作用授精时间更精确2020/11/35中山大适应证输卵管盆腔因素子宫内膜异位症排卵障碍经促排卵治疗无效严重少弱畸精症无精症反复IUI失败免疫性不孕2020/11/36适应证常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertil步骤药物促排卵经阴道穿刺取卵体外授精胚胎培养胚胎移植胚胎冷冻新鲜周期失败后解冻胚胎移植2020/11/37步骤常规体外受精-胚胎移植in vitro fertiliGnRHGnRH激动剂：达必佳，达菲林激动剂：达必佳，达菲林GnRHGnRH拮抗剂：加尼瑞克，思则凯拮抗剂：加尼瑞克，思则凯GnGn：重组重组FSHFSH：果纳芬，普丽康：果纳芬，普丽康尿源性尿源性FSHFSH：丽申宝，福特蒙：丽申宝，福特蒙尿源性尿源性FSHFSH和和LHLH：贺美奇，：贺美奇，HMGHMG2020/11/38GnRH激动剂：达必佳，达菲林主要药物2020/11/38GnRH-a 0.1mg qd月经第二十天月经第二十天黄体中期黄体中期GnRH-a 0.05mg qdGn14-21天天垂体达降垂体达降调节标准调节标准主主导导卵卵泡泡达达18mm时时注注射射HCG，36hr后取卵后取卵2020/11/39促排卵方案-短效长方案GnRH-a 0.1mg qd月经第二月经第二十天黄体中期月经第二十天黄体中期GnRH-a 1.3mg单次注射单次注射Gn14-21天天垂体达降垂体达降调节标准调节标准主主导导卵卵泡泡达达18mm时时注注射射HCG，36hr后取卵后取卵2020/11/310促排卵方案-长效长方案月经第二十天黄体中期Gn14-21天垂Gn主主导导卵卵泡泡达达18mm时时注注射射HCG，36hr后取卵后取卵月经第月经第2-3天天启动启动促排促排5-6天加拮抗剂天加拮抗剂2020/11/311促排卵方案-拮抗剂方案Gn主导卵泡达18mm时注射HCG，3 穿刺并发症穿刺并发症 血栓栓塞血栓栓塞 妊娠相关并发症妊娠相关并发症 其它风险其它风险2020/11/312ART临床治疗风险 穿刺并发症2020/11/312严重并发症（严重并发症（0.5%-1.5%0.5%-1.5%）阴道出血阴道出血100ml 0.8%100ml 0.8%盆腔感染盆腔感染 0.6%0.6%盆腔脓肿盆腔脓肿卵巢扭转卵巢扭转盆腔出血盆腔出血卵巢过度刺卵巢过度刺激综合征激综合征2020/11/313经阴道穿刺取卵术并发症严重并发症（0.5%-1.5%）卵巢过非常脆非常脆容易撕裂容易撕裂通过测定通过测定HbHb和和HctHct的变化，推测通常取卵术的变化，推测通常取卵术后平均出血量后平均出血量232232130 mL避免在卵巢内横向摆动避免在卵巢内横向摆动2020/11/314取卵术后卵巢改变非常脆避免在卵巢内横向摆动2020/11/3 -促排卵促排卵促排卵促排卵最严重的医源性并发症最严重的医源性并发症 -正常妊娠中罕见正常妊娠中罕见正常妊娠中罕见正常妊娠中罕见 *发生率发生率发生率发生率:-轻度：轻度：轻度：轻度：8 23%8 23%8 23%8 23%-重度重度重度重度：3.5-8%3.5-8%COH -COH -轻中度：轻中度：轻中度：轻中度：7.3%7.3%7.3%7.3%-重度：重度：重度：重度：4.2%4.2%2020/11/315卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimul体液外渗体液外渗毛细血管毛细血管通透性增加通透性增加胸水、腹水、心包胸水、腹水、心包积液、全身水肿积液、全身水肿低血容量低血容量血液浓缩血液浓缩高凝状态高凝状态肾灌注减少肾灌注减少少尿、无尿少尿、无尿电解质紊乱电解质紊乱血栓形成血栓形成氮质血症氮质血症腹胀、恶心、呕吐腹胀、恶心、呕吐咳嗽、气促咳嗽、气促2020/11/316病理及临床表现体液外渗毛细血管胸水、腹水、心包低血容量血液浓临床表现临床表现卵巢体积显著增大卵巢体积显著增大血液浓缩，腹腔积液，胸腔积液血液浓缩，腹腔积液，胸腔积液少尿少尿电解质紊乱电解质紊乱血栓形成、血栓形成、ARDSARDS及多器官功能衰竭及多器官功能衰竭 2020/11/317卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimul分类分类卵巢大小卵巢大小症状症状轻度轻度5-10cm1级：腹胀不适级：腹胀不适 2级：级：1级症状级症状+恶心、呕吐及恶心、呕吐及/或腹泻或腹泻 中度中度10cm3级：级：2级症状级症状+超声确定腹水超声确定腹水4级：级：3级症状级症状+腹水、胸水的腹水、胸水的临床表现和呼吸困难临床表现和呼吸困难 重度重度12cm5级：级：4级症状级症状+血液浓缩，血血液浓缩，血粘度增加、低血容量，肾灌注粘度增加、低血容量，肾灌注减少及少尿减少及少尿 2020/11/318OHSS分度分类卵巢大小症状轻度5-10cm1级：腹胀不适 根据根据OHSSOHSS发生的时间，又分为早发型发生的时间，又分为早发型OHSSOHSS和晚发型和晚发型OHSSOHSS早发型发生在早发型发生在HCGHCG后后3 37 7天，其发生与卵巢对促性腺激素天，其发生与卵巢对促性腺激素的反应性有关，并且被外源性的反应性有关，并且被外源性HCGHCG激发激发晚发型晚发型HCGHCG后后12121717天，多伴有多胎妊娠，系内源性天，多伴有多胎妊娠，系内源性HCGHCG所所致致晚发型晚发型OHSSOHSS程度往往比早发型严重程度往往比早发型严重 2020/11/319OHSS分度根据OHSS发生的时间，又分为早发型OHSS和晚2020/11/320体外授精-胚胎移植的实验室步骤2020/11/320实验室仪器设备实验室仪器设备实验室质控实验室质控体外授精体外授精胚胎培养胚胎培养胚胎移植胚胎移植胚胎冷冻胚胎冷冻胚胎解冻胚胎解冻2020/11/321实验室仪器设备体外授精-胚胎移植的实验室步骤2020/11/A、显微操作系统B、程序冷冻仪及液氮罐C、CO2浓度测试仪和温度测试仪D、电子天平，超纯水仪和渗透压仪E、冰箱F、空气净化设备G、CO2和N2，混合气体气瓶2020/11/322A、显微操作系统实验室的仪器和设备2020/11/3221、显微镜A、相差显微镜B、体视镜C、倒置显微镜D、荧光显微镜2020/11/3231、显微镜实验室的仪器和设备2020/11/323IVF工作站2020/11/324IVF工作站实验室的仪器和设备2020/11/324CO2培养箱：ThermoK-system G-185Cook MINC Benchtop Incubator2020/11/325CO2培养箱：实验室的仪器和设备ThermoK-system1、质量控制：温度：233 湿度：30 60%气压：10Pa尘埃：百级（配子操作区），万级（胚胎实验室），十万级（更衣室，取精室）可挥发有机物（VOC）：0.5ppm振动，光照及噪音：2020/11/3261、质量控制：胚胎培养实验室的质量控制和管理2020/11/2、管理：A、按功能和清洁度分区B、实验室禁止吃，喝，抽烟以及使用化妆品C、培养箱和温台的监测D、冰箱的监测E、液氮罐的监测2020/11/3272、管理：胚胎培养环境的质量控制和管理2020/11/327实验室禁止使用酒精等可挥发性有机物和紫外照射可用蒸馏水擦拭台面可用专用洗涤剂擦拭可能会被污染的台面或者区域可使用吸尘器吸走灰尘培养箱的清洁和消毒2020/11/328实验室禁止使用酒精等可挥发性有机物和紫外照射实验室的清洁201、温度和湿度：37.00.1，90%2、pH：7.1 pHi 7.2，7.2 pHe 7.43、气体：CO2和O24、渗透压：270 290mOsm/kg2020/11/3291、温度和湿度：37.00.1，90%胚胎培养系统20培养基的基本组成水：99%无机盐：维持培养基的渗透压和酸碱度碳水化合物：提供胚胎发育的能量氨基酸：促进胚胎体内外发育维生素：调控细胞代谢激素和生长因子：促进胚胎发育大分子物质：维持胶体渗透压，中和毒素抗氧化剂：减少氧自由基对胚胎的损伤螯合剂：螯合重金属离子抗生素：防止污染2020/11/330培养基的基本组成胚胎培养系统2020/11/330培养液配制和平衡2020/11/331培养液配制和平衡胚胎培养系统2020/11/3312020/11/3322020/11/332单气培养：CO2(5-6%)，O2(21%)和N2(74%)三气培养：CO2(5-6%)，O2(5%)和N2(90%)优势：更接近生理状态（2-8%O2）2020/11/333单气培养：CO2(5-6%)，O2(21%)和N2(74%1、精子的形态结构精子形态精子形态精子变态示意图精子变态示意图2020/11/3341、精子的形态结构精子和卵子精子形态精子变态示意图2020/卵母细胞颗粒细胞复合体卵母细胞颗粒细胞复合体GV 期期MI 期期MII 期期2020/11/3352、卵子的形态结构卵母细胞颗粒细胞复合体GV 期MI 期MI异常卵母细胞异常卵母细胞2020/11/336异常卵母细胞2020/11/3361、常规体外授精精卵混合精卵混合精卵结合精卵结合2020/11/3371、常规体外授精体外授精精卵混合精卵结合2020/11/332020/11/3382、卵胞质内单精子注射（ICSI）2020/11/3382020/11/339人胚胎体外发育2020/11/339单原核单原核多原核多原核三原核三原核无原核无原核2020/11/340异常受精单原核多原核三原核无原核2020/11/340胚胎发育阶段：卵裂球的数目胚胎形态学评分：胚胎的碎片评分：8-1-18-2-18-2-32020/11/341胚胎发育阶段：卵裂球的数目卵裂期评分标准8-1-18-2-11期：囊胚腔小于胚胎体积的一半2期：囊胚腔大于胚胎体积的一半3期：完全囊胚，囊胚腔与胚胎体积相等1期期2期期3期期2020/11/3421期：囊胚腔小于胚胎体积的一半囊胚的发育阶段1期2期3期204期期5期期6期期4期：扩张囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明带变薄期：扩张囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明带变薄5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出期：孵化囊胚，胚胎部分孵出6期：完全孵化囊胚期：完全孵化囊胚2020/11/3434期5期6期4期：扩张囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明带变薄202胚胎移植数目：35岁以下第一周期：2个35岁以上或者第二周期以上：3个单胚胎移植：2020/11/344胚胎移植数目：胚胎移植2020/11/344胚胎移植管胚胎移植管空气空气空气空气胚胎胚胎培养基培养基2020/11/345胚胎移植管装载胚胎移植管空气空气胚胎培养基2020/11/31、精子冷冻：2、卵子冷冻：3、胚胎冷冻：4、生殖组织冷冻：2020/11/3461、精子冷冻：配子和胚胎的冷冻及复苏2020/11/346程序化冷冻（慢速冷冻）玻璃化冷冻（快速冷冻）2020/11/347程序化冷冻（慢速冷冻）冷冻方法2020/11/347Slow cooling-0.3C/min慢速冷冻法慢速冷冻法将胚胎放入含有一定浓度的冷冻保护剂处理后，慢速降温（0.23/min）,在这个过程中，随着细胞外温度的逐渐降低和细胞外冰晶的形成，细胞以一种平衡的方式逐步脱水。直到温度降至-150，至于液氮保存。2020/11/348Slow cooling-0.3C/min慢速冷冻法20Vitrification-50.000C/min1 sec.玻璃化冷冻法玻璃化冷冻法采用更高浓度的冷冻保护剂处理细胞，快速降温，使细胞内外的液体均达到玻璃化状态2020/11/349Vitrification-50.000C/min1 玻璃化冷冻过程（两步平衡法玻璃化冷冻过程（两步平衡法）在不同浓度的冷冻液中进行平衡在不同浓度的冷冻液中进行平衡ESVS2020/11/350玻璃化冷冻过程（两步平衡法）ESVS2020/11/3502.装管装管3.投入液氮，在液氮罐中保存。投入液氮，在液氮罐中保存。2020/11/3512.装管3.投入液氮，在液氮罐中保存。2020/11/35冷冻前置入冷冻液后0min置入冷冻液后4min置入冷冻液后8min2020/11/352冷冻前置入冷冻液后0min置入冷冻液后4min置入冷冻液后8囊胚冷冻前人工皱缩皱缩前皱缩后2020/11/353囊胚冷冻前人工皱缩皱缩前皱缩后2020/11/353控制性超排卵控制性超排卵B B超监测下取卵超监测下取卵体外受精和胚胎培养体外受精和胚胎培养胚胎活检胚胎活检对活检的细胞进行检测对活检的细胞进行检测选择胚胎移植入宫腔选择胚胎移植入宫腔植入前遗传学诊断植入前遗传学诊断(PGD)(PGD)2020/11/354控制性超排卵胚胎活检植入前遗传学诊断(PGD)2020/11常染色体隐性遗传病常染色体隐性遗传病-thalassaemia-thalassaemiaCystic fibrosisCystic fibrosisSpinal muscular Spinal muscular atrophyatrophySickle cell diseaseSickle cell disease常染色体显性遗传病常染色体显性遗传病Huntingtons diseaseHuntingtons diseaseMyotonic dystrophyMyotonic dystrophyCharcot-Marie-Charcot-Marie-Tooth diseaseTooth disease性染色体遗传病性染色体遗传病Fragile X syndromeFragile X syndromeDMDDMDHaemophiliaHaemophiliaPGDPGD适应证适应证-单基因性疾病单基因性疾病2020/11/355常染色体隐性遗传病常染色体显性遗传病PGD适应证-单基因性疾相互易位相互易位罗氏易位罗氏易位非整倍体筛查非整倍体筛查2020/11/356PGD适应证-染色体病相互易位2020/11/356卵裂期活检卵裂期活检囊胚期活检囊胚期活检2020/11/357胚胎活检卵裂期活检囊胚期活检2020/11/3572020/11/358男方45，XY，t(13;14)(p10;q10)胚胎D 非整倍体非整倍体筛查-SNP芯片芯片2020/11/359非整倍体筛查-SNP芯片2020/11/3592020/11/3602020/11/3602020/11/361谢谢2020/11/361谢谢观赏谢谢观赏谢谢观赏